同型半胱氨酸不同檢測方法結果分析

趙彥，康鳳鳳，王薇，何法霖，鐘堃，王治國

(北京醫(yī)院衛(wèi)生部臨床檢驗中心，北京100730)

同型半胱氨酸不同檢測方法結果分析

趙彥，康鳳鳳，王薇，何法霖，鐘堃，王治國

(北京醫(yī)院衛(wèi)生部臨床檢驗中心，北京100730)

目的評價并分析同型半胱氨酸(Hcy)項目不同檢測方法的結果。方法采用衛(wèi)生部臨床檢驗中心(NCCL)的室內(nèi)質(zhì)量控制(IQC)監(jiān)測系統(tǒng)調(diào)查分析全國110家實驗室Hcy檢測項目的不精密度水平[即變異系數(shù)(CV)]。再利用NCCL基于Web的室間質(zhì)量評價(EQA)系統(tǒng)評估2012年全國110家實驗室Hcy檢測的偏倚(Bias)。引入我國目前的EQA評價標準(TEa=20%)進行評價，并通過公式西格瑪(σ)=(TEa－Bias)/CV計算項目的σ度量值。同時評價各方法組實驗室的及格率和實驗室間CV。結果從σ水平、實驗室間的不精密度水平以及EQA及格率三方面對Hcy不同檢測方法的結果進行分析，化學發(fā)光法σ＞6、3＜σ≤6、0＜σ≤3、σ≤0的比例分別為0%、7.69%、30.77%、61.54%，免疫比濁法分別為9.09%、0%、63.64%、27.27%，循環(huán)酶法分別為11.63%、31.40%、47.67%、9.30%。化學發(fā)光法、免疫比濁法、循環(huán)酶法5個批號質(zhì)控品的實驗室間CV分別為33.66%～43.77%、19.54%～25.24%、10.46%～14.21%，及格率分別為53.3%、53.3%～80.0%、85.9%～92.3%。結論我國Hcy的檢測水平還有待提高。

同型半胱氨酸;六西格瑪;西格瑪度量;不精密度;偏倚

同型半胱氨酸(homocysteine，Hcy)是一種含硫氨基酸。臨床及實驗研究均表明高水平的Hcy是冠狀動脈粥樣硬化和心肌梗死的危險指標，其水平高低與疾病的危險程度成正比，因此越來越受到廣泛的重視和關注。為了保障Hcy檢測結果的質(zhì)量，需建立完善的質(zhì)量保證體系[1]。衛(wèi)生部臨檢中心已于2007年正式在全國范圍內(nèi)開展Hcy的室間質(zhì)量評價(external quality assessment，EQA)工作，同時也對室內(nèi)質(zhì)量控制(internal quality control，IQC)水平進行調(diào)查研究。我們將EQA及IQC情況結合六西格瑪(6σ)理論對其不同檢測方法的結果進行分析。

材料和方法

一、研究對象

衛(wèi)生部臨床檢驗中心在2012年要求參加衛(wèi)生部臨床檢驗中心Hcy室間質(zhì)評項目的所有單位同時上報2月份的室內(nèi)質(zhì)控數(shù)據(jù)，室內(nèi)質(zhì)控品為各臨床實驗室內(nèi)部使用的相應配套質(zhì)控品或者自制質(zhì)控品。EQA所用質(zhì)控品由美國伯樂(Bio－Rad)公司提供的5個批號的血清基質(zhì)質(zhì)控品。

二、方法

1.西格瑪(σ)度量值的估計對IQC數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計，得到每個實驗室IQC的變異系數(shù)(coefficient of variation，CV)。采用基于Web方式的EQA軟件系統(tǒng)調(diào)查2012年參加衛(wèi)生部臨床檢驗中心Hcy的EQA回報結果，按照檢測方法分組，將各實驗室檢測結果與各組靶值比較，求5個批號質(zhì)評物的平均偏差作為各實驗室方法的偏倚(Bias)估計。利用公式:σ=(TEa－Bias)/CV[2]，結合IQC評價標準(TEa=20%)，得到各實驗室的σ度量值。σ≥3為實驗室的最低水平，σ＞6稱為一流水平[3]。將各實驗室的σ度量值按照σ≤0、0＜σ≤3、3＜σ≤6和σ＞6分成4組，計算各組的構成比。

2.實驗室間CV將3倍標準差(s)之外的檢測結果視為離群值拋除后，計算各組的實驗室間CV。

3.及格率實驗室80%以上(含80%)結果在允許范圍內(nèi)為成績合格。評價標準為靶值± 2.5 μmol/L或靶值±20%(取大者)。

結果

參加全國Hcy調(diào)查的187家實驗室中有15家實驗室未回報檢測方法或者選擇其它檢測方法，對余下的172家實驗室按照檢測方法分組并進行統(tǒng)計分析。回報的IQC結果僅有110家為有效數(shù)據(jù)，因此將110家實驗室的σ度量值進行分組。循環(huán)酶法僅有37家實驗室達到3σ水平，另外兩種檢測方法組的結果更不理想，均只有1家實驗室達到3σ水平。見表1。

表2為5個批號質(zhì)評物在各分組中的實驗室間CV。循環(huán)酶法的不精密度低于其他兩種方法。各分組的EQA及格率見表3。

討論

本研究結果顯示我國Hcy檢測水平與6σ水平還有很大差距。其中使用最多的是循環(huán)酶法，使用這種方法的實驗室中有31.4%的σ值在3～6之間，僅有11.6%的實驗室滿足σ＞6。而化學發(fā)光法和免疫比濁法組中σ≥3的實驗室分別為7.69%和9.09%。表2中循環(huán)酶法組的穩(wěn)健CV范圍為10.46%～14.21%，是3個方法組中最小的。再結合2012年參加EQA各參評實驗室不同方法組的及格率，循環(huán)酶法的及格率均在85%以上。循環(huán)酶法的基本原理為Hcy經(jīng)三(2－羧乙基)膦還原成游離型Hcy，通過與共價底物反應，循環(huán)放大，同時產(chǎn)生腺苷，腺苷立即被水解成氨和次黃嘌呤，氨在谷氨酸脫氫酶的作用下，使NADH轉化為NAD+，樣本中的Hcy濃度與NADH轉化速率成正比。由于循環(huán)酶法具有良好的精密度、線性范圍寬、抗干擾因素強、結果準確且能夠滿足大批量樣本自動檢測，是一種值得推廣的方法[4－6]。同理分析，化學發(fā)光法的σ水平、CV以及及格率均較低，免疫比濁法居中。當然同一方法組的實驗室可能使用的是不同廠家的儀器，各類型的儀器之間可能在精密度水平、系統(tǒng)誤差方面也不盡相同，這也會造成同一方法組間實驗室的結果差異較大。而且化學發(fā)光法和免疫免濁法這兩個方法組的實驗室數(shù)較少，出現(xiàn)離群值對整組的影響也較大。

EQA計劃通過評價不同實驗室的性能為檢驗醫(yī)學的實踐提供了重大的價值，分為6個類別(見表4，與計劃設計有關EQA的評價能力)，最佳室間質(zhì)評計劃的目標是用第一類計劃，能評價整個測量區(qū)間的偏倚和再現(xiàn)性、校準溯源性和實驗室間的一致性。而現(xiàn)在的EQA還停留在第6階段，無參考測量程序或有證參考物質(zhì)的賦值[7]。本研究僅將2012年的172個EQA結果及110家實驗室的IQC結果用規(guī)范的σ度量方法結合起來，對Hcy檢測方法進行簡單分析，更為科學合理的性能評估還需要長期、大量的數(shù)據(jù)。所以我們建議所有開展Hcy檢測的實驗室都積極參加全國Hcy的EQA計劃，以便我們能夠盡快掌握更多實驗室的檢測水平，并對方法學檢測性能進行更全面的分析。

[1]王薇，王治國，李少男.全國同型半胱氨酸檢測室間質(zhì)量評價結果分析[J].現(xiàn)代檢驗醫(yī)學雜志，2010，25(3):149－151.

[2]王薇，王治國，李少男.六西格瑪在臨床實驗室的應用[J].中國醫(yī)療器械信息，2008，14(12):10－15.

[3]王治國.臨床檢驗6σ質(zhì)量設計與控制[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，2009:31－36.

[4]葉余輝.循環(huán)酶法測定血清同型半胱氨酸試劑盒的評價[J].中國醫(yī)藥指南，2013，11(8):465.

[5]常連剛，趙靜，任峰，等.循環(huán)酶法測定血漿同型半胱氨酸[J].檢驗醫(yī)學，2007，22(1):16－19.

[6]楊軍，張紅梅，朱元芳，等.自貢地區(qū)中老年人群循環(huán)酶法同型半胱氨酸水平調(diào)查[J].檢驗醫(yī)學，2012，27(5):418.

[7]MILLER WG，JONES GR，HOROWITZ GL，et al.Proficiency testing/external quality assessment:current challenges and future directions[J].Clin Chem，2011，57(12):1670－1680.

Result analysis of various detection methods for homocysteine

ZHAO Yan，KANG Fengfeng，WANG Wei，HE Falin，ZHONG Kun，WANG Zhiguo.(National Center for Clinical Laboratory，Beijing Hospital，Ministry of Health，Beijing 100730，China)

ObjectiveTo evaluate the results of various detection methods for homocysteine(Hcy).MethodsThe internal quality control(IQC)information of 110 laboratories from National Center for Clinical Laboratory(NCCL) was collected.The imprecision[coefficient of variation(CV)]of Hcy was analyzed.Bias was estimated according to various detection methods in NCCL External Quality Assessment(EQA)in 2012 through online EQA platform.With current evaluation criteria for EQA(TEa=20%)，sigma(σ)value of each laboratory was calculated as the formula:σ =(TEa－bias)/CV.Furthermore，the passing rates and inter－laboratory CV for each group were evaluated.ResultsThe proportions of σ＞6，3＜σ≤6，0＜σ≤3 and σ≤0 by chemiluminescence，immunoturbidimetry and enzymatic cycling were 0%，7.69%，30.77%，61.54%;9.09%，0%，63.64%，27.27%and 11.63%，31.40%47.67%，9.30%，respectively.The inter－laboratory CV by the 3 methods for 5－run quality control materials were 33.66%－43.77%，19.54%－25.24%and 10.46%－14.21%，and the passing rates were 53.3%，53.3%－80.0%and 85.9%－92.3%.ConclusionsLaboratories in China need further efforts to improve the performance of Hcy detection.

Homocysteine;6 sigma;Sigma metric;Imprecision;Bias

1673－8640(2015)03－0284－03

R446.1

A

10.3969/j.issn.1673－8640.2015.03.020

2014－06－09)

(本文編輯:龔曉霖)

北京市自然科學基金資助項目(7143182)

趙彥，女，1988年生，學士，技師，主要從事醫(yī)學檢驗實驗室管理工作。

王治國，聯(lián)系電話:010－58115055。