蠶蛹油乙酯的安全性評價

趙士琛 等

摘要[目的]對蠶蛹油乙酯進行安全性評價。 [方法]采用最大耐受量法進行急性經口毒性評價，并采用Ames試驗、小鼠骨髓細胞微核試驗和小鼠精子畸變試驗進行蠶蛹油乙酯的遺傳毒性研究，并開展大鼠30 d喂養試驗。 [結果] 蠶蛹油乙酯經急性經口毒性評價為實際無毒級物質；Ames試驗、小鼠骨髓細胞微核試驗和小鼠精子畸變試驗均未發現蠶蛹油乙酯有顯著的遺傳毒性；大鼠30 d喂養試驗中，各試驗組大鼠生長發育良好，無異常行為和中毒癥狀。 [結論]蠶蛹油乙酯為實際無毒物，無遺傳毒性，可長期服用。

關鍵詞蠶蛹油乙酯；安全性；評價

中圖分類號S88-9文獻標識碼A文章編號0517-6611（2015）28-139-03

Study on Toxicological Safety Evaluation of Ethyl Silkworm Oil

ZHAO Shichen， WU Yonghua， CHEN Shanglong et al

（Xuzhou Institute of Technology， Xuzhou， Jiangsu 221111）

Abstract[Objective] To assess the toxicological safety of ethyl silkworm oil. [Method] Acute toxicity test， genetic toxicity test （Ames test， micronucleus test of born marrow in mice， sperm shapeabnormality test in mice） and thirtyday feeding test in rats were used in this study according to the procedures for toxicological assessment of food. [Result] The maximum tolerated dose（MTD） of ethyl silkworm oil on male and female mice were all larger than 17.56 g/kg.The results of Ames test， mouse bone marrow micronucleus test and detection of chromosome aberration experiment were negative. No significant toxicity was observed by 30day feeding experiment. [Conclusion] Ethyl silkworm oil is highly safe with neither acute toxicity nor genotoxicity.

Key wordsEthyl silkworm oil； Safety； Assessment

蠶蛹是一種繅絲副產品，通常被作為飼料或肥料利用，在我國某些地區也有食用蠶蛹的悠久歷史。由于蠶蛹富含蛋白質、不飽和脂肪酸等成分，近年來對蠶蛹的研究已經引起國內外學者的廣泛關注[1]。目前對蠶蛹的研究主要集中在對蠶蛹蛋白、肽和油脂的提取、分析檢測及相關生物活性等方面。邱英華等[2]對蠶蛹蛋白提取與脫臭工藝進行了研究，最終利用蠶蛹制得灰白色無嗅可滿足食品級要求的蛋白粉末。許強華等[3]將蠶蛹蛋白與畜禽肉蛋白營養差異進行了比較與探討，結果發現蠶蛹蛋白是一種非常優質的蛋白來源。吳瓊英等[4]對繅絲蠶蛹中的水溶性和堿溶性蛋白組分進行營養學評價，結果發現蠶蛹蛋白水溶性和堿溶性組分中的氨基酸種類齊全，并且發現蠶蛹的水溶性蛋白和堿溶性蛋白的堿性蛋白酶酶解產物均具有較強的ACE抑制活性。徐家玉等[5]對蠶蛹蛋白緩解運動性疲勞的作用進行了研究，結果發現蠶蛹蛋白具有緩解運動性疲勞的作用。賈俊強等[6]、潘文娟等[7]和張研宇等[8]對蠶蛹油脂肪酸組成進行了分析，發現蠶蛹油富含大量不飽和脂肪酸。張岫美等[9]蠶蛹油α亞麻酸提取工藝進行了研究。

近年來，也有部分學者對蠶蛹進行深加工以制備生物活性物質。張明春等[10]采用酶解與膜法聯用分離制備得到蠶蛹生物活性肽，并且發現該肽對糖分解代謝丙酮酸生成有促進作用。施英等[11]制備了蠶蛹油微膠囊。雖然對蠶蛹進行了大量研究，但尚未見對蠶蛹油乙酯系統安全性評價的相關報道。筆者參照GB 15193.1-2014《食品安全性毒理學評價程序》對蠶蛹油乙酯進行安全性評價[12]，以望為蠶蛹油乙酯的開發利用提供一定的研究基礎。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1受試物。蠶蛹油乙酯樣品由南通福爾生物制品有限公司提供，樣品通過蠶蛹油與食用乙醇酯進行交換反應得到，蠶蛹油乙酯的主要成分為亞麻酸乙酯。

1.1.2實驗動物。SPF級昆明種小鼠和SD大鼠。

1.1.3試驗菌株。鼠傷寒沙門氏菌組氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102試驗菌株，由湖南省疾病控防中心提供。

1.2主要試劑多氯聯苯（分析純）；甲醇（分析純）；二甲基亞砜（DMSO，分析純）；血液生化指標檢測試劑盒。

1.3主要儀器貝克曼DXC800全自動生化分析儀，美國；OLYMPUS 顯微鏡，型號為CH20，日本；梅特勒托利多電子分析天平，型號XPE105，瑞士；酶標儀Spectra Max M2，美國。

1.4試驗方法

1.4.1小鼠經口急性毒性試驗。試驗參照GB 15193.1-2014《食品安全性毒理學評價程序》進行 [12]，采用最大耐受劑量法。選用體重為18～22 g的SPF級昆明種小鼠20只，雌雄各半，一次經口灌胃， 灌胃后觀察2周內死亡動物數及動物的機體健康情況。

1.4.2遺傳毒性試驗。

1.4.2.1Ames試驗。參照GB 15193.1-2014《食品安全性毒理學評價程序》進行[12]。試驗采用鼠傷寒沙門菌組氨酸缺陷型試驗菌株進行試驗，設5 000、1 000、200、40和8 μg/皿5個劑量組，每個劑量3個重復，平行試驗1次。

1.4.2.2小鼠骨髓細胞微核試驗。參照GB 15193.1-2014《食品安全性毒理學評價程序》進行[12]。采用間隔24 h 2次經口灌胃法進行試驗。以40 mg/（kg·bw）劑量的環磷酰胺為陽性對照，食用植物油為陰性對照。試驗組高、中、低3個劑量分別為10.00、5.00和2.50 g/（kg·bw）。采用t檢驗進行統計與分析。

1.4.2.3小鼠精子畸變試驗。參照GB 15193.1-2014《食品安全性毒理學評價程序》進行[12]。以40 mg/（kg·bw）劑量的環磷酰胺為陽性對照，以食用植物油為陰性對照。試驗組高、中、低3個劑量分別為10.00、5.00和2.50 g/（kg·bw），相應劑量的受試液采用灌胃方式給小鼠給藥。每天灌胃1次，連續5 d，于末次灌胃后的第30天處死動物，取雙側副睪，取精子制成涂片，染色后顯微觀察統計畸變精子發生率。

1.4.3大鼠30 d喂養試驗。取SD大鼠80只，雌雄各半，將實驗動物隨機分為4組：對照組及3個受試物組，每組20只，雌雄各半。設置樣品低、中、高劑量分別為1.25、2.50和5.00 g/（kg·bw）（相當于人體推薦劑量的25、50、100倍）。采取將樣品摻入飼料中給樣，對照組給予基礎飼料，連續30 d。

眼內瞼取血測定血紅蛋白含量、紅細胞計數及白細胞計數、白細胞分類等血液學指標。取血清測定天冬氨酸轉氨酶（AST）、丙氨酸轉氨酶（ALT）、尿素氮（BUN）、肌酐（CRE）、血糖（GLU）、甘油三酯（TG）、總膽固醇（CHO）、總蛋白（TP）和白蛋白（ALB）等生化指標。

1.4.4數據統計與分析。試驗數據使用SPSS11.0統計軟件進行統計與分析。

2結果與分析

2.1小鼠的急性經口毒性試驗試驗過程中試驗組小鼠，采食、活動均未發現有顯著影響。由表1可知，以17.56 g/（kg·bw）劑量的樣品給不同性別的昆明種小鼠灌胃后未見明顯中毒癥狀，14 d內無死亡。試驗末將受試動物處死進行解剖檢查，肝、脾、腎、胃、腸、心、肺等主要臟器，未見明顯異常改變。樣品對雌、雄昆明種小鼠的最大受劑量（MTD）大于17.56 g/（kg·bw）。根據《保健食品檢驗與評價技術規范》中的急性毒性分級標準，屬無毒級[13]。

2.2遺傳毒性試驗

2.2.1Ames試驗。供試品對TA97、TA98、TA100、TA102 標準菌株在有無S9混合液條件下均未引起基因組堿基置換或移碼突變，與自發回變組相同（P >0.05），而與陽性對照組相比差異級顯著（P < 0.01）。由表2可知，蠶蛹油乙酯樣品的Ames試驗結果為陰性。

2.2.2小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗。按照“1.4.2”中方法進行小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗。由表3可知，各劑量組微核率與陰性對照組相比均無顯著性差異（P>0.05），而環磷酰胺組與陰性對照組相比有極顯著性差異（P<0.01）。這表明蠶蛹油乙酯對小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗結果為陰性。

2.3.2血液生化學測定結果。

由表7可知，各劑量組雌雄大鼠的總蛋白、白蛋白、谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶、尿素氮、肌酐、血糖、膽固醇及甘油三酯與對照組相比均無顯著差異（P>0.05），說明產品未對大鼠血液生化指標產生顯著影響。

3結論與討論

蠶蛹油具有改善記憶、抗血栓形成和治療高脂高糖誘導的大鼠脂肪性肝炎等作用，對蠶蛹油的研究已有不少報道[14-16]。蠶蛹油乙酯是從蠶蛹中提取蠶蛹油，再經過酯交換方法得到的，其主要成分為亞麻酸乙酯。筆者通過對蠶蛹油乙酯的安全性評價，結果表明蠶蛹油乙酯對昆明種雌、雄小鼠的最大耐受劑量（MTD）均大于17.56 g/（kg·bw），屬于實際無毒級；遺傳毒性試驗（Ames試驗、小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗、小鼠精子畸變試驗）結果均為陰性，說明蠶蛹油乙酯無遺傳毒性；大鼠30 d喂飼期間動物生長發育良好，蠶蛹油乙酯對大鼠體重、血液生化指標等均無顯著性影響（P>0.05）。綜上所述，蠶蛹油乙酯屬于無毒級產品，可長期服用。

參考文獻

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