黃芪降濁顆粒的提取工藝研究

康新莉，謝 斌，盛 蓉，譚 睿

(1.西南交通大學生命科學與工程學院，四川 成都 610031； 2.成都中醫藥大學附屬醫院，四川 成都 610075)

黃芪降濁顆粒的提取工藝研究

康新莉1，謝 斌1，盛 蓉2，譚 睿1

(1.西南交通大學生命科學與工程學院，四川 成都 610031； 2.成都中醫藥大學附屬醫院，四川 成都 610075)

目的 優選黃芪降濁顆粒的最佳提取工藝。方法 采用 L9（34）正交試驗設計，以黃芪甲苷含量和干膏得率為考察指標，篩選黃芪降濁顆粒的提油和水提的最佳提取工藝。結果 優選的黃芪降濁顆粒提油的最佳工藝條件為8倍量的水提取6 h；水提最佳工藝為15倍量水，煎煮3次，每次1 h。結論 優選的生產工藝合理、可靠，適合現代化大生產。

黃芪降濁顆粒；提取工藝；黃芪甲苷；干膏率

近年來，糖尿病的發病率逐年增高，我國糖尿病患者將近9 240萬人[1]。糖尿病腎病是糖尿病常見的慢性并發癥之一，是糖尿病致殘、致死的重要原因，在糖尿病人群中的發生率為20% ～40%[2]。黃芪降濁顆粒是一種治療糖尿病腎病的經驗方，由黃芪、金櫻子、川芎、雞內金等中藥組方，有活血化瘀、托毒排膿降濁功效。由于本方以湯劑用藥，故對其水提提取工藝進行了研究。

1 儀器與試藥

Waters 2695型高效液相色譜儀，Waters 2424型蒸發光散射（ELSD）檢測器；SL302K型電子天平(上海民橋精密科學儀器有限公司)；ZDHW型電熱套(北京中興偉業公司)；DL-1型調溫電爐（北京永光明醫療儀器廠）；HH-S6型數顯恒溫水浴鍋(北京科偉永興儀器有限公司)；DHG-9053A型數顯恒溫干燥箱（上海精宏實驗設備有限公司）。黃芪 Astragalus membranaceus(Fisch.) Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao、金櫻子 Rosa laevigata Michx.等藥材均購自成都市新荷花藥業公司，經西南交通大學生命科學與工程學院譚睿教授鑒定為正品；黃芪甲苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，批號為110781-200613）；乙腈為色譜純，水為重蒸水。

2 方法與結果

2.1 川芎與莪術揮發油的提取工藝研究

2.1.1 提取時間及加水量考察

川芎與莪術具有活血行氣的功效，而揮發油是其重要的活性成分，故分別測定其揮發油提取率。按處方量配比稱取川芎、莪術藥材3份，置揮發油提取器中，分別加入規定倍量水（見表1），浸泡過夜，按2010年版《中國藥典（一部）》附錄ⅩD揮發油測定法提取揮發油，自水微沸起記錄不同提取時間所得揮發油量。結果表明，提取時間在6 h后提取量無變化，故選擇最佳提取時間6 h；加水量為8倍、10倍時，6 h后的揮發油提取量無明顯差異。考慮到經濟效益，故優選的揮發油提取最佳工藝為加8倍量的水，提取6 h。

表1 川芎和莪術揮發油提取量考察（mL）

2.1.2 驗證試驗

按處方量配比稱取川芎、莪術藥材3份，加8倍量水，用揮發油提取器分別提取揮發油，提取6 h，記錄揮發油量。結果，3次試驗分別提取揮發油1.11，1.15，1.14 mL，平均1.13 mL，表明揮發油提取6 h較完全，且揮發油得率較穩定。

2.2 水提工藝研究

2.2.1 黃芩甲苷含量測定

色譜條件：色譜柱為Diamonsil C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），柱溫為30℃，乙腈-水（36∶64）為流動相，流速為1.0 mL／min；ELSD檢測器條件：增益20，氣壓30 psi，噴霧器加熱60%，漂移管溫度為60℃。理論板數按黃芪甲苷峰計應不低于3 000。

溶液制備：稱取黃芪甲苷對照品13.00 mg，精密稱定，置25 mL容量瓶中，加甲醇定容，搖勻，即得對照品溶液（C=0.52 g／L）。取樣品研細，精密稱定，加水超聲，精密吸取相當于1.975 g黃芪藥材的水提提取液，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次40 mL，合并正丁醇液，用氨試液洗滌3次，每次40 mL，棄去氨液，再用以正丁醇飽和的水溶液洗滌3次，每次40 mL，收集正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇，置5 mL容量瓶中定容，搖勻，取續濾液，即得供試品溶液。

測定方法：分別精密吸取對照品溶液10 μL和20 μL、供試品溶液20 μL，注入液相色譜儀測定，用外標兩點法對數方程計算黃芪甲苷含量。色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜法

精密度試驗：精密吸取同一黃芪甲苷對照品溶液，按擬訂色譜條件重復進樣6次。結果峰面積值的 RSD為1.74%（n=6），表明儀器精密度良好。

重復性試驗：取同一批樣品6份，精密稱定，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進樣測定。結果峰面積值的 RSD為1.93%（n=6），表明方法重復性較好。

穩定性試驗：精密吸取同一供試品溶液，分別于0，2，4，6，8，10，12 h時進樣測定。結果峰面積值的 RSD為1.84%（n=7），表明供試品溶液在12 h內穩定。

加樣回收試驗：取已知含量的同一批樣品6份，精密稱定，分別加入黃芪甲苷對照品溶液適量，按供試品溶液制備方法制備溶液，依法進樣，測定含量，計算回收率。結果黃芪甲苷的平均回收率為99.7%，RSD為2.3%（n=6）。

2.2.2 正交試驗設計

處方主要以水煎為主，故考察處方其余藥材水提工藝。水提工藝研究的主要考察因素有加水量（因素A）、煎煮時間（因素B）和煎煮次數（因素C），按三因素三水平安排正交試驗，設計按處方比例稱取79 g藥材，以綜合評分（黃芪甲苷含量占70%、浸膏得率占 30%）為考察指標，對水提條件進行優選，設計因素水平見表2。

2.2.3 正交試驗方法與結果

按處方量配比稱取（除川芎、莪術）藥材9份，分別按處方量配比稱取的藥材川芎、莪術提油后的藥渣，合并，按正交試驗安排進行提取，提取液合并，濾過，濾液濃縮，置已干燥的容器中，減壓干燥后稱重，計算干浸膏量并測定黃芪甲苷的含量。結果見表3及表4。

表2 水提工藝優選因素水平表

表3 水提工藝優選 L9(34)正交設計表

表4 水提工藝優選方差分析結果

2.2.4 結果分析

黃芪降濁顆粒水提取工藝過程中，不同的工藝參數會影響提取效果，浸膏得率分布在12.35% ～35.92%，黃芪甲苷含量分布在0.134 7～0.387 9 mg／g，綜合評分分布在30.58～100.00分。綜合考慮，以綜合評分為指標時，由表3可見，各因素作用的主次為C＞A＞B；方差分析結果表明，因素 C有顯著影響，因素A和因素 B影響較小，以A3B1C3為佳。最佳提取工藝條件為加15倍量水，煎煮3次，每次1 h。

2.2.5 驗證試驗

按處方比例稱取79 g處方量的藥材，按優選的工藝提油后，藥渣與其他藥材按照優選的工藝進行水提取，即加15倍量水，煎煮3次，每次1 h。以干膏得率和黃芪甲苷含量為考察指標，試驗結果見表5。可見，按篩選的最佳工藝提取，其干膏得率、黃芪甲苷含量基本穩定，RSD為 1.98%（n=3），說明該工藝穩定、可行，確定為最佳提取工藝條件。

表5 水提工藝驗證試驗

3 討論

黃芪降濁顆粒是成都中醫藥大學附屬醫院經過多年臨床實踐總結出來的經驗方，臨床使用多為湯劑，使用不便，為了提高患者用藥依從性，對其提取工藝進行優化，制成適合臨床使用的顆粒制劑。本試驗采用正交設計對其提取工藝進行優化，確定的最佳提取工藝路線穩定可行，適合工業化大生產。

建立色譜條件時，參考相關文獻（大多采用室溫，25～40℃），考慮到ELSD檢測器的特點，溫度太低不利于檢測，采用30℃柱溫進行試驗，結果分離效果好、樣品穩定；同時，參考藥典，在流速為1.0 mL／min條件下，試用乙腈-水（32∶68）、乙腈-水（36∶64）、乙腈-水（40∶60）為流動相，結果以乙腈-水（36∶64）為流動相時，黃芪甲苷目標峰峰形和保留時間較好，故以此為流動相。

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Study on Extracting Process for Huangqijiangzhuo Granules

Kang Xinli1,Xie Bin1,Sheng Rong2,Tan Rui1
(1.Southwest Jiaotong University,Chengdu,Sichuan,China 610031; 2.Teaching Hospital of Chengdu University of T.C.M,Chengdu,Sichuan,China 610075)

Objective To investigated the process of the optimum extraction for Huangqijiangzhuo Granules.M ethods The L9（34）orthogonal experiment design was adopted with the AstragalosideⅣ content and the dry extract yield as the investigating indexes for screening the optimum process conditions of the Water and Extraction for Huangqijiangzhuo Granules.Results The optimized volatile oil extraction conditions were as follows：adding 8 times the amount of water and extracting for 6 h;the optimized water extraction process conditions were as follows：adding 15 times the amount of water,decocting thrice and 1 h each time.Conclusion The optimize process is reasonable,reliable and suitable for modern mass production.

Huangqijiangzhuo Granules;extraction process;AstragalosideⅣ;dry extract rates

TQ461；R284.2

A

1006－4931(2015)23－0042－03

康新莉，女，在讀碩士研究生，藥師，研究方向為民族藥物資源評價，（電子信箱）1315356502＠qq.com；譚睿，女，博士研究生，教授，研究方向為中藥質量標準規范化和新制劑研發，本文通訊作者，（電話）028-8734667（電子信箱）tanrui＠swjtu.edu.cn。

2015-03-27)