熱毒寧注射液超濾過程色澤控制研究

朱兆林 丁 崗,2

（1.南京中醫(yī)藥大學(xué)，江蘇 南京210029；2.江蘇康緣現(xiàn)代中藥研究院，江蘇南京211100）

0 引言

熱毒寧注射液是江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司研制的原國家二類新藥，處方中含有金銀花、青蒿、梔子3味藥材，用于治療上呼吸道感染（外感風(fēng)熱癥）所致的高熱等病癥[1]。

熱毒寧注射液超濾前后的藥液是含多種成分的混合物，既含有有效成分，又含有無效雜質(zhì)，如不盡量去除雜質(zhì)，會影響制劑的質(zhì)量和穩(wěn)定性。因此，在熱毒寧注射液生產(chǎn)過程中應(yīng)用了兩級膜超濾及膜過濾的工藝對藥液進行精制。

王永香[2]等在聚砜超濾膜對熱毒寧注射液脫炭液的純化工藝研究中得出，聚砜材質(zhì)截留相對分子質(zhì)量5 000的板式膜能夠100%去除藥液中的細菌內(nèi)毒素。江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司的相關(guān)人員對其安全性已經(jīng)進行了較為深入的研究，經(jīng)過兩級超濾膜超濾后，聚砜材質(zhì)截留相對分子質(zhì)量10 000的中空纖維膜對熱毒寧注射液脫炭液中的草酸鹽及樹脂有明顯的去除效果。

李淼[3]等在熱毒寧注射液生產(chǎn)過程中的關(guān)鍵工序?qū)毦鷥?nèi)毒素的去除效果研究中，采用動態(tài)濁度法對活性炭吸附率以及10×103截留超濾對細菌內(nèi)毒素的去除率進行了考察，發(fā)現(xiàn)活性炭的吸附率為78.7%、細菌內(nèi)毒素的去除率為99.6%。超濾技術(shù)過程簡單高效、無相變、節(jié)能、無二次污染，在中藥成分的分離、純化和精制中發(fā)揮了重要作用，尤其能顯著提高中藥注射劑的安全性、穩(wěn)定性及質(zhì)量可控性[4]。

江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司在超濾工藝方面進行了較多的研究[5-7]。本文主要針對超濾過程對熱毒寧注射液的色澤控制進行了研究。

色澤是指中藥注射劑由于其原料的影響，允許有一定的色澤范圍，但同一批號成品的色澤必須保持一致，在不同批號的成品間，也應(yīng)控制在一定的色差范圍內(nèi)。

與2010版《中國藥典》方法配制的比色對照液比較，色差應(yīng)不超過規(guī)定色號的±1個色號；靜脈注射劑的顏色不宜過深，以便于可見異物的檢查和控制。

熱毒寧注射液成品的色澤經(jīng)與黃色標(biāo)準(zhǔn)比色液（2010版《中國藥典》一部附錄ⅪA）比較，應(yīng)控制在3～5號。因熱毒寧注射液在滅菌后色澤稍有加深，因此超濾后的藥液色澤最好控制在3～4號，不宜超過4號。

1 儀器和材料

10 000板式膜組件（超濾系統(tǒng)為：JMCDCUF800，16塊膜，2.5 m2/塊；截留相對分子質(zhì)量為10×103，聚醚砜材質(zhì)，Millpore）；電機為DV160L4/V，SEW電機（蘇州）有限公司。

10 000中空纖維超濾膜組件（5個模組，規(guī)格型號CLW（N）-05，90 mm×1.1 m，纖維內(nèi)徑0.2 mm，纖維外徑0.4 mm，截留相對分子質(zhì)量為10×103，聚砜材質(zhì)PS），北京旭邦膜設(shè)備有限公司；Y100L1-4型變頻調(diào)速交流三相異步電機，天津大明電機股份有限公司。

Y-1-10型標(biāo)準(zhǔn)比色液，上海市食品藥品檢驗所。

2 方法與結(jié)果

2.1 相關(guān)測定

2.1.1 試驗樣品的制備

小容量注射劑車間按照熱毒寧注射液生產(chǎn)工藝要求，制備熱毒寧注射液10 000超濾前液適量，備用。

2.1.2 色澤的測定

熱毒寧注射液生產(chǎn)過程中溶液的顏色檢查：取待測樣品2 mL，加水稀釋定容至100 mL，與黃色標(biāo)準(zhǔn)比色液（2010版《中國藥典》一部附錄ⅪA）比較，應(yīng)符合熱毒寧注射液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，即藥液色澤為3～5號。

2.1.3 蛋白質(zhì)的測定

蛋白質(zhì)檢測方法[2，7]：取藥液1 mL，加新鮮配制的30%磺基水楊酸試液1 mL，混合放置5 min，不得出現(xiàn)混濁，則判為陰性。

2.1.4 樹脂的測定

樹脂檢測方法[2，7]：取藥液5 mL，加（濃）鹽酸1滴，放置30 min，應(yīng)無明顯的混濁或沉淀，則判為陰性。

2.1.5 草酸鹽的測定

草酸鹽檢測方法[2，7]：取藥液2 mL，加3%氯化鈣試液2～3滴，放置10 min，不得出現(xiàn)混濁或沉淀，則判為陰性。

2.1.6 梔子苷的測定[2，7]

（1）采用高效液相色譜法，色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗設(shè)計：色譜柱PhenomenexC18（250 mm×4.6 mm，5 μm），以0.05 mol/L磷酸氫二鈉（用磷酸調(diào)pH6.0）-乙腈（88:12）為流動相，檢測波長237 nm，理論板數(shù)按梔子苷峰計算不低于2 500。

（2）對照品溶液的制備：精密稱取梔子苷對照品適量，加甲醇-水（1:1）溶解，制備成約含梔子苷0.06 mg/mL的溶液，搖勻，即得。

（3）供試品溶液的制備：精密量取供試品溶液1 mL，置于100 mL容量瓶中，加50%甲醇水溶液稀釋至刻度，搖勻，備用。

（4）再精密量取（3）中備用液5 mL，置于10 mL容量瓶中，加50%甲醇水溶液稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

（5）測定方法：分別精密量取對照品及供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，用外標(biāo)一點法計算即得。

超濾前后藥液中梔子苷的轉(zhuǎn)移率＝C2M2/C1M1

式中 C1——超濾前藥液中梔子苷的含量，mg/mL；

M1——超濾前藥液的重量，kg；

C2——超濾后藥液中梔子苷的含量，mg/mL；

M2——超濾后藥液的重量，kg。

2.1.7 綠原酸的測定[2，7]

（1）采用高效液相色譜法，色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗設(shè)計：色譜柱PhenomenexC18（250 mm×4.6 mm，5 μm），以1%醋酸水溶液-甲醇（80:20）為流動相，檢測波長327 nm，理論板數(shù)按綠原酸峰計算不低于3 000。

（2）對照品溶液的制備：精密稱取綠原酸對照品6 mg，置于100 mL容量瓶中，加1%醋酸水溶液-甲醇（1:1）溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

（3）供試品溶液的制備：精密量取供試品溶液1 mL，置于100 mL容量瓶中，加1%醋酸水溶液-甲醇（1:1）溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

（4）測定方法：分別精密量取對照品及供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，用外標(biāo)一點法計算即得。

超濾前后藥液中綠原酸轉(zhuǎn)移率＝C2M2/C1M1

式中 C1——超濾前藥液中綠原酸的含量，mg/mL；

M1——超濾前藥液的重量，kg；

C2——超濾后藥液中綠原酸的含量，mg/mL；

M2——超濾后藥液的重量，kg。

2.2 正交試驗設(shè)計

針對熱毒寧注射液10 000超濾過程中對色澤的影響，從超濾液的pH值（A）、超濾液的溫度（B）、板式膜及中空纖維膜的超濾比例（C）、超濾過程中膜的進出口壓力差（D）這4個因素，每個因素選擇3個水平，采用L（934）正交設(shè)計因素水平表（表1），考察10 000超濾過程對色澤的影響。正交試驗設(shè)計及結(jié)果如表2所示。方差分析如表3所示。

表1 影響10 000超濾膜的因素水平

表2 正交試驗設(shè)計及結(jié)果

表3 方差分析

通過極差R值大小及趨勢顯示，各因素對色澤影響大小的順序為：板式膜和中空纖維膜的超濾比例＞超濾前藥液pH值＞超濾過程中膜的進出口壓力差＞超濾液的溫度。通過正交試驗表得出最終的優(yōu)選的超濾參數(shù)為：A2B2C2D3，即超濾前藥液pH＝4.6，藥液在30 ℃保溫條件下，10 000超濾過程中保持進出口壓力差在0.05～0.07 MPa，采用板式膜和中空纖維膜的超濾比例為1:1。

同時，采用優(yōu)化后的超濾方法進行熱毒寧注射液生產(chǎn)，檢測相應(yīng)的指標(biāo)性成分如表4所示。

表4 藥液超濾前后兩種檢測結(jié)果對比

從表4可以得出：

（1）藥液在優(yōu)化前與優(yōu)化后，其可見異物、蛋白質(zhì)、草酸鹽、樹脂等檢測指標(biāo)無顯著差異；

（2）有效成分梔子苷、綠原酸轉(zhuǎn)移率稍有變化，但優(yōu)化前后兩者的轉(zhuǎn)移率仍都能達到95%以上；

（3）超濾對藥液的影響是多方面、多層次的，對藥液的其他影響還需要作進一步的系統(tǒng)研究。

3 結(jié)語

目前在熱毒寧注射液生產(chǎn)過程中，采用10 000分子量及50 00分子量的超濾膜對其進行超濾，超濾過程對藥液的色澤控制有重要影響。通過10 000超濾過程對色澤的研究，使熱毒寧注射液在生產(chǎn)過程中的控制又增加了有力的依據(jù)。藥品溶液顏色檢查是控制藥品中有色雜質(zhì)限量的方法，主要控制由生產(chǎn)制備中可能引入的有色雜質(zhì)或貯存中由于藥品不穩(wěn)定而產(chǎn)生的有色產(chǎn)物。有色雜質(zhì)的量在一定程度上也可以用來判斷該藥品的純度，這種方法已經(jīng)成為藥品質(zhì)量安全檢驗的一個有效的簡易方法，通過對藥品外觀顏色以及有色雜質(zhì)呈現(xiàn)出的不同顏色的深淺去判斷有色雜質(zhì)的量，最終確定該藥品是否符合藥品質(zhì)量安全標(biāo)準(zhǔn)。

近年來，現(xiàn)代膜分離技術(shù)因其高效、節(jié)能等優(yōu)勢日益在制藥工業(yè)中得到應(yīng)用。20世紀(jì)80年代初，日本漢方制劑專利中已采用微濾澄清水煎液再超濾除雜的工藝。國內(nèi)近幾十年來，在中藥制藥方面關(guān)于膜分離的研究有所發(fā)展，但依然處于起步階段，遠遠不能滿足中藥生產(chǎn)發(fā)展的需要。

本文僅從熱毒寧注射液生產(chǎn)過程中采用兩種10 000分子量超濾膜進行對比實驗，在實際生產(chǎn)過程中還要對原材料的質(zhì)量、脫碳工藝、有效成分的轉(zhuǎn)移率、灌封過程、滅菌過程、穩(wěn)定性考察數(shù)據(jù)等進行深入控制檢查。同時還要考慮藥液本身的變化和超濾膜的清洗和應(yīng)用的效果。在后續(xù)的生產(chǎn)過程中，具體細節(jié)控制還有待于進一步細致的探討和研究。

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