復合質控血清研制及臨床應用評價

張春雷，李忠新，張書楠，陳桂冰，曾學輝

(深圳市中醫院檢驗科，廣東深圳518083)

復合質控血清研制及臨床應用評價

張春雷，李忠新，張書楠，陳桂冰，曾學輝

(深圳市中醫院檢驗科，廣東深圳518083)

目的制備乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、丙型肝炎病毒(HCV)抗體、人類免疫缺陷病毒(HIV)抗體弱陽性對照復合質控血清，用于日常室內質量控制。方法用HBsAg、HCV抗體、HIV抗體陽性血清分別與健康人血清進行倍比稀釋，選S/CO在2～3之間的稀釋度制備室內質控血清。結果自制的復合質控血清變異系數(CV)在15%以內，有很好的穩定性、精密度。結論自制復合質控血清能作為HBsAg、HCV抗體、HIV抗體實驗室檢測的弱陽性室內質控血清。

乙型肝炎病毒表面抗原;丙型肝炎病毒抗體;人類免疫缺陷病毒抗體;復合質控血清;穩定性

全自動免疫分析儀器因其檢測準確性高、重復性好、自動化程度高、符合實驗室生物安全的需要等優點，在臨床的應用越來越廣泛。由于臨床免疫檢測影響因素較多，包括儀器、試劑保存及運輸等環節，為了保證免疫檢驗結果的準確性及可靠性，每次實驗均須有內部對照質控血清(陽性及陰性血清)和外部對照質控血清，以外部對照質控血清進行室內質量控制。為了避免商品化質控血清可能存在的基質效應，我們利用檢測樣本中陽性樣本制備了乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、丙型肝炎病毒(HCV)抗體、人類免疫缺陷病毒(HIV)陽性對照復合質控血清，用于日常室內質控。

材料和方法

一、材料

1.試劑HBsAg、HCV抗體試劑盒由北京萬泰生物藥業股份有限公司提供，HIV抗體試劑盒由珠海麗珠試劑股份有限公司提供。

2.儀器URANUS AE 200全自動酶免分析儀，由深圳市愛康生物科技有限公司提供。

二、方法

1.樣本收集要求無污染、溶血、黃疸和脂血。其中HBsAg陽性復合血清10份，HCV抗體陽性復合血清5份，HIV抗體陽性復合血清3份。同時收集HBsAg及HBsAb陰性、HCV抗體陰性、HIV抗體陰性的健康人血清足量，56℃滅活30 min，3 000×g離心15 min，去除纖維蛋白沉淀，經亞甲藍光化學法滅活后備用，所有血清仍需按照傳染物對待。

2.用陰性健康人血清分別對少量HBsAg陽性、HCV抗體陽性、HIV抗體陽性復合血清進行倍比稀釋并對不同稀釋度血清進行雙份平行檢測，選取S/CO值為2～3的稀釋度為最適稀釋度。

3.將上述陽性樣本按照最適稀釋度加至一定量的陰性健康人血清中，充分混勻，按照需求量分裝到塑料試管中，用量1周，加蓋密封保存于－20℃備用。使用時解凍后置4～8℃保存，使用前充分混勻。

4.嚴格按照操作規程對制備好的質控血清進行20次重復測定，求其均值()、標準差(s)和變異系數(CV)。

5.自制質控血清的精密度和穩定性觀察:每次取自制質控血清與日常樣本一起檢測，持續檢測6個月后統計S/CO的均值、s、CV，并分析各月與第1個月的檢測結果的統計學差異。

三、統計學方法

采用SPSS 19.0統計軟件進行分析。不同月份質控血清精密度和穩定性的比較采用均數的t檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

結果

一、最適合稀釋度

對HBsAg陽性、HCV抗體陽性、HIV抗體陽性復合血清不同稀釋度血清進行檢測后發現其s值有良好的濃度梯度，HBsAg陽性復合血清在1∶8 000～1∶16 000稀釋范圍內，S/CO在2.02～3.58之間，選定1∶10 000為最適稀釋度，HCV抗體陽性在1∶4 000～1∶8 000稀釋度范圍內，S/CO值在1.73～3.45范圍內，HIV抗體陽性復合血清在1∶4 000～1∶8 000稀釋度范圍內，S/CO值在1.94～3.85范圍內，根據情況均選定1∶5 000作為最適稀釋度。

二、混合血清穩定性測試

稀釋完成后，對質控血清進行20次重復測定，S/CO均值、s和CV。見表1。

三、混合血清保存穩定性測試

連續6個月使用自制質控血清繪制質控圖，同時比較每個月質控血清的，s，CV值，觀察其精密度及穩定性，結果見表2、表3、表4。以均數t檢驗比較，與一月份相比，差異無統計學意義(P＞0.05)。由此可見，－20℃保存自制的質控血清，至少可以保存6個月，解凍后4～8℃保存1周，可用作于室內質控使用。

討論

室內質控目的是控制實驗室每天檢測結果的可靠性，是實驗室管理最基本措施。臨床實驗室只有建立一個全面的質量管理體系，才能獲得可靠的測定結果。外部對照質控血清是為了監控檢測的重復性和試劑盒反應批間或批內差異而由實驗室設置的一套對照血清。而弱陽性對照最能反映檢測結果的差異，即能顯示半定量分析或定性分析上的假陰性結果或誤差[1]。因此，為了保證實驗的準確性和精密度，設置外部弱陽性對照質控血清是實施室內質控的一種有效的方法。酶聯免疫吸附試驗(ELISA)由于其操作簡便、成本低、適合批量檢查等優點，在臨床和科研領域抗原及抗體的測定中有著廣泛的應用。影響ELISA檢測的因素很多，包括試劑盒本身的質量、運輸和保存的環境，樣本本身含有一些自身抗體、樣本的保存和是否細菌污染及樣本的處理，洗液的配制及是否污染，溫育的溫度和時間，顯色的時間等，所以實驗室采用室內監控尤其重要。

目前，HBsAg、HCV抗體、HIV抗體等項目，是手術前檢測的常規項目，ELISA方法檢測仍然是各級醫院主要選擇的方法。衛生部臨床檢驗中心已經研制了用于進行HBsAg、HCV抗體、HIV抗體等項目ELISA檢測國內標準品，單位為國際單位IU/mL。該種標準物質已在許多三級醫院得到廣泛的應用，但價格偏貴，而且都是單一項目質控品，給臨床的應用和推廣帶來了不便。本研究中制作的是室內多項目復合質控品，從實驗結果可以看出，HBsAg、HCV抗體、HIV抗體－20℃至少可以穩定6個月，解凍血清4～8℃可保存一周。一般CV值達到了20%以內，質控品穩定性較好[2]。本實驗中CV值能夠控制在15%以內，質控品穩定性良好。我們所在科室以上ELISA檢測項目近年均從臨床檢驗中心采購商品化質控品，采用全自動酶免分析儀盡量減少人為的誤差，CV值一般穩定在10%～15%。多項目質控品制作過程操作簡便，能夠在各級醫院實驗室獨立完成，可行性高。同時，用HBsAg及HBsAb陰性、HCV抗體陰性、HIV抗體陰性的健康人血清作為基質，排除了基質效應，能夠更好的監測實驗過程。目前有研究報道用ELISA試劑盒陽性對照配制室內質控血清的方法[3－5]，我們認為不可取。目前試劑盒內陽性對照一般不是從陽性樣本中得到，多是合成的半成品或片段，我們前期實驗也發現，ELISA陽性對照用金標的試劑檢測結果為陰性。本研究中用陽性樣本配制室內多項質控品，能夠大大減少實驗室成本。

自制復合質控血清可有效控制實驗室測定工作的準確性及可靠性，提高日常檢測結果的一致性，有利于臨床檢測準確性的提高，使檢測結果更接近于患者的真實情況，有利于臨床的診斷應用。

[1]王治國.臨床檢驗質量控制技術[M].北京:人民衛生出版社，2004:207－208.

[2]孔祥沙，季穎，張海瑩，等.甲型肝炎病毒抗體室內質控血清制備及評價[J].中華檢驗醫學雜志，2013，36(12):1146－1147.

[3]韓光宇，譚昆，徐湛，等.自制抗－HIV臨界值質控血清的室內質控及評價[J].國際檢驗醫學雜志，2013，34(6):711－712.

[4]韋雪芳.ELISA檢測HIV抗體室內質控血清的制備[J].檢驗醫學與臨床，2011，8(20):2527－2528.

[5]孫少巖，吳敏慧.HCV抗體臨界值質控血清的制備及應用[J].南京軍醫學院學報，2001，23(3):181.

1673－8640(2015)03－0292－03

R446.1

A

10.3969/j.issn.1673－8640.2015.03.024

2014－07－09)

(本文編輯:儲怡星)

張春雷，男，1974年生，學士，副主任技師，主要從事臨床免疫學檢驗工作。