惠州地區人乳頭瘤病毒（HPV）的亞型分布特點及其與年齡的相關性分析*

李旭艷

人乳頭瘤病毒是一種球形DNA病毒，作為乳多空病毒科的乳頭瘤空泡病毒A屬，可引起人體皮膚黏膜的鱗狀上皮增殖，隨著病情進展可誘發生殖道病變，甚至宮頸癌變的發生[1]。目前，流行病學和基礎研究已證實HPV感染是宮頸上皮內瘤變和宮頸癌的主要病因，且已證實高危型HPV感染是宮頸癌的必要病因[2]。同時，國內外文獻顯示，通過已掌握的大量區域性流行病學本地資料以及研究婦女HPV感染及其與宮頸病變關系，得出HPV感染存在較大的地區差異[3]。近年來，惠州地區每年到本院門診和體檢患者要求檢查HPV-DNA的人數逐年增多，且結果顯示女性感染HPV人群有逐年增加的趨勢，嚴重影響患者的生活質量。對此，本院通過檢測和分析門診和體檢的婦女HPV感染情況及其與年齡的關系，為HPV疫苗研究以及HPV感染早期預防和治療提供理論依據和指導價值，現將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2576例2013年1月-2014年12月本院門診和體檢的婦女宮頸分泌物中的脫落細胞，年齡20~78歲，平均年齡（47.21±7.49）歲，且均有性生活史，但無宮頸手術史、無子宮切除手術史、無細胞學檢查異常史等治療史，其中依據年齡分為低齡組（20~29歲）679例、中低齡組（30~39歲）1056例、中齡組（40~49歲）496例、高齡組（>49歲）345例，所有受試者均無心、肝、腎等重要臟器嚴重性疾病，且簽署知情同意書，并經本院醫藥倫理委員會審批通過。

1.2 方法

1.2.1 標本采集 所有婦女在門診和體檢時，通過專用刷子置于宮頸口，逆時針方向轉3圈，停留10 s后，將采樣刷置于專用標本儲存瓶并折斷采樣刷多余部分，將采樣刷留于標本儲存瓶并送往檢驗科進行HPV檢測。

1.2.2 HPV檢測 所有標本均通過全自動離心分離機進行上清液分離和提取，通過由，美國ABI 公司生產的ABI2720擴增儀進行PCR擴增，完成后采用核酸分子導流雜交系統（凱普）對21種常見的HPV基因型進行分型檢測，即先預雜交：將固定有探針的尼龍膜浸于2×SSC/0.1% SDS液內，溫度為45 ℃，持續15 min，然后把Biotinylated PCR產物置入95 ℃的2×SSC/0.1% SDS中進行變性，持續5 min；再進行雜交，其中雜交液為2×SSC/0.1% SDS，溫度為51 ℃，持續1 h，完畢后將尼龍膜置于2×SSC/0.1% SDS中并進行51 ℃洗膜，持續10 min，最后加入sodium citrate和TMB避光反應5 min后棄反應液，洗膜3次后加顯色劑進行顯色和結果判定，其中HPV檢測試劑盒由香港凱普生物科技有限公司提供：DNA提取試劑盒，批號為20091101，PCR擴增試劑盒，批號為20091202，雜交試劑盒，批號為20091202；所有操作均在無菌條件下依據說明書和相關規定進行，檢測結果參照說明書評判標準。

1.3 觀察指標和標準 統計分析所有受試者HPV的亞型分布特點及其與年齡的關系，HPV檢測判定標準：雜交膜共設24個點，Biotin和IC設為對照點，當兩點均為陽性則提示檢測結果可靠[4]。HPV分型標準：HPV亞型分為高危型和低危型，16種高危型HPV分別為16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68、53、66、cp8304 型，其中53、66、cp8304型為中國人群常見亞型，5種低危型HPV 分別為 6、11、42、43、44 型[5]。

1.4 統計學處理 采用SPSS 15.0統計軟件處理數據，計數資料比較采用 字2檢驗，多組資料之間比較采用F檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 惠州地區HPV感染亞型分布情況 惠州地區2576例標本經HPV基因檢查和分型診斷篩查出412例HPV感染陽性，感染總陽性率為15.99%，診斷試劑包含的16種HPV高危亞型及5種HPV低危亞型且均有檢出，其中感染單重亞型共349例，包括感染單重高危亞型317例和感染單重低危亞型的32例，多重感染共63例，包括感染2種亞型的51例，感染2種亞型以上的12例，而在HPV亞型分布方面，主要以HPV亞型52、58、16為主，HPV亞型52感染率最高（2.45%），HPV亞型2感染率最低（0.08%），前者明顯高于后者，差異有統計學意義（字2=7.72，P<0.01）；高危型HPV感染361例，感染率為14.01%，低危型HPV感染51例，感染率為1.98%，前者明顯高于后者，差異有統計學意義（字2=7.13，P<0.01），見表 1。

表1 惠州地區HPV感染亞型分布情況

2.2 惠州地區不同年齡段HPV感染分布和所占百分比情況 惠州地區診斷篩查出412例HPV感染標本中，低齡組HPV感染121例，所占百分比為29.38%，中低齡組238例，HPV感染所占百分比為57.77%，中齡組HPV感染39例，所占百分比為9.45%，高齡組HPV感染14例，所占百分比為3.40%，中低齡組>低齡組>中齡組>高齡組，差異有統計學意義（P<0.05），見表2。

表2 惠州地區不同年齡段HPV感染分布 例（%）

3 討論

HPV是一種雙鏈嗜上皮性DNA病毒，屬乳多空病毒科，主要侵犯人體生殖道，可誘發如宮頸炎、生殖器疣等生殖道病變，其中高危型HPV持續感染是宮頸癌變的必要病因之一[6-7]。近年來，隨著社會經濟的發展，人們的生活、思考方式發生了明顯的改變，HPV感染率呈現出上升的趨勢，嚴重降低患者的生活質量[8-9]。HPV感染已成為最常見的性傳播疾病，具有明顯的異質性，其分布也存在種族和地域差異性[10-11]。因此，對其進行大樣本分子流行病學研究以及建立地區性HPV感染流行度及優勢型別基因庫具有重要的臨床意義[12]。

有研究結果顯示，通過HPV導流雜交基因芯片技術可一次性檢測21種常見HPV基因型，且檢測通量大、結果準確，可作為HPV基因分型和調查其分子流行病學特征的理想方法[13]。陳紅舟等[14]研究結果表明，浙江省舟山地區的感染率為22.10%，常見HPV亞型由高至低依次為HPV52、16、58、18、33、81。而順德地區的研究顯示，該地區感染率為16.86%，常見HPV亞型由高至低依次為HPV16、52、58[15]。由此可見不同地區流行的HPV亞型分布存在明顯的差異。本研究通過檢測和分析惠州地區門診和體檢的婦女HPV感染情況及其與年齡的關系，結果顯示2576例標本經HPV基因檢查和分型診斷篩查出412例HPV感染陽性，感染總陽性率為15.99%，在HPV亞型分布方面，由高至低依次為52、58、16，其中HPV亞型52感染率最高（2.45%），HPV亞型2感染率最低，此結果提示惠州地區或人群具有自身的HPV感染特點；而高危型HPV感染率明顯高于低危型HPV，提升患者感染高危型HPV機會更高，在研究HPV疫苗時，應著重針對高危型HPV；此外，在HPV感染所占百分比方面，中低齡患者最高，低齡患者第二，中齡患者第三，高齡患者最低，表明本地區HPV感染率以30~39歲的人群最高，其次為20~29歲人群，且39歲以后隨年齡增長，HPV感染率呈現出下降的趨勢。研究發現，HPV導流雜交基因芯片技術是一項根據中心法則和堿基互補配對原則建立的且可對病原體核酸進行高通量快速檢測的技術，可快速、有效、準確區分HPV亞型。通過該技術加強對HPV易感人群監測、隨訪和定期復查，有利于降低宮頸癌發病率；同時掌握HPV各型別在各年齡段的感染特點，有助于在研發和應用預防性疫苗時，有效地選擇目標人群，有利于提高HPV 感染早期預防和治療的效果，進而改善婦女的生活質量。

綜上所述，惠州地區HPV感染幾率具有顯著的亞型和年齡分布異質性，對指導HPV疫苗研究以及HPV感染早期預防和治療具有重要的臨床價值。

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