微生物標本培養前涂片革蘭染色鏡檢的臨床意義

張國英，夏學紅

(南京中醫藥大學附屬南京市中西醫結合醫院檢驗科，江蘇南京210014)

微生物標本培養前涂片革蘭染色鏡檢的臨床意義

張國英，夏學紅

(南京中醫藥大學附屬南京市中西醫結合醫院檢驗科，江蘇南京210014)

目的探討臨床上微生物送檢標本在培養前進行涂片鏡檢的臨床意義。方法對365例臨床送檢的不同類型的微生物標本先進行涂片染色檢查，再接種進行培養，分析二者的符合率。結果365例送檢標本中，有痰液標本211例，尿液標本40例，分泌物標本76例，其他標本(主要是膿液及胸腹水標本)38例，其中有不合格標本17例。348例合格標本中培養陽性93例，其中痰液標本、尿液標本、分泌物標本和其它標本的涂片與培養結果間差異無統計學意義(P均＞0.05)，符合率分別為76.6%、62.5%、87.1%和80.0%。結論微生物標本培養前的涂片鏡檢不僅可以檢查送檢標本的質量，而且可以減少培養結果的誤差，有效提高標本培養的陽性檢出率，在實際微生物檢驗工作中具有十分重要的意義。

涂片;鏡檢;培養;微生物標本

隨著國家抗菌藥物整治工作的深入，臨床對微生物檢驗結果的依賴程度越來越高，微生物培養及藥物敏感性結果逐漸成為指導臨床感染性疾病診斷和治療的重要依據。檢驗結果是否準確可靠直接關系到臨床醫生合理用藥是否有效[1]。而微生物送檢標本質量的好壞，病原微生物能否被及時、有效地檢出，均關系到藥物敏感性結果的準確與否。如何及時篩除臨床不合格的送檢標本，如何盡早發現有意義的致病菌，對送檢標本進行培養前的涂片染色鏡檢應該是行之有效的方法和手段。

材料和方法

一、材料

1.標本來源收集2013年從南京市中西醫結合醫院病區和門診送檢的微生物標本365例，其中痰液標本211例、尿液標本40例、分泌物標本76例、其它標本(主要是膿液及胸腹水標本) 38例。標準菌株[金黃色葡萄球菌(ATCC 25923)、大腸埃希菌(ATCC 25922)、銅綠假單胞菌(ATCC 27853)]購自江蘇省臨床檢驗中心。

2.試劑和儀器快速革蘭染色液(珠海貝索生物技術有限公司)，ATB微生物鑒定儀及其配套的鑒定板條(法國生物梅里埃公司)。

二、方法

1.涂片染色鏡檢用無菌棉簽挑取痰液、分泌物及膿液標本中膿性、黏液或血性的部位，制成均勻薄片。尿液及胸腹水:取新鮮標本5～8 mL，置于無菌試管1500×g離心30 min，取沉渣涂片。待涂片自然干燥后做革蘭染色、鏡檢。

2.合格標本及陽性結果判定標準痰液標本:外觀為膿性或血性，鱗狀上皮細胞＜10個/低倍鏡視野，白細胞＞25個/低倍鏡視野[2]，另外有些標本白細胞數量上沒有＞25個/低倍鏡視野，但見到了明顯形態、染色特征的致病菌，如流感嗜血桿菌、肺炎克雷伯菌等，應進行培養并向臨床回報涂片檢查結果。尿液標本:觀察10個以上油鏡視野，平均每個視野有1個以上細菌者，說明感染的可能性大，作進一步培養;還要觀察細菌的種類，如果有3種以上細菌同時存在，則標本可能被污染，應重新留取。分泌物、膿液及胸腹水標本:無菌采集，涂片如有大量鱗狀上皮細胞存在則說明標本留取過程中被污染，或培養見到2種或2種以上細菌即疑為標本被污染[3]。培養結果與涂片的符合情況:培養檢出的致病菌與涂片鏡檢中疑似致病菌形態特點相符[4]。疑似致病菌的確認指標:首先區分致病菌和污染菌(了解標本取材部位附近的常居菌叢的分布情況)，其次在鏡下找到細菌或真菌被炎性細胞吞噬或伴行，或被炎性細胞所包裹的現象[5]。

3.培養及鑒定痰液標本分別接種在血平板、巧克力平板、麥康凱平板、科瑪嘉平板[5%CO2濃度，(35±2)℃]，孵育24～48 h;分泌物、尿液和膿液標本接種在血平板、麥康凱平板;胸腹水標本接種在血平板、麥康凱平板及肉湯增菌液中，放置于(35±2)℃恒溫箱孵育24～48 h。觀察純培養菌或優勢致病菌并挑取菌落涂片進行革蘭染色、分離，用ATB微生物鑒定儀鑒定。

三、統計學方法

應用SPSS 13.0軟件進行統計分析，組間比較采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

結果

一、不合格標本的篩除

按照合格標本的判定標準，365例送檢標本中有不合格標本17例，其中痰液標本12例，尿液標本5例，培養后菌落生長情況與鏡檢相符(痰液標本為唾液痰，菌落生長較少，或見到3種以上細菌，多為正常菌群;尿液標本被污染，見到3種以上細菌生長)。見表1。

二、涂片鏡檢與培養的陽性符合率比較

348例合格標本中檢出致病菌93株，其中痰液標本檢出47株，尿液標本檢出7株，分泌物標本檢出30株，其它標本檢出9株。各菌株檢出情況見表1。348例合格標本中，痰液、尿液、分泌物和其它標本涂片鏡檢與培養結果間差異無統計學意義(P＞0.05)，陽性符合率分別為76.6%、62.5%、87.1%和80.0%。見表2。

三、涂片鏡檢與培養檢出微生物類型的符合率比較

348例合格標本中，痰液標本涂片鏡檢與培養檢出微生物類型的符合率分別為陽性球菌50.0%、陰性桿菌70.0%、真菌93.3%;尿液標本分別為66.7%、50.0%、100.0%;分泌物標本分別為75.0%、88.5%、100.0%;其它標本則分別為66.7%、85.7%、0.0%。在348例合格標本中，2種方法均未見到具有明顯致病性的陽性桿菌、陰性球菌和其它類型的微生物。見表3。

討論

目前，臨床上涂片鏡檢主要是將臨床送來作微生物檢驗的各類標本涂成薄片進行革蘭染色，在顯微鏡下直接觀察微生物的有無及其形態，其功能主要有以下幾點:(1)鑒別細菌;(2)選擇藥物敏感性紙片;(3)早期診斷;(4)判定合格標本; (5)確定主要病原菌;(6)病原菌半定量;(7)查腹瀉菌群失調;(8)提示需補充檢查項目;(9)解釋培養結果;(10)有利于細菌鑒定[6]。

本研究分析的365例送檢標本中不合格標本17例。從鏡檢情況看，12例不合格痰標本均滿足白細胞＜10個/低倍視野，而鱗狀上皮細胞＞25個/低倍視野要求，從性狀觀察均為唾液，培養結果均為正常菌群;尿液標本有5例不合格，涂片鏡檢沉渣發現革蘭陽性球菌、革蘭陰性桿菌、革蘭陽性桿菌，培養結果與鏡檢相符，故判定為“標本污染”。所以培養前標本涂片鏡檢可以及時排除不合格標本，糾正標本采集錯誤，提高檢驗結果的正確性和及時性[4－5]。這樣既減少了患者的經濟損失，同時也避免了由于標本的不合格所導致的錯誤培養結果給臨床造成的誤診、誤治[1]。

348例合格標本經培養共檢出致病菌93株，而經涂片鏡檢陽性79例，兩者經統計學分析，差異無統計學意義，有較好的符合率。對其不符合的病例進行分析發現，其中涂片陰性而培養陽性13例，分析原因，可能有以下幾種:(1)涂片太薄或取材不當，不能如實反映標本的真實性;(2)涂片經革蘭染色后，背景為紅色，而革蘭陰性桿菌也為紅色，容易漏檢，這一現象在痰液標本中較多見;(3)有些細菌如不動桿菌屬，其鏡下形態呈革蘭陰性球桿菌，與奈瑟菌相似，易混淆;(4)不排除標本在接種過程中的污染。涂片陽性而培養陰性3例，原因可能有以下幾種:(1)涂片中看到的細菌被膿細胞吞噬后，白細胞及死亡后的尸體釋放出某些物質抑制了細菌的繁殖;(2)標本中有厭氧菌，用常規需氧條件培養，不會生長;(3)標本中有苛氧菌、緩慢生長菌或L型菌，用常規條件培養，可能會因為培養基營養不夠、培養時間短、培養環境不適宜等因素而不生長;(4)標本采集前未停用抗菌藥物，患者體內殘存的抗菌藥物抑制了細菌的生長[6－7]。但由于本研究標本較少，具體原因還需擴大標本量進一步研究。

通過比較分析，認為標本培養前的涂片鏡檢與培養結果具有很大的相關性，據此可以向臨床提供一級報告，提前提供感染信息，這對指導預防用藥有積極意義[6]。目前，臨床上由于微生物檢驗的特殊性，從標本采集到給臨床明確的檢驗結果，包括病原學診斷和抗菌藥物敏感性試驗結果一般需要2～3 d，有時需要更長的時間，而此時患者的病情可能已經發生了變化[4]。因此，在標本送達實驗室后，對其先行染色鏡檢，并將鏡檢結果提前告知臨床，可為臨床醫生試探性合理用藥指明方向。同時又可以排除不合格標本，提高致病菌的檢出率[5]，為確保檢驗結果的準確性和及時性提供有效幫助，從而提高患者治療的有效率，縮短住院時間，節約醫療經費。所以，對我們從事微生物檢驗工作的人員來說，對臨床送檢的微生物標本進行涂片染色鏡檢有著十分重要的意義，大家在實際工作中應加強重視。

[1]蔣開龍，周波，楊志.送檢細菌標本直接涂片染色鏡檢的意義[J].實用醫技雜志，2011，18(5):505.

[2]倪語星，尚紅.臨床微生物學與檢驗[M].4版.北京:人民衛生出版社，2009:564－565.

[3]駱永年，梁捷.細菌培養標本涂片鏡檢的意義[J].中國醫藥指南，2010，8(20):70－71.

[4]袁飛，萬莉，謝幫才.358例標本涂片鏡檢與培養結果的相關性分析[J].中國實驗診斷學，2008，12 (6):771－773.

[5]楊朵，辛續麗，馬東媛，等.痰培養標本合格性評估標準的比較[J].檢驗醫學，2012，27(9):773－775.

[6]鄧寧.培養前標本涂片檢查在臨床輔助診斷中的應用評價[J].甘肅醫藥，2012，31(3):179－181.

[7]陳險峰，周庭銀.痰標本涂片革蘭染色鏡檢的臨床意義[J].檢驗醫學，2013，28(6):499－502.

The clinical significance of smear and Gram staining for microscopy before microbial specimens being cultured

ZHANG Guoying，XIA Xuehong.(Department of Clinical Laboratory，Nanjing Hospital of Integrated Traditional and Western Medicine，Nanjing University of Traditional Chinese Medicine，Jiangsu Nanjing 210014，China)

ObjectiveTo investigate the clinical significance of microbial specimens being smeared and Gram stained for microscopy before they were cultured.MethodsA total of 365 clinical specimens with different types of microorganisms were firstly smeared and stained for microscopy，then were inoculated for culture.Finally，the coincidence rate was analyzed.ResultsAmong the 365 specimens，there were 211 sputum specimens，40 urine specimens，76 secretion specimens and 38 other－type specimens(mainly pus and pleural effusion specimens).Among them，there were 17 unqualified specimens.Of the 348 qualified specimens，93 cases were cultured positive.The detection results of sputum，urine，secretion and other－type specimens were no statistical significance by the smear microscopy and the culture method.The coincidence rates were 76.6%，62.5%，87.1%and 80.0%，respectively (P＞0.05).ConclusionsThe smear microscopy can not only check the quality of specimens，but also reduce the result errors of culture，so as to improve the positive rate of specimens by culture.Therefore，it is of great significance in the actual microbiological testing work.

Smear;Microscopy;Culture;Microbial specimen

1673－8640(2015)03－0258－04

R446.5

A

10.3969/j.issn.1673－8640.2015.03.014

2014－04－01)

(本文編輯:姜敏)

張國英，女，1978年生，碩士，副主任技師，主要從事微生物學和免疫學研究。