TP-IgM-WB法診斷早期先天梅毒的價值

付金玲，曹玉忠，梁 軍

(東莞市婦幼保健院皮膚科1、檢驗科2，廣東 東莞 523000)

TP-IgM-WB法診斷早期先天梅毒的價值

付金玲1，曹玉忠1，梁 軍2

(東莞市婦幼保健院皮膚科1、檢驗科2，廣東 東莞 523000)

目的 評價梅毒螺旋體蛋白印跡試驗(TP-IgM-WB)在診斷早期先天梅毒中的作用。方法對92例梅毒孕婦及其所產93例(1例雙胞胎)新生兒血標本行梅毒螺旋體明膠凝聚實驗(TPPA)、快速血漿反應素環狀卡片試驗（RPR）檢測和TP-IgM-WB檢測，探討TP-IgM-WB在先天梅毒早期診斷中的價值。結果在梅毒孕婦所生的93例新生兒中，常規綜合方法早期診斷先天梅毒26例，TP-IgM-WB法診斷先天梅毒32例，6例TP-IgM-WB血清試驗陽性但常規綜合方法疑似病例經18個月隨訪后最終確診為先天梅毒，兩種方法診斷率比較差異具有統計學意義(χ2=0.031)。結論TP-IgM-WB用于診斷早期先天梅毒優于常規綜合診斷法，值得臨床推廣。

先天梅毒；梅毒螺旋體蛋白印跡試驗；早期診斷

先天梅毒(Congenital syphilis)是指梅毒螺旋體(Treponema pallidum，TP)由母體經過胎盤進入胎兒血循環使胎兒感染而發生的梅毒，可引起胎兒流產、早產、死胎或新生兒全身性感染。先天性梅毒大多癥狀不明顯，多為隱匿感染，更因母體內抗體因素的影響與干擾，其臨床診斷缺乏準確性，難度較大，常延誤治療時機。近年來，其發病率持續增高，逐年攀升，嚴重影響嬰幼兒身心健康，必須引起高度重視。早期診斷、及時治療，對改善新生兒先天性梅毒的預后具有極其重要的意義。目前國內檢測先天梅毒方法很多，除常規診斷方法梅毒螺旋體明膠凝聚實驗(TPPA)、快速血漿反應素環狀卡片試驗(RPR)外，梅毒螺旋體蛋白印跡試驗(Treponema pallidum IgM Western blot，TP-IgM-WB)已有報道[1-2]，并顯示出較高的特異性和敏感性。本文對92例梅毒孕婦及其所產93例(1例雙胞胎)新生兒血標本分別行TPPA、RPR檢測和TP-IgM-WB檢測，現將結果報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 在知情同意的前提下，連續性收集2010年6月至2013年12月東莞市婦幼保健院產科門診確診的110例梅毒孕婦，其中15例梅毒孕婦因胎兒宮內停止發育、流產、胎兒畸形等而終止妊娠，3例失訪，完成隨訪的共有92例梅毒孕婦及其所產93例新生兒(1例雙胞胎)。

1.2 梅毒診斷標準 參照美國疾病預防與控制中心(CDC)診斷標準[3]。符合下列之一者即可診斷：如母親患有梅毒，患兒有早期先天梅毒的臨床表現或者血清快速血漿反應素環狀卡片試驗(RPR)滴度高于母親4倍以上；或者符合可疑診斷標準者，雖然患兒血清學陽性，RPR滴度高于母親，但增高小于2倍或以下，孕母確診為梅毒且妊娠期間未接受過正規治療或未治療或口服紅霉素治療的孕母所生嬰兒梅毒血清學陽性并伴有梅毒臨床表現者。

1.3 標本采集 抽取梅毒孕婦產前靜脈血及梅毒孕婦所生新生兒(1～30 d內)靜脈血，并分離血清送檢，血清標本置于-20℃冰箱低溫保存。

1.4 試劑與檢驗方法 TPPA試劑由日本富士瑞必歐株式會社生產。RPR試劑由上海榮盛生物技術有限公司生產。TP抗體蛋白印跡試劑盒由德國歐蒙醫學實驗室診斷試劑有限公司生產。以上試劑均在有效期內使用并嚴格按試劑說明書操作。

1.5 統計學方法 應用SPSS16.0軟件包進行數據匯總與統計分析。兩組間診斷先天梅毒陽性例數經配對四格表資料的χ2檢驗(McNemar)，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 常規方法檢測結果 在梅毒孕婦所產93例新生兒中，用TPPA、RPR檢測確診的早期先天梅毒為26例，其中7例有先天梅毒典型臨床表現，全身皮膚出現皺褶，四肢軀干鱗屑性斑丘疹、水皰，掌跖輕度脫皮，口周皸裂等皮膚癥狀；2例出現肝脾腫大及骨膜炎。18例新生兒RPR滴度≥母親RPR滴度的4倍。

2.2 TP-IgM-WB檢測結果 在梅毒孕婦所產93例新生兒中，用TP-IgM-WB診斷陽性例數為32例。6例TP-IgM-WB血清試驗陽性但常規綜合方法疑似患者經18個月隨訪后最終確診為先天梅毒。TP-IgM-WB顯色條帶分析顯示，19例IgM抗體47 kD和17 kD條帶均為陽性，13例47 kD和15 kD條帶為陽性。32例TP-IgM-WB陽性患兒RPR試驗滴度＞1:8者占81.25%(26/32)，見表1。

表1 32例TP-IgM-WB陽性血清RPR滴度

2.3 TP-IgM-WB與常規綜合診斷比較 常規綜合方法早期診斷先天梅毒26例，TP-IgM-WB法診斷先天梅毒32例，兩組間診斷先天梅毒陽性例數經配對四格表資料的χ2檢驗(McNemar)，差異有統計學意義(χ2=0.031，P＜0.05)，TP-IgM-WB對先天梅毒的早期診斷優于常規綜合診斷方法。

3 討論

先天梅毒的診斷目前主要還是依靠患兒的病史、臨床表現及實驗室檢查來綜合判斷。對于有早期胎傳梅毒的臨床表現或血清RPR滴度高于母親4倍以上的患兒診斷不難，但在臨床上很多梅毒患兒出生時并無早期胎傳梅毒的臨床表現，且梅毒血清學檢查RPR滴度與產婦分娩時相同或更低，確定診斷比較困難，容易導致漏診。與此同時，常規梅毒血清抗體檢測方法如TPPA、RPR均檢測IgG抗體，此類抗體能通過胎盤，進入胎兒體內，因此在新生兒檢測到RPR及TPPA陽性還不能確認是否患有先天梅毒。對這些可疑病例，在生后0、2、4和6個月監測血清學變化，6個月時如呈陰性，且無先天梅毒的臨床表現，可除外梅毒感染；6個月后若RPR未轉陰，始終維持在低滴度水平，應每3個月檢測TPPA至產后18個月，若TPPA轉陰，可排除感染。這一漫長的隨訪過程容易導致先天梅毒患兒錯失最佳的治療時間，部分失訪患兒也錯失了正規的梅毒治療。所以對無癥狀新生兒先天梅毒的早期診斷方法的研究尤為重要。

梅毒螺旋體像其他微生物一樣，進入機體后首先刺激淋巴細胞產生IgM抗體，然后是IgG和IgA抗體。IgM相對分子質量為900 000，一般不能通過胎盤等生理屏障組織，只有胎兒在宮內受到梅毒感染，在新生兒血清中才會出現特異性TP-IgM抗體，且TP-IgM抗體治愈后可逐漸消退。治療后血清TP-IgM抗體仍為陽性，則提示體內可能殘存梅毒螺旋體；治療后血清TP-IgM抗體陰性的患者，隨訪時TP-IgM抗體轉為陽性，表明患者再次感染梅毒[4]。梅毒孕婦的IgG抗體可穿透胎盤滋養層，進入到胎兒的血液循環中去。因此，對常規梅毒血清學檢測法TPPA及RPR檢測出的抗體很難判定是否來自胎兒本身。故患兒特異性TP-IgM抗體陽性是診斷先天梅毒的有力證據[5-6]。

蛋白印跡是20世紀80年代發展起來的一種先進的檢測技術，根據抗原抗體的特異性結合來檢測復雜樣品中某種蛋白的免疫生化技術。試驗中，血清抗體與固相分離的天然或重組抗原結合后，通過與酶標記的IgG/IgM二抗結合以及酶標二抗與底物的顯色反應而顯示抗原特異性條帶，特異性條帶的數目和深淺作為判斷檢測結果，檢測梅毒特異性多肽抗原不需特殊的儀器設備，觀察結果不帶有主觀性。其他的IgM檢測法需先分離血清IgG抗體，以防止IgG與IgM抗體競爭特異性抗原結合位點，導致IgM抗體的假陽性，WB法則不受IgG抗體存在的影響，對其他非梅毒螺旋體標本沒有生物假陽性[7-8]。因此使用蛋白印跡試驗檢測TP-IgM抗體，具有較高的敏感度和特異度。

本研究中筆者分別對92例梅毒孕婦及其所產93例(1例雙胞胎)新生兒血標本行TPPA、RPR檢測和TP-IgM-WB檢測，結果顯示，常規綜合方法早期診斷先天梅毒26例，TP-IgM-WB早期診斷先天梅毒32例，6例TP-IgM-WB血清試驗陽性但常規綜合方法疑似病例經18個月隨訪后最終確診為先天梅毒。結果表明,TP-IgM-WB法用于先天梅毒診斷有較高的敏感性和特異性；與常規TPPA及RPR檢測方法相比，TP-IgM-WB方法假陽性率和誤診率更低，準確率更高。提示在早期診斷先天梅毒中，TP-IgM-WB法具有高于常規診斷方法的價值，值得臨床上大力推廣應用。新生兒先天梅毒TP-IgM-WB顯色條帶分析顯示，19例IgM抗體47 kD和17 kD條帶均為陽性，13例47kD和15 kD條帶為陽性。證明天然螺旋體抗原中47 kD和17 kD抗原量和免疫原性可能最強，提示在TP-IgM-WB診斷試劑的開發中，可選擇47 kD和17 kD抗原用于臨床診斷。

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Diagnostic value of TP-IgM-WB for early congenital syphilis.

FU Jin-ling1,CAO Yu-zhong1,LIANG Jun2. Department of Dermatology1,Department of Clinical Laboratory2,Maternal and Child Health Hospital of Dongguan City,Dongguan 523000,Guangdong,CHINA

ObjectiveTo evaluate the role of TP-IgM-WB for the diagnosis of early congenital syphilis.MethodsTraditional comprehensive approach(TPPA and RPR)and TP-IgM-WB were used to test the sera of 93 neonates born by 92 pregnant women with syphilis.The value of TP-IgM-WB in the diagnosis of early congenital syphilis was investigated.ResultsIn the 93 neonates,26 were diagnosed as early congenital syphilis by traditional comprehensive approach(TPPA and RPR),and 32 were diagnosed as early congenital syphilis by TP-IgM-WB.The 6 suspected cases by traditional comprehensive approach with positive serological response to TP-IgM-WB were confirmed as early congenital syphilis finally after 18 months of follow-up.There was a significant difference between the two methods(χ2=0.031).ConclusionThe TP-IgM-WB as a diagnostic method for early congenital syphilis is superior to traditional comprehensive approach,which deserves clinical expansion.

Congenital syphilis;TP-IgM-WB;Early diagnosis

R759.1

A

1003—6350（2015）05—0682—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.05.0244

2014-08-03)

東莞市科技局資助項目（編號：201310515000105）

付金玲。E-mail：fujl589@163.com