結腸安腸溶片劑的質量標準研究

張葉明，繆冬冬，王 會，劉曉平

（皖南醫學院 藥學院，安徽 蕪湖 241000）

結腸安腸溶片是以傳統醫學理論為基礎，結合現代化學、藥學研究和臨床使用經驗而制成的中藥復方制劑，由黃柏、白頭翁、白芍、白術和炙甘草等五位中藥制備的腸溶片劑.臨床上用于潰瘍性結腸炎活動期的治療，適用于傳統醫學辨證為濕熱蘊結型、脾虛夾濕型的慢性潰瘍性結腸炎.方中黃柏和白頭翁共為君藥，現代藥理學研究表明兩藥都具有清熱燥濕，瀉火去蒸，解毒療瘡、涼血止痢等作用，臣藥、佐藥、使藥分別為白術、白芍和炙甘草，具有補脾解毒之效[1-4].為了控制片劑質量，參考相關文獻[5-10]，對黃柏、白頭翁和炙甘草進行了薄層鑒別，通過HPLC法對制劑中鹽酸小檗堿進行了定量測定.

1 材料

1.1 儀器

HeiDolph-LR400/401旋轉蒸發儀（德國海道爾夫公司），HH-S數顯恒溫水浴鍋（金壇市江南儀器制造公司），KQ-250DE數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限責任公司），AUW-220D型底子天平（日本島津公司），LC-20AT高效液相色譜儀，色譜柱為KromasilC18(4.6mm×200mm)（大連中匯達科學儀器公司），SPD-M20A紫外檢測器（SHIMADZA），CTO-10AS柱溫箱.

1.2 藥品及試劑

結腸安腸溶片劑自制，批號為：20141201、20141202、20141203；鹽酸小檗堿標準品（商品號：0915-201312）購于安徽省藥品生物制品檢定所；薄層硅膠G，青島海洋生物制品廠；乙腈是色譜純，其余試劑都是分析純，水為二重蒸餾水.

2 方法與結果

2.1 定性鑒別

2.1.1 黃柏鑒別

取制劑1片，去除外層薄膜衣，研碎.精密稱得0.2g，加入10.0ml甲醇.索氏提取30.0min，濾液定容至10.0ml備用，同樣方法制得沒有黃柏藥材的陰性溶液.稱取黃柏對照藥材0.5g，按上操作配置成對照藥材溶液.稱取鹽酸小檗堿對照品，加入甲醇配成濃度為0.5mg/ml溶液.吸取上述4種溶液各1.0μl，在薄層硅膠G板上點樣，用苯—乙酸乙酯—異丙醇—甲醇(12.0：6.0：3.0：3.0)作展開劑，置飽和氨蒸氣的展開缸內，晾干，放于紫外光燈(365nm)條件下視檢.供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相對應的位置上，顯相同黃色熒光斑點[11-12].如圖1所示.

圖1 黃柏鑒別TCL圖

2.1.2 白頭翁鑒別

圖2 白頭翁鑒別TCL圖

精確稱取剔除薄膜衣后研碎的粉末0.5g，與30.0ml乙醇混合，超聲30.0min，加熱濃縮過濾液至2.0ml即得，同樣方法制得藥材溶液和陰性對照品溶液.吸取上述3種溶液各3.0μl，在薄層硅膠G板上點樣，以氯仿—水—甲醇(16.0：2.0：5.0)下層溶液為展開劑，展開、晾干，噴10%的硫酸乙醇溶液，加熱至斑點清晰[13].供試品色譜中，在與藥材相對應的位置上，顯示顏色相同的斑點.如圖2所示.

2.1.3 炙甘草鑒別

精確稱取剔除薄膜衣后研碎的粉末5.0g，加1.0ml鹽酸、15.0ml氯仿，索氏提取70.0min得過濾液，用20.0ml氨試液萃取過濾液，除去氨試液，蒸干氯仿液，加2.0ml乙醇溶解殘渣即得.同樣操作制成陰性樣品溶液和對照藥材溶液.稱甘草次酸對照品，加乙醇配成濃度為1.0mg/ml的溶液，作為對照品溶液.吸取上述3種溶液各3.0μl，在薄層硅膠G板上點樣，以氯仿—石油醚(30～60℃)—乙酸乙酯—冰醋酸(20.0：10.0：7.0：0.5)的溶液為展開劑，展開、晾干，噴 10%磷鉬酸的乙醇溶液，加熱至斑點清晰[14].供試品色譜中，在與對照品、對照藥材色譜相對應的位置，顯顏色相同的斑點，如圖3所示.

圖3 炙甘草鑒別TCL圖

2.2 含量測定

2.2.1 色譜條件

色譜柱為 KromasilC18(4.6mm×200mm)、0.033mol/L磷酸二氫鉀—乙腈(18：7)為流動相、檢測波長為350nm、柱溫為室溫、流量為0.80ml/min、按鹽酸小檗堿峰計算理論板數應不得低于3000[15].

2.2.2 對照品溶液的制備

準確稱量負壓干燥24h后的鹽酸小檗堿對照品，加乙醇配成濃度為0.2mg/ml的標準品溶液.

2.2.3 供試品溶液的制備

精密稱量剔除薄膜衣后的粉末0.6g，加入適量乙醇，索氏提取5.0h，蒸干提取液，到15ml大小的量瓶中定容，用0.45μm的濾膜過濾即得.

2.2.4 測定方法

準確吸取對照品溶液5μL、供試品溶液10μL，分別注入高效液相色譜儀進行測定.

2.2.5 方法學考察

2.2.5.1 線性范圍的考察

準確量取鹽酸小檗堿對照品適量，加乙醇配成每濃度為0.238mg/ml的溶液，依次準確吸取對照品溶液1μl、3μl、5μl、7μl和 9μl，分別注入高效液相色譜儀，結果如表1.

分別以進樣量、峰面積值為橫、縱坐標作圖，得到一條近似通過原點的直線（見圖4）.回歸方程為Y=4980011.617X－226631.584，r=0.9996.結果表明：鹽酸小檗堿進樣量在0.239mg至2.141mg之間，進樣量與峰面積值呈現良好的線性關系.

表1 鹽酸小檗堿對照品色譜峰面積值的測定表

圖4 高效液相色譜法繪出鹽酸小檗堿標準曲線

2.2.5.2 精密度考察

反復進同一供試品溶液6次，然后計算RSD，得其結果為2.20%，如表2所示.

2.2.5.3 重現性考察

取第一批次的結腸安腸溶片適量，分5份，剔除薄膜衣，研碎，精密稱取，按照[含量測定]項下的方法操作測定結腸安腸溶片中鹽酸小檗堿的含量.測定結果如表3所示.

2.2.5.4 穩定性實驗

表2 精密度實驗的結果

同時吸取檢測放置了 4h、8h、12h、16h、20h和 24h的供試品溶液中鹽酸小檗堿的含量.穩定性考察相對標準偏差值為2.20%，顯示供試品溶液在24h內穩定，如表4所示.

2.2.5.5 加樣回收率實驗

準確量出鹽酸小檗堿對照品適量，配置成濃度確定的溶液.加到已知鹽酸小檗堿含量的結腸安腸溶片（第一批次藥片中鹽酸小檗堿的含量為0.3445%，詳見重現性實驗）中，按［含量測定］操作，配制供試品溶液.用25ml的容量瓶定容.測定結腸安腸溶片中含鹽酸小檗堿的量，計算回收率（表 5）.

表3 重現性實驗的結果

表4 穩定性實驗的結果

表5 鹽酸小檗堿回收率的實驗的結果

鹽酸小檗堿回收率=（實測值－樣品含量）/對照品加入量×100%

2.2.5.6 鹽酸小檗堿含量測定

取本片劑2片，剔除薄膜衣，研碎，精密稱量0.6g，置于索氏提取器，乙醇作溶媒，加熱回流6個小時，蒸干提取液，定容到10ml的量瓶中，用大小為0.45μm的濾膜濾過，得供試品溶液.測定三批樣品中鹽酸小檗堿的含量（表6）.

表6 三批制劑中含鹽酸小檗堿測定結果

實驗得出：本制劑中鹽酸小檗堿的含量基本保持穩定，因此總含量不超出平均含量的20%為本片劑限度.限定本制劑鹽酸小檗堿含量不得低于0.26%，即每片制劑中鹽酸小檗堿量不得低于1.8mg（每片重量為0.7g）.

3 討論

本課題處方中的五味藥材，通過薄層色譜法對黃柏、白頭翁、和炙甘草進行了定性鑒別，通過HPLC法對黃柏進行了定量鑒別.因本品中的白頭翁、炙甘草在進行液相鑒別時分離度不強，特異性不高，所以采用薄層色譜定性鑒別.

采用HPLC法測定鹽酸小檗堿含量時，標準品和樣品的出峰時間都在18min前后.本課題實驗選擇了兩種流動相乙腈與磷酸二氫鉀水溶液的配比，如20:80，25:75，30:70等，有的配比使得峰型重疊、拖尾，甚至有的配比在規定時間無峰.經過多次探索最終得出在28:72的配比下，出峰時間和峰的形狀都比較理想.

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