術前間質化療對高分化口腔鱗狀細胞癌組織中COX-2表達及癌周淋巴管密度的影響

金光澤，樸虎雄，李京旭，玄云澤

(延邊大學附屬醫院，吉林延吉 133000)

口腔鱗狀細胞癌(OSCC)發病率占口腔癌的80%以上，目前采用手術為主，化療、放療為輔的綜合治療方案，因手術常不能保證完全切除殘留癌灶及轉移灶，易局部復發及淋巴結轉移。淋巴管生成及淋巴管密度(LVD)與淋巴結轉移密切相關。全身靜脈化療雖能殺死一定的腫瘤細胞，但對正常組織細胞亦能造成損害。局部植入化療藥物可提高局部組織藥物濃度，減輕正常組織損害。本研究采用免疫組化法檢測了術前緩釋氟尿嘧啶(5-FU)間質化療、術前平陽霉素靜脈化療及術前未化療患者OSCC組織中環氧化酶2(COX-2)表達及D2-40標記的LVD，探討術前間質化療對淋巴管形成及淋巴結轉移的影響，為OSCC術前間質化療的臨床應用提供依據。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇延邊大學附屬醫院口腔科2001～2009年收治并經病理確診的60例高分化OSCC患者，男47例、女13例;年齡29～80歲，平均60.1歲。其中舌癌17例，口底癌18例，頰癌6例，軟腭癌3例，牙齦癌8例，唇癌8例。根據世界抗癌聯盟(UICC)TNM臨床分類分期方法(2002)分為Ⅰ期29例、Ⅱ期24例、Ⅲ期7例。15例患者進行了術前緩釋5-FU間質化療(間質化療組)，將5-FU緩釋劑200 mg(100 mg/支，植入劑為白色圓柱形顆粒，長4 mm，直徑0.8 mm)植入腫瘤組織、瘤周組織后7～10 d均行手術。15例患者進行了術前平陽霉素靜脈化療(靜脈化療組)，鹽酸平陽霉素注射劑(8 mg/支)8 mg，以生理鹽水溶解后靜脈注射，連續8～12 d。化療完成后1周內，如無手術禁忌則行手術。30例患者術前未接受過任何抗腫瘤藥物治療(未化療組)。術前交代病情及治療方案，征得患者及其家屬同意。三組一般資料具有可比性。

1.2 COX-2及LVD測算方法 取腫瘤組織及距腫瘤邊緣3 cm組織石蠟標本，每個標本連續切片4張、厚4 μm，3張免疫組織化學染色，1張進行HE染色。采用Envision二步法行免疫組化染色，脫蠟，檸檬酸鹽緩沖液高壓抗原修復，3%H2O2阻斷內源性過氧化酶，滴加一抗(COX-2，D2-40)，4℃冰箱過夜，滴加二抗，37℃溫箱孵育，DAB顯色，蘇木素復染，脫水，透明，鏡下觀察。COX-2陽性反應為棕黃色顆粒，主要定位于腫瘤細胞的胞質內，在高倍鏡(×400)下隨機觀察5 個視野，參照 Takahashi［1］雙評分半定量法進行評分，無陽性細胞為0分，陽性細胞百分數≤25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，≥76%為4分;細胞染色程度評分:不著色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。每張切片的陽性細胞百分數和染色程度兩項得分之和≥3分即為COX-2陽性。D2-40陽性判斷標準及LVD計數方法:D2-40陽性部位為細胞質/膜，以棕、黃染的單個內皮細胞或內皮細胞團作為計數單位，可有或無管腔。凡在腫瘤組織中與鄰近微血管、癌細胞、間質組織分界清楚的任何一個染成棕色、黃色的細胞或細胞團均認為是一個微淋巴管。參照Weidner［2］方法進行淋巴管計數，先于低倍鏡(×100)下觀察癌及癌旁組織中染色最豐富區，然后再于高倍鏡(×400)下分別計數，每例計數4個視野，取其平均值為LVD。

1.3 統計學方法 采用SPSS17.0統計軟件。計量資料以表示，組間比較采用方差分析，計數資料比較采用χ2檢驗。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

間質化療組、靜脈化療組、未化療組癌組織中COX-2 陽性表達率分別為 40.0%(6/15)、66.7%(10/15)、83.3%(25/30)，三組間比較，P 均 ＜0.05。D2-40標記陽性的脈管管壁較薄，多數不完整，形態不規則、管腔大小不一，管壁無肌層，且無紅細胞和中性粒細胞填充，符合淋巴管形態特點。淋巴管主要分布于腫瘤邊緣區，數目較多，多表現為管腔不同程度的擴張，并有破壞現象，而腫瘤中心的淋巴管數目稀少，多表現為管腔閉鎖狀態或條索狀。間質化療組、靜脈化療組、未化療組癌組織中LVD分別為(1.07 ±0.52)、(1.98 ±0.88)、(2.98 ±1.23)支/mm2，三組間比較，P 均 ＞0.05;癌周 LVD分別為(4.02 ±0.88)、(8.12 ±0.79)、(12.22 ±2.25)支/mm2，三組間比較，P 均 ＜0.05。

未化療組癌組織中COX-2表達陽性25例、陰性5例，二者癌周 LVD 分別為(12.91±1.66)、(8.75 ±1.40)支/mm2，二者比較，P ＜0.01;間質化療組、靜脈化療組癌組織中COX-2表達陽性16例、陰性14例，癌周 LVD 分別為(6.66 ±2.11)、(4.88±2.10)支/mm2，二者比較，P ＜0.05。未化療組有淋巴結轉移14例、無淋巴結轉移16例，二者癌周LVD 分別為(13.79 ± 1.76)、(10.84 ± 1.66)支/mm2，癌組織中COX-2陽性表達率分別為100.0%、68.8%，二者癌周LVD、癌組織中COX-2陽性表達率比較，P均＜0.01。間質化療組、靜脈化療組有淋巴結轉移5例、無淋巴結轉移25例，二者癌周LVD分別為(7.70 ±2.05)、(5.74 ±2.17)支/mm2，癌組織中COX-2陽性表達率分別為100.0%、44.0%，二者癌周LVD、癌組織中COX-2陽性表達率比較，P均 ＜0.05。

3 討論

淋巴結轉移是影響惡性腫瘤預后的主要因素。單純手術治療并不能有效清除OSCC所有病灶，尤其肉眼無法看到的微小病灶或轉移灶，從而導致術后復發［3］。平陽霉素是對鱗狀細胞癌較有效的一種抗生素類細胞周期非特異性抗腫瘤藥物，目前已廣泛用于OSCC的圍術期治療［4］。緩釋5-FU是細胞周期特異性化療藥物，其優勢在于較高的局部藥物濃度和較小的全身不良反應，術前間質化療可降低癌細胞活力，消滅微小轉移灶，改善患者預后［5］。

COX-2是一種誘導型酶，有促進腫瘤組織中新生血管及淋巴管生成等多種功能［6，7］。本研究中COX-2在間質化療組中陽性率最低，3組間差異顯著，說明間質化療可有效抑制OSCC組織中COX-2表達。

D2-40是新近發現的淋巴管內皮細胞特異性標記物，在淋巴管內皮細胞中表達，其特異性和敏感性較高，而在血管內皮細胞內呈陰性反應。文獻［8～11］報道，腫瘤內存在新生淋巴管，其中癌周淋巴管可能是腫瘤轉移的功能性淋巴管，與淋巴結轉移關系密切，且腫瘤組織內淋巴管的數量或密度與癌細胞的淋巴結轉移率呈正相關。本研究3組中癌組織內LVD無明顯差異，但癌周LVD未化療組高于化療組，靜脈化療組高于間質化療組，且有淋巴結轉移者高于無淋巴結轉移者，推測間質化療可能通過癌周淋巴管生成而減少淋巴結轉移。研究［12，13］發現，宮頸癌和胃癌組織中COX-2表達水平增高與腫瘤淋巴管形成及淋巴結轉移密切相關。本研究結果表明，COX-2表達陽性者LVD顯著高于COX-2表達陰性者，而在術前未化療組中，COX-2表達及癌周LVD與淋巴結轉移密切相關，推測COX-2表達與淋巴管形成密切相關，COX-2高表達可能促進腫瘤周邊淋巴管形成，并參與淋巴結轉移。

綜上所述，術前間質化療能有效降低OSCC組織中COX-2表達及LVD，抑制癌周淋巴管形成。

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