藏藥材止瀉木子質量標準研究

孫緒丁，權富家，任松鵬，趙延霞

(1.山東阿如拉藥物研究開發有限公司，山東 濟南 250101；2.金訶藏藥股份有限公司，青海 西寧 810003)

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藏藥材止瀉木子質量標準研究

孫緒丁1，權富家2，任松鵬1，趙延霞1

(1.山東阿如拉藥物研究開發有限公司，山東 濟南 250101；2.金訶藏藥股份有限公司，青海 西寧 810003)

目的：研究制定藏藥材止瀉木子的質量標準。方法：采用薄層色譜(TLC)法定性鑒別止瀉木子；采用高效液相色譜(HPLC)法測定錐絲堿含量，采用Waters C18柱(250mm×4.6mm，5μm)色譜柱，柱溫為25℃，甲醇-0.005mol/L庚烷磺酸鈉(65∶35，V/V)，流速為1.0mL/min，檢測波長為215nm。結果：TLC方法專屬性強，特征斑點清晰；HPLC法測定大黃中錐絲堿含量的線性范圍為0.116～1.160mg/mL(r=0.999 4，n=5)，平均加樣回收率為97.43%，RSD為1.11%(n=6)。結論：建立藏藥材止瀉木子的定性、定量分析方法簡便易行，重現性好，準確度高，可有效控制藥材質量。

止瀉木子；薄層色譜法；高效液相色譜法；質量標準

近年來，隨著藏藥制劑的推廣，止瀉木子用量逐年增大，現階段質量標準難以滿足藥材質量控制要求，給臨床安全用藥帶來隱患。止瀉木子為夾竹桃科植物止瀉木(HolarrhenaantidysentericaWall.ex A.DC.)的干燥種子，果期采集果實，取種子曬干。止瀉木子具有清熱、利膽、止瀉的作用，用于治療赤巴病、肝膽病、胃腸熱病、腹瀉、痢疾等疾病，用于十味黑冰片丸、十三味榜嘎散、復方酸藤消痔膠囊等多個藏藥制劑，應用較為廣泛。藏藥部頒標準中WS3-BC-0014-95號，無任何質量控制內容，不足以控制止瀉木子的質量，且文獻未發現任何有關止瀉木子的質量控制方法。本研究建立薄層色譜鑒別和液相含量測定方法，穩定性、重復性較好，且方法簡便易行，專屬性強，精密度、回收率較高，為止瀉木子質量標準的建立提供參考。現具體報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

L-2100型日立高效液相色譜儀(包括日立L-2100泵，日立L-2400紫外檢測器)；色譜柱：Waters C18柱(250mm×4.6mm，5μm)。

島津AUW220D電子天平，KQ-300B超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 試藥

止瀉木子對照藥材(批號：20110501)、錐絲堿對照品(批號：00003711-048)；止瀉木子(金訶藏藥股份有限公司提供，批號分別：20120101、20120102、20120103)；薄層硅膠G板(青島海洋化工分廠)。

甲醇為色譜純，超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 TLC鑒別

取本品2g，加1%鹽酸50mL，超聲處理1h，過濾，濾液加氨水調節pH至9～10，用二氯甲烷萃取濾液3次，每次20mL，合并萃取液，蒸干(40℃以下)，加甲醇2mL溶解，過濾，取續濾液作為供試品溶液。取止瀉木子對照藥材2g，同法制備對照品溶液，取錐絲堿對照品適量，加甲醇制備0.1mg/mL錐絲堿對照品溶液。按薄層色譜法實驗，吸取上述溶液各5μL，分別點于硅膠G薄層板，以甲苯-乙酸乙酯-二乙胺(6.5∶2.5∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以改良碘化鉍鉀試液，加熱至顯色清晰。在與對照品相應位置上，供試品色譜顯相同的熒光斑點。

圖1 TLC鑒別色譜

注：1.對照品溶液；2.對照藥材溶液；3～5.三批供試品溶液，批號分別為20120101、20120102、20120103

2.2 HPLC法測定含量

2.2.1 波長選擇 取錐絲堿對照品溶液，于190～400nm波長范圍內進行掃描，發現樣品為末端紫外吸收，可選擇205～220nm為檢測波長。同時，考慮流動相為甲醇，其截至波長為205nm，由于樣品吸收峰不能過小，選定215nm為檢測波長。

2.2.2 色譜條件 色譜柱：Waters C18柱(250mm×4.6mm，5μm)，流動相為甲醇-0.005mol/L庚烷磺酸鈉(65∶35)，檢測波長為215nm，柱溫為25℃，流速為1.0mL/min，進樣量為10μL。

2.2.3 對照品溶液制備 取錐絲堿對照品適量，精密稱量，加甲醇制備0.1mg/mL錐絲堿對照品溶液。

2.2.4 供試品溶液制備 取本品粉末1g，精密稱量，置具塞錐形瓶，精密加入甲醇50mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率為120W，頻率為40kHz)30min，放冷，再稱定重量，加甲醇補充減失重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.2.5 系統適用性試驗與陰性干擾試驗 在“2.2.2”項色譜條件下，分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結果表明，供試品色譜中錐絲堿峰與其相鄰色譜峰分離度均大于1.5，可用于止瀉木子含量的測定。見圖2。

圖2 HPLC色譜

2.2.6 線性關系考察 精密量取錐絲堿對照品貯備液溶液(錐絲堿含量為1.16mg/mL)1.0、3.0、5.0、8.0、10.0mL，分別置10mL容量瓶，加水稀釋至刻度，搖勻，精密進樣10μL。以峰面積(A)對溶液濃度(C)進行線性回歸，得回歸方程：Y= 308.2X- 8.136，R=0.999 4。結果表明：錐絲堿在0.116～1.160mg/mL范圍內，色譜峰峰面積(A)與對照品濃度(C)線性關系良好。

2.2.7 精密度試驗 精密吸取錐絲堿對照品溶液10μL，注入液相色譜儀，各連續測定6次，記錄峰面積并計算相對標準偏差，RSD%=0.152%(n=6)。結果表明，儀器精密度良好。

2.2.8 穩定性試驗 精密吸取供試品溶液10μL，分別于0、4、8、12、24h注入液相色譜儀，記錄峰面積并計算峰面積相對標準偏差，RSD%=0.189%(n=5)。結果表明，供試品溶液中錐絲堿在24h內測定結果穩定。

2.2.9 重復性試驗 取同一批止瀉木子樣品(批號：20120101)6份，制備供試品溶液，精密吸取10μL，注入液相色譜儀進行測定，計算得出樣品中錐絲堿含量為0.46%，相對標準偏差RSD%=0.579%(n=6)。結果表明，該分析方法重復性良好。

2.2.10 加樣回收率試驗 精密稱取已知含量的同一批樣品(批號：20120101，含量為0.46%)0.5g，共6份，分別置于具塞錐形瓶中，均精密加入25mL錐絲堿對照品溶液(含量為1.16mg/mL)和甲醇25mL，按“2.2.4”項方法制備供試品溶液，按“2.2.2”項色譜條件進行測定，分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀測定，以外標法方程計算含量，并計算回收率。結果顯示：供試品中錐絲堿平均加樣回收率為97.43%，RSD為1.11%(n=6)，該方法測定結果準確。

2.2.11 樣品含量測定 按“2.2.4”項所述方法制備的三批供試品溶液(批號分別為20120101、20120102、20120103，每批3份)。按“2.2.2”項色譜條件進行含量測定，分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測定，根據外標法方程分別計算供試品中錐絲堿的含量。見表1。

表1 止瀉木子含量測定結果 (n=3)

3 討論

隨著藏藥材止瀉木子相關制劑十味黑冰片丸、十三味榜嘎散、復方酸藤消痔膠囊的普及，其臨床用量越來越大。但目前尚無質量控制相關研究，制劑使用存在一定的安全隱患，本文通過鑒別止瀉木子中生物堿及測定錐絲堿含量建立其質量控制標準。

本研究，除上述展開劑外，也可選擇正己烷-乙酸乙酯-甲醇-二乙胺(10∶8∶2∶1)進行展開，效果相當。測定錐絲堿含量研究中，使用簡單流動相如甲醇-水、乙腈-水或簡單鹽類均不能較好地分離止瀉木子中錐絲堿，研究發現離子流動相對后續效果改善明顯，除庚烷磺酸鈉洗脫外，使用0.1%三氟乙酸也可達到良好的分析效果。

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(責任編輯：李嵐春)

2014-12-28

濟南市科技局“基于神經功能重建型中風后遺癥中藥新藥的研發”(2013019)

孫緒丁(1987-)，男，山東阿如拉藥物研究開發有限公司經理，研究方向為藥品分析。

R258

A

1673-2197(2015)08-0020-02

10.11954/ytctyy.201508010