過敏狀態對兒童哮喘細胞因子反應的影響*

白映光 林炳常 謝太門

小兒哮喘為兒科常見慢性呼吸道疾病之一，隨著大氣污染的增加，近年來在全球范圍內逐漸升高，越來越受到國內外的普遍關注[1]。因小兒哮喘無法根治，常反復發作，如未能得到有效診治，可出現呼吸困難、呼吸驟停、生長發育緩慢等情況，嚴重影響患兒的生命健康及質量。有文獻指出，過敏狀態對小兒哮喘的細胞因子水平產生嚴重影響，可加重病情[2]。而過敏引起哮喘病情加重的作用機制尚不完全明確，探究過敏狀態與小兒哮喘細胞因子水平的相關性具有重要的臨床價值，故本院2013年12月-2014年11月對哮喘患兒檢測其細胞因子水平，效果滿意，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 入選本院2013年12月-2014年11月80例小兒哮喘患者，其中男47例，女33例，年齡5~14歲，平均（7.8±1.4）歲，急性期病程1~5 h，平均病程（2.6±1.6）h。入選標準：符合中華醫學會呼吸科學會制定的支氣管哮喘診斷標準[3]；經相關實驗室檢查、影像學檢查確診為小兒哮喘患者。其中重度11例，中度43例，輕度26例。根據是否為過敏體質分為過敏組41例、非過敏組39例，同期入選體檢健康者40例為對照組。其中過敏組男23例，女18例，年齡5~13歲，平均（7.5±1.2）歲，平均病程（2.5±1.4）h。非過敏組男24例，女15例，年齡6~14歲，平均（7.7±1.3）歲，平均病程（2.6±1.5）h；對照組男24例，女16例，年齡5~14歲，平均（7.8±1.2）歲，平均病程（2.6±1.5）h。所有患者均無先天性心臟病、血液系統疾病、糖皮質激素禁忌證、嚴重肝腎功能障礙、30 d內未應用糖皮質激素治療，三組患兒的性別、年齡等一般資料比較差異無統計學意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 儀器與試劑 法國DIACLONE公司生產授權深圳英生物科技有限公司銷售的血清IL-5、IL-4、IFNγ檢測試劑盒。布地奈德混懸液：由AstraZeneca Pty Ltd.公司生產；復方異丙托溴銨溶液：由勃林格殷格翰國際公司（英國）生產；藥物霧化器：浙江寧波海署醫療用品廠生產，型號：QYW-20 mLⅡ型。

1.3 方法

1.3.1 檢查方法 所有患兒均應用酶聯免疫吸附法（ELISA法）進行血清IL-5、IL-4、IFN-γ水平檢測，抽取3 mL靜脈血，進行1000 r/min離心10 min，分離血清，裝置后置于-80 ℃備用。酶聯免疫吸附法應用BIO-RAD680酶標儀，所有操作嚴格按說明書進行。檢測血清IL-5、IL-4、IFN-γ水平：在室溫下全部試劑盒及標本復溫超過0.5 h；根據試劑說明書將所需制劑進行配制，在相應孔內加入100 μL標準配制品或樣品，酶標板加蓋，18~25 ℃環境下孵育2 h，每孔洗3次；將稀釋的生物素抗體50 μL加入各孔，室溫下孵育1 h，洗3次；將親和鏈霉素-HRP100 μL加入各孔，室溫下孵育20 min，洗3次；將TMB底物100 μL加入各孔，室溫環境避光放置20 min；將硫酸100 μL加入各孔，反應終止；450 nm讀出各孔的吸光度值。

1.3.2 治療方法 對于哮喘臨床上常使用平喘、止咳、抗炎等常規治療，在此治療基礎上，使用氧驅動霧化吸入布地奈德繼續治療，使用布地奈德混懸液（普米克令舒，規格：0.5 mg/2 mL，批號：H20090902）進行治療，0.5 mg/次，2次/d，15 min/次。使用時以藥物霧化器將0.5 mg布地奈德混懸液、0.8 mL復方異丙托溴銨溶液（可必特，規格：2.5 mL：異丙托溴銨0.5 mg和硫酸沙丁胺醇3 mg，批號：H20100608）以及1 mL生理鹽水進行混合，以5 L/min氧流量通氧吸入。

1.4 統計學處理 全部數據采用SPSS 18.0軟件系統進行處理分析，計量資料以（x-±s）表示，采用t檢驗，P<0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

小兒哮喘患者的血清IL-5、IL-4、IFN水平分別為（12.9±7.2）pg/mL、（1.7±1.1）pg/mL、（16.4±7.5）pg/mL，顯著高于對照組，差異有統計學意義（t=2.66、4.90、4.48，P<0.05）。過敏組血清IL-5、IFN-γ水平顯著高于對照組，差異有統計學意義（t=4.72、5.02，P<0.05），而IL-4水平與對照組比較差異無統計學意義；過敏組血清IL-5、IFN-γ水平顯著高于非過敏組，差異有統計學意義（t=3.86、3.63，P<0.05），而IL-4水平與非過敏組比較差異無統計學意義，見表1。

表1 三組血清細胞因子水平比較（±s）pg/mL

表1 三組血清細胞因子水平比較（±s）pg/mL

*與非過敏組、對照組比較，P<0.05

組別 IL-5 IL-4 IFN-γ過敏組（n=41）15.9±7.6* 1.8±1.0 17.7±7.7*非過敏組（n=39）10.7±3.7 1.6±0.9 12.4±5.0對照組（n=40）9.7±3.4 1.5±0.8 10.6±4.6

3 討論

支氣管哮喘是一種反復發作的呼吸系統疾病，因其好發于小兒，又稱小兒哮喘。發病時患兒常表現為呼吸困難、喘鳴，經久難愈，是一種慢性疾病，不僅影響小兒的生活質量和能力，更影響小兒生長發育，危害小兒健康安全。有研究表明，過敏反應與哮喘之間關系密切[4]。患兒受到變應原、冷空氣或其他誘因的刺激時，往往首先表現為上呼吸道過敏的癥狀，如眼癢、鼻癢、打噴嚏、流清涕等，病情進展后可表現為上腭癢、咽癢、干咳和嗆咳[5]。突然發作的喘息為兒童哮喘的主要特征，兒童哮喘的喘息癥狀根據哮喘的嚴重程度而有較大的差異。患兒可出現高調喘鳴聲、呼吸頻度加快、呼吸困難。誘發因素有吸入性過敏原，如塵螨、花粉、真菌、動物毛屑等。吸入化學物質如二氧化硫、油漆、殺蟲劑等也可引起發作[6-7]。病毒性感冒及其他呼吸系統感染、食物性過敏原（如魚、蝦蟹、蛋類、牛奶等）、藥物（如心得安、阿斯匹林等）、氣候變化、運動等都可能是哮喘發作的誘因。胃內容物返流至食管及鼻分泌物后流，也可誘發哮喘[8-10]。而過敏所導致的哮喘其病因復雜，研究過敏反應而造成小兒哮喘的作用機制可有效降低小兒哮喘的發生率，減少哮喘對小兒的威脅，對于提高兒童安全性有重要意義。

目前臨床上對于哮喘的治療常使用霧化吸入治療，被認為是最佳治療途徑，治療有效率達到最大效果。常使用藥物為布地奈德混懸液，其霧化時作為微粒進入氣道內，可直達病變部位，效果顯著。布地奈德為糖皮質激素，其可增強內皮細胞的穩定性，抑制免疫反應以及炎癥因子的釋放，抑制抗體的生成，從而減少抗原與抗體的結合，將過敏反應降至最低，達到治療哮喘的效果。臨床上的治療效果也從側面說明了過敏反應對哮喘的影響及關聯。在張嘉琳等[11]的研究中顯示，兒童哮喘多數是由過敏原引起，其不僅可以引起氣道內各種炎癥因子的釋放，造成氣道內局部炎癥反應，使氣道內呈高反應性，最終導致小兒哮喘的發生。隨后大多數專家學者們研究均得出過敏反應可誘發小兒哮喘的結論。高金明[12]研究大氣顆粒物對小兒哮喘的影響中發現，大氣顆粒物主要組成部分包括，粉塵、汽車尾氣、煙霧等有毒氣體以及Cu、Ni、As等重金屬化學元素，在吸入人體后可促進機體內IgE以及IgG抗體的表達，誘導炎癥因子大量釋放，加重氣道內局部炎癥反應，誘發哮喘。其研究結果表明，過敏狀態與哮喘密切相關。

輔助性T淋巴細胞的Th1、Th2兩種亞型與哮喘的發病密切相關，對機體正常機能的維持起關鍵作用。Th1主要介導遲發性超敏反應及細胞免疫應答，幫助B細胞產生IgA、IgG、IgM等抗體；Th2細胞主要對體液免疫應答予以介導，幫助B細胞予以IgE合成，非吞噬性宿主予以防御[13-15]。肥大細胞及Th2細胞產生IL-5，B細胞活化后對其分化及增殖產生刺激作用，參與過敏反應，同時促進嗜酸性粒細胞的分化及生長，使EOS生存時間延長，EOS活化后促使其釋放EOS陽離子蛋白、血小板活化因子、白三烯等各種炎性介質和堿性顆粒蛋白，導致支氣管炎癥，同時與IL-4、IL-2產生協同作用，參與誘導分化胸腺小細胞及體液免疫應答。小兒哮喘的氣道炎性反應進展中IL-5起主要作用，患兒血清IL-5水平上升對呼吸道上皮細胞產生刺激，使其釋放炎性介質導致喘息[16-17]。NK細胞及T細胞活化后可分泌IFN-γ，IFN-γ種屬具有高度特異性生物活性，功能主要是：促使血管內皮細胞激活；促使NK細胞的殺傷活性及中性粒細胞功能進行激活[18-19]；轉化Ig類型并產生抗體，促進分化B細胞；對Th2細胞增殖產生抑制作用，促進Th0細胞向Th1細胞轉化；促進各種細胞表達MHCII類及I類分子；使巨噬細胞激活并增強其作用；肥大細胞、嗜堿性粒細胞、T細胞均可分泌白介素-4。IL-4是一種多功能炎性介質，為Th2細胞分泌的特異性細胞因子，其主要生物學功能是：自分泌形式促使分化Th2細胞，對Th1細胞的應答及增殖產生抑制作用；促使IgG轉換為IgE類型；促使B細胞活化產生IgG1、IgE；促使B細胞表達MHCII類抗原[20-24]。本文以本院哮喘兒童為研究對象，將哮喘兒童分為過敏組與非過敏組，另以健康兒童為對照，探究兒童哮喘細胞因子水平與過敏狀態的相關性，結果顯示：小兒哮喘患者的血清IL-4、IL-5、IFN水平顯著高于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）；過敏組血清IFN-γ、IL-5水平顯著高于對照組，差異有統計學意義（P<0.05），而IL-4水平與對照組比較差異無統計學意義；過敏組血清IFN-γ、IL-5水平顯著高于非過敏組，差異有統計學意義（P<0.05），而IL-4水平與非過敏組比較差異無統計學意義。本研究結果提示哮喘患兒的細胞分子水平均顯著升高，而過敏組患兒的IL-5、IFN水平顯著高于非過敏組及健康兒童；而非過敏組與健康兒童組比較其細胞因子水平差異無統計學意義，與李素萍[25]的研究結果大體一致。

綜上所述，過敏狀態對哮喘患兒血清IL-5、IFN-γ水平影響較大，可影響患兒病情的嚴重程度。

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