秋石斛組織培養的研究

張娟

摘要：秋石斛為蘭科植物，具有較高的觀賞價值。本試驗旨在建立秋石斛的工廠化育苗模式。采用秋石斛的高位芽為外植體，用75%酒精消毒1min后，再用0.1%HgCl2消毒20min，達到最佳的消毒效果。試驗發現最佳的不定芽誘導培養基為MS+6-BA1.0mg·L1+IBA0.5mg·L1+土豆泥80g·L1+活性炭1g·L1，增殖系數為4.5。最佳的生根壯苗培養基為MS+IBA0.8mg·L1+土豆泥80g·L1+活性炭1g·L1，生根率99%。移栽成活率達到95%。

關鍵詞：秋石斛;組織培養;不定芽誘導;生根培養

中圖分類號：S723.1+32.6文獻標識碼：A文章編號：1004-3020（2015）03-0020-03

TissueCultureTechniqueofDendrobiumhybrida

ZhangJuan

（FujianResearchInstituteofForestryFuzhou350012）

Abstract：DendrobiumhybridabelongstofamilyOrchidaceaewithhighornamentalvalue.WeestablishedamassproductionmethodforD.hybrida.Takinghighpositionbudsastheexplants，theoptimaldisinfectiontreatmentwas75%alcoholfor1minuteandthen0.1%HgCl2for20minutes.TheresultsshowedtheoptimalmediumforproliferationofadventitiousbudwastheMSmediumsupplementedwith1mg·L16-BA，0.5mg·L1IBA，100mg·L1mashedpotatoand1mg·L-1activatedcharcoal（AC），providingaproliferationcoefficientof4.5.TheoptimalmediumforrootingwasMSmediumsupplementedwith0.8mg·L1IBA，100mg·L1mashedPotatoand1mg·L1AC，providing99%rootingrateand95%survivalrate.

Keywords：Dendrobiumhybrida;tissueculture;inductionofadventitiousbud;rootingculture

秋石斛Dendrobiumhybrida為蘭科石斛屬，主要分布在我國西南、華南、臺灣等熱帶、亞熱帶和秦嶺以南地區，喜高溫、濕潤環境。秋石斛每年秋季開花，花色多，花量多，而且花期可長達兩個月，具有非常高的觀賞價值，又由于其花形類似蝴蝶，故稱蝴蝶石斛[1]，作為一種新型的切花品種，常用于餐盤布置、插花等，近年來市場需求量很大[2]。目前秋石斛的主要繁殖方式為分株和高芽繁殖[3]，繁殖系數低，推廣局限性大。本試驗對秋石斛外植體消毒、增殖培養、生根培養等進行研究，以期為大規模的組培苗生產提供了技術支撐。

1材料和方法

1.1材料

本試驗以秋石斛品種“陽光”的高位芽為外植體，秋石斛材料由鑫閩種業有限公司提供。

1.2方法

1.2.1外植體的消毒

于2012年3月中旬，將生長狀況良好的植株上萌發的高位芽取下，剝去外層葉片，剪去根和頂部葉片，用飽和洗衣粉溶液浸泡30min后，清水沖洗干凈。在超凈工作臺中進行消毒處理，先用75%酒精消毒，再用0.1%Hgcl2浸泡，最后用無菌水沖洗5次，消毒處理見表1。

經過消毒處理的材料接種于MS+6BA2.0mg·L1+NAA0.5mg·L1+胰蛋白胨2g·L1的外植體培養基。每瓶接種一個莖段，試驗重復3次。

1.2.2不定芽的增殖

經過初代培養的材料接種在繼代培養基中，用于誘導不定芽。比較不同種類和不同用量的添加物，對秋石斛不定芽增殖的影響。每瓶培養基中接種5個莖段，每個處理20瓶，試驗重復3次。接種50d后，觀察苗木生長情況，統計增殖率。繼代培養基：①MS+6BA1.0mg·L1+IBA0.5mg·L1+蛋白胨2g·L1;②MS+6BA1.0mg·L1+IBA0.5mg·L1+花寶一號2g·L1;③MS+6BA1.0mg·L1+IBA0.5mg·L1+土豆泥80g·L1;④MS+6BA1.0mg·L1+IBA0.5mg·L1+香蕉泥80g·L1;⑤MS+6BA1.0mg·L1+IBA0.5mg·L1+土豆泥80g·L1+活性炭1g·L1。

1.2.3根的誘導

將經過增殖培養，生長至3～4cm的單株從不定芽中剝離，接種在添加不同濃度的ABT（0.6，0.8，1.0）和IBA（0.6，0.8，1.0）MS培養基中，并在培養基中添加80g·L1土豆泥和1g·L1活性炭（Ac），進行生根壯苗培養。每瓶培養基中接種10個單株，每個處理10瓶，試驗重復3次。50d后觀察根的生長情況以及苗木生長狀況。生根培養基如下：①MS+ABT0.6mg·L1+土豆泥80g·L1+AC1g·L1;②MS+ABT0.8mg·L1+土豆泥80g·L1+AC1g·L1;③MS+ABT1.0mg·L1+土豆泥80g·L1+AC1g·L1;④MS+IBA0.6mg·L1+土豆泥80g·L1+AC1g·L1;⑤MS+IBA0.8mg·L1+土豆泥80g·L1+AC1g·L1;⑥MS+IBA1.0mg·L1+土豆泥80g·L1+AC1g·L1。

1.2.4煉苗移栽

將高長至7～8cm的生長健壯、根系發達的生根苗移到大棚。打開瓶蓋煉苗3d后，取出生根苗，洗凈根部附著培養基，移栽于水苔基質中，觀察移栽成活率。

1.3培養條件

試驗培養基中均添加30g·L1白糖，卡拉膠6g·L1，pH值均為5.8。經過121℃、1.1kg·cm2高壓消毒20min。培養室溫度為25±2℃，光強1000～1500lx，光照時間12h·d1。

1.4數據統計

污染率=污染株數/接種數×100%;存活率=存活株數/接種數×100%;生根率=生根株數/接種數×100%;移栽成活率=成活株數/移栽總株數×100%。

2結果與分析

2.1不同消毒處理對秋石斛消毒效果的影響

試驗中設計6種不同的消毒處理，將經過消毒的芽接種于初始培養基中，15d后觀察統計污染率和成活率。統計結果如表1。試驗結果表明采用處理5：酒精消毒1min后，用0.1%HgCl2消毒20min，能達到最佳的消毒效果，存活率達到68%。在0.1%HgCl2消毒時間一致時，發現酒精消毒30s的消毒效果遠比酒精消毒1min效果差。當升汞消毒時間增加到25min時，由于過長的消毒時間對植物細胞產生毒害，使其死亡率提高。

2.2不定芽增殖

在繼代培養基中添加不同的添加物，觀察其對不定芽增殖的影響，50d后統計增殖率并進行方差分析。從表2和表3中可以看出，不同培養基配比下，秋石斛的增值系數存在顯著性差異（F0.05（4，10）=3.47805

2.3生根培養

將長為3cm左右的無根單株接種到生根培養基中，從表4可以看到：在MS+IBA0.8mg·L1+土豆泥80g·L1+AC1g·L1的培養基中，生根率和根數都優于其它組合，并且苗木葉片濃綠、莖粗壯、生長狀況優良。試驗中發現IBA對秋石斛根的誘導作用優于ABT，羅嵐[6]在秋石斛的生根培養試驗中，認為IBA能促進秋石斛生根，這與本試驗結果一致。

3結論與討論

試驗發現最佳的不定芽誘導培養基為MS+6BA1.0mg·L1+IBA0.5mg·L1+土豆泥80g·L1+活性炭1g·L1，增殖系數為4.5;最佳的生根壯苗培養基為MS+IBA0.8mg·L1+土豆泥80g·L1+活性炭1g·L1，生根率99%。

秋石斛多種植于高溫高濕的環境中，莖葉中繁殖著大量的微生物，給外植體的消毒造了很大的困難。陸順教[7]等分別對秋石斛外植體的取材部位進行了研究，認為基部萌發的側芽細菌較多，而高位芽不易受內生菌感染。本試驗采用高位芽為外植體，一定程度上避免了來自基質的污染，且內生菌較少，消毒效果較好。

試驗在秋石斛的增殖過程中發現，有添加土豆泥培養基較未添加土豆泥的培養基，能更為有效的促進苗木生長，苗木葉片濃綠，莖稈粗壯;未添加活性炭的培養基與添加活性炭的培養基相比，苗木容易出現褐化現象，從而影響了植物快速繁殖的成功率。這是以后試驗或生產上需要注意和值得進一步思考的地方。

參考文獻

[1]鄒成勇，劉燕.我國石斛屬植物研究進展[J].安徽農業科學，2010，38（12）：61646166.

[2]王春.石斛蘭組織培養及快繁技術研究[J].浙江林業科技，2002，22（2）：3840.

[3]江秀娜，李軍，詹海洋，等.解讀秋石斛的四大繁殖方法[J].中國花卉盆景，2004，（9）：38.

[4]陳亞鴻，洪磊，陳雄庭.減少秋石斛在組織培養中的褐化研究[J].現代農業科學，2009，16（3）：4448.

[5]周華偉，李世君，錢秀紅，等.組織培養中若干因素對石斛蘭試管苗生長的影響[J].浙江農業大學，1995，21（6）：622624.

[6]羅嵐.秋石斛立體快速繁殖研究[J].佛山科學技術學院學報，2004，22（02）：6971.

[7]陸順教，易雙雙，任羽.秋石斛側芽外植體消毒方法的研究[J].基因組學與應用生物學，2014，33（3）：674681.

[8]王穎，劉仁祥，聶瓊，等.不同防褐劑對煙草愈傷組織培養褐化現象的抑制效應[J].貴州農業科學，2012，40（1）：2627.