甘草多糖抗炎與抗胃潰瘍作用研究

趙云生，毛福英，趙啟鵬，馮 靜，康 晶

(1 寧夏醫科大學 藥學院，寧夏 銀川 750004； 2.寧夏回藥現代化工程技術研究中心, 寧夏 銀川 750004)

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甘草多糖抗炎與抗胃潰瘍作用研究

趙云生1,2*，毛福英1,2，趙啟鵬1,2，馮 靜1，康 晶1

(1 寧夏醫科大學 藥學院，寧夏 銀川 750004； 2.寧夏回藥現代化工程技術研究中心, 寧夏 銀川 750004)

目的：研究甘草多糖抗炎與抗胃潰瘍作用。方法：采用小鼠腹腔毛細血管通透性模型、小鼠乙醇型胃潰瘍模型與利血平型胃潰瘍模型，考察小鼠抗炎與抗胃潰瘍作用效果。結果：甘草多糖高劑量組對小鼠腹腔毛細血管通透性抑制率為38.95%，低劑量組抑制率為15.41%；乙醇型胃潰瘍模型中，甘草多糖高劑量組潰瘍抑制率為61.39%，低劑量組為41.67%；利血平型胃潰瘍模型中，甘草多糖高劑量組潰瘍抑制率為13.39%，低劑量組為3.00%。結論：甘草多糖對毛細血管炎性滲透及乙醇型與利血平型胃潰瘍均具有抑制作用，量效關系明顯。

甘草多糖；抗炎；抗胃潰瘍

甘草為豆科植物甘草(GlycyrrhizauralensisFisch)、脹果甘草(GlycyrrhizainflataBat)，或光果甘草(GlycyrrhizaglabraL.)的干燥根及根莖，始載于《神農本草經》，歷版藥典均有記載，在中藥中占有十分重要的地位，用于脾胃虛弱，倦怠乏力，心悸氣短，咳嗽痰多，脘腹、四肢攣急疼痛，癰腫瘡毒等癥[1]。現代藥理學研究表明，甘草具有保肝、抗炎、抗菌、抗病毒、抗胃潰瘍、鎮咳、抗瘧、抗氧化、抗癌、免疫調節、降糖和抗血小板凝集等多種活性[2-3]。

甘草中的活性成分主要是三萜類、黃酮類與多糖類，其中以甘草酸與黃酮類成分藥理研究較多，甘草酸具有抗炎、保肝、免疫調節、抗病毒、抗腫瘤、抗潰瘍等作用[4]，甘草黃酮類成分具有抗腫瘤、抗氧化、抗衰老、抗心律失常、美白、抗HIV病毒作用[5]，關于甘草多糖研究的藥理文獻還較少，主要集中于抗病毒、抗腫瘤、抗氧化、提高免疫功能方面，本文提取了甘草(GlycyrrhizauralensisFisch)中多糖類物質，對甘草多糖的抗炎與抗胃潰瘍作用進行了研究，以期能夠擴大對甘草多糖藥理活性的認識。

1 材料與儀器

1.1 材料

動物：昆明種小鼠90只，體重(20±2)g，雌雄各半，由寧夏醫科大學動物實驗中心提供，合格證號：SYXK(寧)2011-0001。

甘草：購自寧夏醫科大學附屬回醫院門診部，經筆者鑒定為甘草(GlycyrrhizauralensisFisch)。伊文思藍(國藥集團化學試劑有限公司，優級純GR)，無水乙醇、二甲苯、氯化鈉、冰醋酸、鹽酸、氯化鈉、福爾馬林等均為分析純。

1.2 實驗儀器

TGL-16G型高速臺式離心機(上海安亭科學儀器廠)，UV-2550型可見紫外分光光度計(日本島津)、RE-52A旋轉蒸發儀(上海亞平生化儀器廠)。

2 試驗方法

2.1 甘草多糖溶液制備

將甘草粉碎，過80目藥典篩，取適量，按照甘草與80%乙醇料液比1∶10(g/mL)超聲脫脂3次，40min/次，合并脫脂液，回收乙醇，舍棄80%乙醇提取物。

脫脂后藥材殘渣以80%乙醇少量洗3次，洗脫乙醇液并入脫脂液回收，殘渣揮干溶劑，60℃干燥至無醇味后，加甘草質量20倍體積蒸餾水于75℃超聲提取4次，30min/次，合并水提液，濃縮至小體積，按多糖液∶乙醇為1∶4(v/v)加入無水乙醇，于4℃醇沉24h抽濾，沉淀60℃干燥至無醇味，保存，得甘草總多糖，稱重，根據動物實驗按0.1g/mL制備多糖溶液[6]。

2.2 小鼠腹腔毛細血管通透性實驗

取體重18～22g昆明種小鼠30只，雌雄各半，隨機分為甘草多糖高劑量組10mg/10g，甘草多糖低劑量組3mg/10g，模型對照組。灌胃給藥0.1mL/10g，每日1次，模型組按0.1mL/10g灌飼生理鹽水，連續給藥5天。小鼠于末次給藥 30min 后尾靜脈注射0.6% 伊文思藍生理鹽水溶液0.1mL/10g，隨即腹腔注射0.6%冰醋酸0.1mL/10g，30min后脫臼處死，剪開腹部皮膚肌肉，用 5mL 生理鹽水洗滌腹腔，吸出洗滌液，合并，3000r/min離心15min，取上清液于595nm 波長處測定吸光度OD值，計算抑制率[7]。抑制率=(模型組OD值-實驗組OD值)/模型組OD值×100%。

2.3 小鼠乙醇型胃潰瘍實驗

取體重(20±2)g的昆明種小鼠30只，雌雄各半，隨機分為模型組、多糖高劑量組10mg/10g、多糖低劑量組3mg/10g，共三組，連續7天灌胃給藥，每日1次，模型組按0.1mL/10g灌飼生理鹽水，第6天給藥后小鼠嚴格禁食不禁水24h，第7天給藥0.5h后，灌胃無水乙醇0.1mL/10g，1h后，將小鼠脫頸處死。剖腹，結扎賁門和幽門，從幽門處注入2mL10%的福爾馬林溶液，取胃，浸入10%福爾馬林液中固定30min后，沿胃大彎切開，沖洗干凈胃內容物，用肉眼、放大鏡觀察胃黏膜出血、潰瘍灶的多少、大小及其分布部位。每只胃的損傷程度以記分形式表達，分值越大，潰瘍程度越高，以每組潰瘍分數的均值作為潰瘍指數，損傷區域按如下原則記分：①完整黏膜為0級，記0分；②點狀出血直徑≥1mm，1～5點為1級，記1分；③6～10點為2級，記2分；④10點以上為3級，記3分；⑤條狀出血1～5條為4級，記4分；⑥6～10條為5級，記5分；⑦10條以上為6級，記6分。對于條狀出血：直徑≤1mm計1條、1mm<直徑≤2mm計2條、2mm<直徑≤3mm計3條，以此類推[8]。潰瘍抑制率按下式計算：潰瘍抑制率=(對照組平均潰瘍指數-給藥組平均潰瘍指數)/對照組平均潰瘍指數×100%。

2.4 小鼠利血平型胃潰瘍實驗

取體重18～22g昆明種小鼠30只，雌雄各半，隨機分為：甘草多糖高劑量組10mg/10g，甘草多糖低劑量組3mg/10g，模型對照組。灌胃給藥0.1mL/10g，每日1次，模型組按0.1mL/10g灌飼生理鹽水，第6天給藥后將動物禁食不禁水24h，第7天給藥0.5h后各組動物皮下注射利血平10mg/kg，6h后將動物脫頸椎處死，結扎賁門、幽門后取出胃，向胃內注入10%福爾馬林溶液2mL，并將全胃浸入福爾馬林溶液中固定30min。然后沿胃大彎剪開胃，沖洗干凈胃內容物，進行胃部潰瘍計數。利血平所致胃黏膜損傷主要發生在腺胃部，可呈現出血點或條索狀黏膜損傷[8]。潰瘍指數與潰瘍抑制率的計算同“2.3”項。

3 結果與分析

3.1 小鼠腹腔毛細血管通透性實驗

實驗結果見表1。不同劑量甘草多糖對醋酸所致小鼠急性炎癥有明顯影響，甘草多糖高劑量組OD值顯著高于模型對照組(P<0.05)，甘草多糖高劑量組對小鼠腹腔毛細血管通透性抑制率為38.95%，低劑量組抑制率為15.41%，呈現出明顯的量效關系，說明甘草多糖對醋酸致小鼠毛細血管炎性滲透具有抑制作用。

表1 甘草多糖對小鼠腹腔毛細血管通透性的影響 (±s)

3.2 乙醇型胃潰瘍實驗

實驗結果見表2。甘草多糖對照組的平均潰瘍指數為7.2分，比甘草多糖低劑量組高3分，比甘草多糖高劑量組高4.42分。對照組的潰瘍指數顯著高于甘草多糖低劑量與高劑量組(P<0.05)，而甘草多糖低劑量組與高劑量組潰瘍指數差異不顯著，這可能與本實驗中甘草多糖所用劑量有關，但二者量效關系明顯，潰瘍指數相差1.42分。不同劑量甘草多糖對無水乙醇所致小鼠潰瘍抑制率差異顯著，甘草多糖高劑量組潰瘍抑制率為61.39%，比低劑量組高19.72%。無水乙醇致小鼠胃潰瘍程度與甘草多糖劑量呈明顯量效關系。

表2 乙醇型胃潰瘍小鼠胃黏膜潰瘍指數 (±s)

3.3 利血平型胃潰瘍實驗

實驗結果見表3，利血平型胃潰瘍程度與多糖灌胃量呈量效關系，生理鹽水對照組胃潰瘍與胃出血情況最為嚴重，平均胃潰瘍指數最高，為4.33分，甘草多糖低劑量組與生理鹽水組相比，胃潰瘍與胃出血情況得到一定改善，潰瘍指數降低，為4.20分，甘草多糖高劑量組抑制小鼠胃潰瘍與胃出血情況最為明顯，潰瘍指數明顯比前兩者減小，為3.75分。

小鼠利血平型胃潰瘍模型3個處理間差異不顯著，但這3個處理間具有量效關系，甘草多糖低劑量組潰瘍抑制率為3.00%，比甘草多糖高劑量組低10.39%，甘草多糖對利血平型胃潰瘍具有一定治療作用。

表3 利血平型胃潰瘍小鼠胃黏膜潰瘍指數 (±s)

4 討論

甘草多糖對毛細血管炎性滲透及乙醇型與利血平型胃潰瘍均具有抑制作用，量效關系明顯。

本實驗中乙醇型胃潰瘍模型比利血平型胃潰瘍模型潰瘍指數與潰瘍抑制率高，造模效果好，是由于乙醇型與利血平型胃潰瘍模型作用機理不同，兩種模型在同一劑量的甘草多糖作用下，表現出一定差異，甘草多糖對利血平型胃潰瘍模型的作用效果還有待進一步研究。

[1] 國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典[S].北京：中國醫藥科技出版社, 2010:80-81.

[2] 魏勝利,高雪巖,王文全.甘草產業技術研究促進三北地區三農經濟發展[J].中國中藥雜志, 2009, 34(24): 3158-3161.

[3] 劉波, 陸明, 劉凡. 野甘草乙醇提取物治療大鼠胃潰瘍作用的研究[J]. 現代中西醫結合雜志, 2007,16(19):2654.

[4] 齊敏.甘草酸藥理作用及機制的研究進展[J].牡丹江醫學院學報, 2009, 30(3): 24-25.

[5] 孫蕓,阿依努爾·吾買爾,燕雪花,等.甘草黃酮的提取方法及藥理作用研究進展[J].新疆中醫藥,2009, 27(1): 72-75.

[6] 趙云生, 姚海花, 王其林, 等. 烏拉爾甘草多糖提取工藝優化研究[J]. 遼寧中醫雜志, 2013, 40(3): 526-529.

[7] 林曉春, 陳育堯, 白殊同, 等. 安胃瘍抗炎鎮痛作用及對慢性淺表性胃炎大鼠胃粘膜損傷的抑制[J]. 中藥藥理與臨床, 2013, 29(2): 74-77.

[8] 田徽, 阮期平, 李崇進, 等. 馬蘭抗實驗性胃潰瘍作用有效部位的篩選[J]. 時珍國醫國藥, 2013, 24(2): 324-325.

(責任編輯：余 婷)

Study on the Anti-inflammatory and Anti-gastric Ulcer Effect of Glycyrrhiza Polysaccharide

Zhao Yunsheng*1,2,Mao Fuying1,2,Zhao Qipeng1,2,Feng Jing1,Kang Jing1

(1.Ningxia Medical University Pharmacy College, Yinchuan 750004，China;2.Ningxia Research Center of Modern Hui Medicine Engineering and Technology, Yinchuan 750004，China)

Objective:Study on the anti-inflammatory and anti-gastric ulcer activities of glycyrrhiza polysaccharide. Methods:Examine the anti-inflammatory and anti-gastric ulcer effects for mice with the permeability model of mice abdomen capillaries and mice gastric ulcer models made by ethanol and reserpine.Results:The glycyrrhiza polysaccharide high dose group had a 38.95% inhibition for the permeability of mice abdomen capillaries, and the low dose group had a 15.41% inhibition; the high dose group had a 61.39% gastric ulcer inhibition for the mice model made by ethanol, the low dose group had a 41.67% inhibition; the high dose group had a 13.39% inhibition for the model made by reserpine, and the low dose group had a 3.00% inhibition.Conclusion:The glycyrrhiza polysaccharide has a obvious inhibitory effects and dose-effect relationship for the models of the permeability of mice abdomen capillaries and mice gastric ulcer made by ethanol or reserpine.

Glycyrrhizapolysaccharide; Anti-inflammatory; Anti-gastric Ulcer

2014-09-02

寧夏自然科學基金項目(NZ10110)；國家科技支撐計劃子課題(2011BAI05B01)

趙云生(1974-)，男，博士，寧夏醫科大學副教授、碩士生導師，研究方向為中藥品質與資源。

R285.5

A

1673-2197(2015)09-0012-02

10.11954/ytctyy.201509005