趙永強,張紅杰,2,李來好,*,楊賢慶,郝淑賢,魏 涯,岑劍偉
(1.中國水產科學研究院南海水產研究所,農業部水產品加工重點實驗室,國家水產品加工技術研發中心,廣東廣州 510300;2.上海海洋大學食品學院,上海 201306)
水產品非熱殺菌技術研究進展
趙永強1,張紅杰1,2,李來好1,*,楊賢慶1,郝淑賢1,魏 涯1,岑劍偉1
(1.中國水產科學研究院南海水產研究所,農業部水產品加工重點實驗室,國家水產品加工技術研發中心,廣東廣州 510300;2.上海海洋大學食品學院,上海 201306)
本文綜述了國內外水產品非熱殺菌技術研究進展,介紹了超高壓殺菌、臭氧殺菌、酸性電解水殺菌、輻照殺菌、高密度CO2殺菌和生物殺菌等非熱殺菌技術的作用原理、特點及其在水產品加工中的應用進展,并分析了非熱殺菌技術的發展趨勢,為其在水產品加工貯藏中的應用推廣提供參考。
非熱殺菌,水產,應用,進展
水產品味道鮮美,營養價值高,是人類動物蛋白質的重要來源之一。水產品的腐敗變質通常是由微生物引起的,微生物在適宜的環境條件下快速生長繁殖,分解利用水產品的蛋白質、氨基酸及一些含氮物產生氨和三甲胺等一系列腐敗產物。傳統的熱殺菌方式雖可殺滅微生物,但是在殺菌過程中也會導致水產品中營養成分的流失,并且會使其風味、色澤和口感等特性發生變化。與傳統的殺菌方式比較,超高壓殺菌等非熱殺菌技術不僅可以殺死微生物,而且較好保持了水產品原有的營養成分、風味、色澤、口感和新鮮度,具有明顯優勢。
國外對非熱殺菌技術的應用研究由來已久,如超高壓在食品工業上的應用是由日本京都大學林立丸教授于1986年提出的[1]。許多國家也都對一些非熱殺菌技術的原理、方法、技術細節及應用前景進行了廣泛的研究,并且研究的深度和廣度正在不斷擴大。我國對非熱殺菌技術的研究起步較晚,但憑借著科技的進步以及非熱殺菌處理食品的顯著優點,近年來非熱殺菌技術在水產品領域的應用得到了迅速發展。非熱殺菌技術在水產品加工中的應用越來越受到我國科研工作者的重視。
本文主要介紹了超高壓殺菌、臭氧殺菌、酸性電解水殺菌、輻照殺菌、高密度CO2殺菌和生物殺菌等非熱殺菌技術的作用原理和特點及研究進展,旨在為其在水產品加工貯藏中的應用推廣提供參考。
超高壓殺菌技術(ultra-high pressure processing,UHP)是指將食品物料經軟包裝后放入液體介質(如水等)中,使用100~1000MPa壓力在常溫或低溫條件下作用一段時間,從而達到殺菌的目的[2]。超高壓殺菌技術的殺菌機理是高壓會影響細胞形態,導致菌體細胞壁和細胞膜的破裂,進而造成菌體內成分泄露[2]。同時,超高壓會使微生物內部蛋白質非共價鍵斷裂,從而導致蛋白質變性,致使微生物內部組織被破壞[3]。此外,超高壓還會導致酶全部或部分失活[2]。這些因素綜合作用導致了微生物的死亡。
超高壓殺菌技術對幾乎所有的細菌、霉菌和酵母菌均具有殺滅作用。近年來,超高壓殺菌技術在水產品加工方面的應用已成為國內外的研究熱點。Erkan等[4]研究了超高壓殺菌處理對大西洋鯛(Sparusaurata)品質和貨架期的影響,結果表明3℃下,經250MPa壓力處理5min的大西洋鯛在4℃下貯藏,其貨架期與未經處理的對照組相比延長了3~5d,且保持了良好的風味和質構。Kaur等[5]在室溫(25±2)℃條件下,采用不同壓力處理黑虎蝦(Penaeusmonodon)5min后于(2±0.5)℃條件下貯藏,研究處理后黑虎蝦的品質及貨架期變化。結果表明:最佳處理壓力為435MPa,該壓力下室溫處理黑虎蝦5min,其鮮度、質構及色差等品質保持較好,貨架期由對照組的5d延長至15d。Leon等[6]研究了超高壓對牡蠣(Crassostreagigas)中諾如病毒(Norovirus)的影響,結果表明高壓可以顯著的使對人有致命危害的諾如病毒失活。宋吉昌等[7]研究了超高壓對新鮮海蝦(Fenneropenaeuschinensis)的滅菌效果,結果表明,在壓力為400MPa,處理時間為15min的條件下,對海蝦重復加壓3次可殺滅海蝦中99.3%的微生物。張曉敏等[8]對新鮮牡蠣的超高壓加工技術進行了研究,結果表明,超高壓處理對牡蠣具有明顯的殺菌效果,處理壓力400MPa,處理時間20min,加壓2次時滅菌效果最好,且該條件下牡蠣原有品質得到了較好的保持。
大量研究結果表明超高壓殺菌技術可顯著延長水產品貨架期,保持并改善水產品品質,具有廣闊的開發利用前景。超高壓處理液體介質時是個瞬間過程且僅針對性破壞分子中的非共價鍵,在此過程中高壓對肽段和蛋白質等高分子物質以及維生素、色素和風味物質等低分子物質的共價鍵無任何影響,可較好保持水產品原有的營養價值、色澤和風味[9]。此外,超高壓殺菌還具有高效、無污染和滅菌均勻等優點;而過高的壓力使得能耗增加,且對設備要求過高,導致該技術成本提高,一定程度上影響了其推廣。

臭氧可以在短時間內殺死絕大多數微生物,并且殺菌后多余的臭氧最終會被還原為氧氣,不會造成殘留及污染,相比于其他化學消毒劑(如次氯酸鈉水等)優勢顯著。早在20世紀初期,國外學者就開始了臭氧在食品殺菌和保鮮中的應用研究工作。Crowe等[13]用1.5mg/L的臭氧對新鮮的大西洋鮭魚(Salmosalar)片進行噴霧處理后,儲藏在5℃的溫度下,結果表明,與對照組相比臭氧處理后鮭魚片中英諾克李斯特氏菌(Listeriainnocua)的數量明顯減少,且鮭魚片的貨架期得到了顯著延長。Chawla等[14]將新鮮去皮蝦分別在1、2、3mg/L的臭氧水中各浸泡20、40、60s,結果表明浸泡在3mg/L臭氧水中60s時殺菌效果最好,在此條件下去皮蝦的總好氧菌數下降顯著,其中假單胞菌(Pseudomonas)的數量下降最多。Chen等[15]對經臭氧水處理的牡蠣的質量、貨架期和微生物數量進行了研究,結果表明經臭氧處理過的牡蠣貨架期可以達到20~25d,而對照組只有5~10d,且經臭氧處理過的牡蠣的總揮發性鹽基氮(TVB-N)和硫代巴比妥酸(TBA)等質量指標均優于對照組,這說明臭氧水可有效延長貨架期和保持牡蠣原有品質。由于臭氧殺菌技術的優越性,國內對其的研究也相對較多。刁石強等[16]使用冰溫臭氧水對新鮮鳀(Engraulisjaponius)的保鮮效果進行了研究,結果表明-1.1~0℃冰溫條件下,2~3mg/L的臭氧水可有效地抑制細菌生長繁殖,延緩鳀的腐敗變質,與普通冰藏對照組相比,貨架期可延長1~2d。孫繼英等[17]在魷魚分割過程中分別使用了殼聚糖、固體二氧化氯(ClO2)、次氯酸鈉(NaClO)、食品級過氧化氫(H2O2)、檸檬酸和臭氧水(O3)6種減菌劑對魷魚進行減菌化處理,并研究了這些減菌化處理方式對產品質量的影響,結果表明:經4mg/L的臭氧水浸泡8min的魷魚減菌效果最為顯著,且臭氧水對產品感官品質和色澤影響最小。
大量前期研究表明,臭氧處理可顯著降低食品中微生物菌群的種類及數量,延長產品貨架期。由于臭氧水處理通常采用噴霧和浸泡的方式進行,便于加工過程中的連續化操作,因此臭氧作為一種安全和有效的抗菌劑已廣泛應用于水產品工業中。此外,臭氧在水產品加工應用中除了具有殺菌作用外,還具有漂白和去異味等輔助功能[18]。
酸性電解離子水(Acidic electrolyzed water)是一種新型機能水,它是通過電解水生成裝置電解含HCl或HC1和NaC1混合液的電解質而生成的具有殺菌功效的功能水[19-20]。目前,對于酸性電解水的殺菌機理方面的研究較多,有關酸性電解水的主導殺菌因素主要包括pH、氧化還原電位(Oxidation reduction potential,ORP)、活性氧和有效氯殺菌等。近年來人們普遍認為其殺菌能力是以有效氯殺菌為主,其它各個殺菌因素(pH、ORP及活性氧)協同作用的結果[21]。另外,一些學者認為微生物的細胞壁和細胞膜被破壞也是酸性電解水殺菌的主要機理之一,有關電解水殺菌的具體機理尚無定論,有待于進一步研究與探討[22-23]。
酸性電解水作為新型的安全環保消毒劑,適合用于生鮮水產品的殺菌保鮮。Phuvasate等[24]研究了酸性電解水對大西洋鮭魚和金槍魚(Thunnusalbacares)魚皮組胺產生菌的殺菌效果,使用酸性電解水浸泡大西洋鮭魚120min能分別減少大西洋鮭魚魚皮表面產氣腸桿菌(Enterobacteraerogenes)和摩氏摩根菌(Morganellamorganii)1.3、2.2lg(CFU/cm2);使用酸性電解水冰處理金槍魚24h能分別減少金槍魚魚皮表面產氣腸桿菌和摩氏摩根菌2.4、3.5lg(CFU/cm2),酸性電解水可作為魚捕撈后的一種有效殺菌方式。Wang等[25]使用酸性電解水冰在黑暗條件下處理南美白對蝦(Litopenaeusvannamei)24h,總菌數減少了1.5lg(CFU/g),且有效的抑制了總揮發性鹽基氮的形成和減小了pH的變化,取得了很好的殺菌保鮮效果。周然等[26]研究了冷藏條件下(4℃)電解水對河豚魚(Takifuguobscurus)的保鮮效果,結果表明電解水能夠顯著的減少細菌總數,且貯藏過程中揮發性鹽基氮(TVB-N)、pH和硫代巴比妥酸值(TBA)等指標均有所下降,河豚魚貨架期由原來的4d延長到6d。高萌等[27]研究表明-18℃凍藏條件下,pH4.5酸性電解水鍍冰衣可顯著降低金槍魚肉中的細菌總數和大腸桿菌(Escherichiacoli)數量。謝軍等[28]應用PCR-DGGE技術監測了20℃及50℃溫度條件下酸性電解水對蝦的殺菌效果,結果顯示50℃下酸性電解水對蝦具有較好的殺菌效果,蝦總菌數減少了1.44lg(CFU/g)。
酸性電解水殺菌技術具有廣譜高效、安全環保、電解水生成裝置結構比較簡單及生產成本相對較低的優點。酸性電解水作為一種新型殺菌劑,具有廣闊的應用前景。目前,酸性電解水在國內正在得到推廣和使用,但主要還是處于實驗研究階段,全面推廣和使用尚需時日。
輻照殺菌通常是指利用一定劑量波長極短的電離射線對食品進行照射殺菌[29]。在食品殺菌中常用的射線有χ-射線、γ-射線和電子射線。其中,γ-射線的穿透力很強,適合于完整食品及各種包裝食品的內部殺菌處理[30],水產品的加工中通常采用γ-射線進行輻照處理。輻照殺菌機理主要有輻照產生的直接和間接效應兩個方面。直接效應是指微生物細胞的細胞質受到高能射線照射后發生了電離和化學作用,使細胞內的物質形成了離子、激發態或分子碎片。間接效應是水分在受到高能射線輻射后,電離產生了各種游離基和過氧化氫,這些物質再與細胞內其它物質相互反應,生成了與細胞內原始物質不同的化合物。這兩種效應共同作用阻礙了微生物細胞內的一切生命活動,導致細胞死亡,從而達到殺菌目的[30]。
目前,國內外對水產品的輻照殺菌均開展了大量的研究工作。Lee等[31]使用了不同劑量的γ-射線(0、3、5、7、10kGy)對半干秋刀魚(Cololabisseira)進行輻照殺菌處理,結果表明,隨著輻照劑量的加大,秋刀魚總的菌落數逐漸減少,當輻照劑量在7~10kGy時,殺菌效果最佳,并且感官評價的結果并沒有因進行輻照殺菌而變差。Abreu等[32]研究了不同輻照劑量的γ-射線(0、2、4、6kGy)對南美白對蝦上O1型霍亂弧菌(VibriocholeraeO1)和沙門氏菌(Salmonellaenteridis)的殺菌效果,研究結果表明6kGy劑量的輻照可以非常有效的殺滅蝦上攜帶的O1型霍亂弧菌和沙門氏菌。Suklim等[33]將藍蟹(Portunaspelagicus)肉塊分別進行2、4、6kGy劑量的γ-射線輻照處理,結果顯示采用2、4、6kGy輻照劑量對應的藍蟹肉塊上攜帶的單細胞增生李斯特菌(Listeriamonocytogenes)數分別減少了5.35、6.65、7.56個對數級,低劑量的輻照殺菌可以在不影響藍蟹質量和安全的同時達到較好的殺菌效果。崔生輝等[34]利用0~10kGy的輻照劑量分別對真空包裝的鯽魚、針魚和皮蝦的殺菌效果和貨架期進行了研究,研究結果表明在4℃的冷藏條件下,以上三種水產品的貨架期與輻照劑量呈正相關。劉春泉等[35]以微生物指標研究了出口冷凍蝦仁的輻照殺菌效果,結果表明3~5kGy的輻照劑量可以殺滅冷凍蝦仁所攜帶的99%以上的微生物,經輻照處理的蝦仁在-7℃的溫度下貨架期可以延長6個月。
對水產品進行輻照殺菌的殺菌劑量要在安全劑量范圍內,否則會對消費者的身體健康造成威脅。我國冷凍水產品輻照殺菌工藝的農業行業標準(NY-T1256-2006)規定了冷凍水產品的輻照工藝劑量為4~7kGy[36]。輻照殺菌技術具有穿透力強、殺菌效果好、無殘留和易操控等特點,但放射線同樣對人體有害,這就要求操作人員在殺菌處理過程中做好防護措施。
高密度CO2技術(dense phase carbon dioxide,DPCD)是指在壓力小于50MPa的條件下,利用高密度CO2的分子效應達到殺菌和鈍化酶的作用,該技術是一種新型的非熱殺菌技術[37]。目前DPCD殺菌技術的作用機理尚未明確,現有研究認為高密度CO2產生的分子效應會導致以下幾個方面的影響:降低食物的pH[38-39];CO2分子和碳酸氫鹽離子對微生物細胞具有抑制作用[40];對細胞膜的物理性破壞[39];改變細胞膜通透性[40-41];鈍化酶和孢子活性[42]等,這些因素的綜合作用達到殺菌的效果。
基于DPCD技術的以上特點,目前其主要應用于牛奶、果蔬汁和全蛋液等液態食品的殺菌。DPCD技術應用于水產品的研究仍然相對較少,目前主要集中在對于貝類和蝦的殺菌研究。Meujo等[43]在10.0MPa,37℃的條件下對新鮮牡蠣進行高密度CO2殺菌處理30min,總的菌落數下降了2個對數級;在17.2MPa,60℃的條件下對新鮮牡蠣處理60min,總的菌落數下降了3個對數級,結果表明DPCD對新鮮牡蠣殺菌效果顯著。國內的張良等[44]也采用高密度CO2技術對牡蠣的殺菌效果進行了研究,并利用神經網絡對DPCD殺菌工藝參數進行了優化,研究結果表明:在45或55℃和15MPa條件下,直接對牡蠣肉進行高密度CO2處理30min,其殺菌效果與100℃沸水煮2min相當,菌落總數下降了3.0個對數以上。劉書成等[45]研究了高密度CO2處理對凡納濱對蝦優勢腐敗菌(Chryseobacteriumsp.LV1)的殺菌效果,結果表明DPCD在30~55℃、5~25MPa和5~60min的條件范圍內,溫度越高、壓力越大、時間越長,對優勢腐敗菌的殺菌效果越好,在45℃和15MPa條件下高密度CO2處理30min菌落總數下降5個對數級,達到了理想的殺菌效果。呂妙兄等[46]對高密度CO2處理皺紋盤鮑(Haliotisdiscushannai)的殺菌效果進行了研究,在5~25MPa、40~50℃、10~50min的條件范圍內對皺紋盤鮑進行高密度CO2處理,均可達到理想的殺菌效果,在20MPa和45℃條件下DPCD處理40min的殺菌效果(對數下降3.46)與沸水煮2min的殺菌效果(對數下降3.59)相當。
DPCD技術具有可以保持食品原有品質、無污染和殺菌效果好等優點。但該技術在固態食品中的應用還存在較多問題,如持續化操作受限、CO2的擴散率較差和處理后的包裝問題等[37]。
生物殺菌技術是指利用生物保鮮劑的抗菌作用來延長食品貨架期的殺菌保鮮技術。生物保鮮劑是指從動植物、微生物中提取的天然的或利用生物工程技術改造而獲得的對人體安全的保鮮劑[47]。
不同特性的生物保鮮劑對水產品作用時的殺菌保鮮機理也并不是完全相同的。總結起來可以概括為以下幾類:茶多酚和魚精蛋白等生物保鮮劑含有抗菌活性物質,具有抗菌作用[48-49];有些生物保鮮劑如乳酸鏈球菌素(Nisin)和葡萄糖氧化酶等具有抗氧化作用[50];茶多酚和植酸等生物保鮮劑具有抑制酶活的功效[51];還有一類生物保鮮劑比如蜂膠和殼聚糖等可以在食品的表面形成一層保護膜,阻礙腐敗微生物的侵入,達到保鮮目的[52-53]。生物保鮮劑通常是多種殺菌機理同時作用達到保鮮目的。
目前,生物殺菌技術在水產品上的應用已經得到了廣泛研究。在水產品殺菌中應用較多的生物保鮮劑有茶多酚、溶菌酶、乳酸鏈球菌素和殼聚糖等。Feng等[54]研究了茶多酚結合臭氧水對黑鯛(Sparusmacrocephalus)的保鮮作用,將茶多酚溶液(0.2%,w/v)涂抹在黑鯛表面,用1mg/L的臭氧水清洗后置于4℃的溫度下貯藏,結果發現茶多酚可以顯著的減少微生物總菌數,與對照組相比,經茶多酚涂抹的黑鯛的貨架期延長了6d。一般情況下,溶菌酶涂抹在水產品表面,就可起到防腐保鮮的效果。Enrique等[55]研究了溶菌酶對南美白對蝦的殺菌作用,結果發現溶菌酶對溶藻弧菌(Vibrioalginolyticus),副溶血性弧菌(Vibrioparahemolyticus)和霍亂弧菌(Vibriocholerae)三種革蘭氏陰性弧菌具有明顯的殺菌效果。對于蝦病原菌溶藻弧菌和副溶血性弧菌的殺菌效果尤為顯著。焦云鵬[56]對Nisin在魚丸中的應用進行了研究,結果表明在魚丸中添加0.15、0.20g/kg Nisin時,可有效的減少細菌總數,對大腸桿菌的殺菌效果非常明顯,并且在延長貨架期的同時,保持了魚丸原有的感官品質,起到了很好的殺菌保鮮效果。Gómez-Estaca等[57]對殼聚糖結合香精油對鱈魚(Gadusmorhua)表面的抗菌效果進行了研究,結果起到了明顯的殺菌抑菌作用,鱈魚的貨架期得到了延長。
為解決單一生物保鮮劑不能夠達到預期保鮮效果的問題,可將不同功能特性生物保鮮劑按一定比例混合成復合型生物保鮮劑,通過相互之間的協同作用提高水產品的保鮮效果。Li等[58]將0.2%茶多酚和1.5%殼聚糖復合涂抹在大黃魚(Pseudosciaenacrocea)的表面后在4℃進行冷藏,與對照組相比,經復合保鮮處理的大黃魚保持了良好的質量并且貨架期延長了8~10d。單獨使用溶菌酶時,由于其具有專一性使微生物的芽孢不能被殺死,而Nisin與溶菌酶的復合使用可以使這一問題得到解決。顧仁勇[59]使用Nisin與溶菌酶復合保鮮劑對斑點叉尾鲴(Ictaluruspunctatus)魚片進行了實驗,將魚片浸泡在0.5% Nisin、0.3%溶菌酶和3.0%維生素C復合液中30s后,在0℃的溫度下冷藏,其貨架期達到21d,與對照組相比延長了12d。
生物殺菌具有低劑量、強殺菌、安全無毒和藥效持久等優點,生物保鮮劑的使用,消除了使用化學防腐劑帶來的安全隱患。隨著人們對食品安全意識的不斷增強,使用生物保鮮劑代替傳統化學防腐劑將是發展的趨勢。生物保鮮劑的開發成本較高,這在一定程度上影響了其推廣應用。
除上述殺菌技術之外,還有一些其他的非熱殺菌技術應用于水產品加工工業,如高壓脈沖電場殺菌技術、微波殺菌技術、脈沖強光殺菌技術、紫外線殺菌技術和柵欄技術等。綜合比較以上幾種非熱殺菌技術,臭氧殺菌技術憑借其便于連續化操作和廣譜高效的特點在水產品加工中應用較為廣泛;超高壓殺菌技術可以瞬間殺菌且滅菌均勻,較為廣譜高效;生物殺菌技術采用生物保鮮劑代替了傳統的化學防腐劑,較為安全。
與傳統的熱殺菌方式相比較,上述非熱殺菌技術優勢明顯。不僅克服了傳統熱殺菌無法保持水產品原有品質的不足,而且殺菌處理過后無化學物質殘留,安全衛生,更好地滿足了消費者對于水產品的需求。非熱殺菌技術在水產品加工貯藏領域展現出了非常廣闊的前景。
雖然非熱殺菌技術優勢明顯,但在應用推廣過程中存在著諸多問題。首先,就我國當前的研究現狀而言,多數研究尚處于實驗研究階段,大規模的推廣應用極少,有些技術(如:酸性電解水殺菌和高密度CO2技術等)殺菌機理尚不明確,這些都限制了它們的推廣應用;其次,有些非熱殺菌技術成本高、對設備要求高,限制了該技術的推廣。因此,為解決非熱殺菌技術在推廣過程中遇到的困難,筆者認為今后研究應注重以下幾點:要加強基礎理論研究,特別是殺菌機理、適用條件和影響因素的研究;合理運用基礎理論,研發新設備,盡可能地降低生產成本;進行多種技術復合殺菌研究,提高殺菌效果;探索研究更多的非熱殺菌技術,開拓非熱殺菌技術在水產品加工貯藏領域的應用。隨著科學技術的不斷發展,非熱殺菌技術將在水產品加工過程中得到越來越多的應用。
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Non-thermal sterilization technologies and its application in processing of aquatic products
ZHAO Yong-qiang1,ZHANG Hong-jie1,2,LI Lai-hao1,*,YANG Xian-qing1,HAO Shu-xian1,WEI Ya1,CEN Jian-wei1
(1.Key Laboratory of Aquatic Product Processing,Ministry of Agriculture;National R&D Center for Aquatic Product Processing;South China Sea Fisheries Research Institute,Chinese Academy of Fishery Science,Guangzhou 510300,China;2.College of Food Science and Technology,Shanghai Ocean University,Shanghai 201306,China)
The research progress in non-thermal sterilization technologies in the processing of aquatic products was reviewed in this paper. The essay mainly introduced the principles,features and application of several non-thermal sterilization technologies in the processing of aquatic products,such as ultra-high pressure technology,ozone sterilization,acidic electrolyzed water sterilization,irradiation sterilization,dense phase carbon dioxide sterilization and biology sterilization. Finally,the prospects of non-thermal sterilization technologies were briefly discussed. The article is hoped to offer beneficial reference for the future application research and the wider application of non-thermal sterilization technologies in the processing of aquatic products.
non-thermal sterilization;aquatic products;application;progress
2014-09-03
趙永強(1985-),男,博士,助理研究員,從事水產品加工及質量安全研究。
*通訊作者:李來好(1963-),男,博士,研究員,從事水產品加工與質量安全研究。
國家自然科學基金(31401563,31271957);中央級公益性科研院所基本科研業務費專項資金項目(2014TS06);國家現代農業產業技術體系建設專項資金(CARS-49);國家“十二五”科技支撐計劃項目(2012BAD28B00);廣東省教育部產學研結合示范基地項目(2011B090500015);廣東省漁業科技推廣專項(B201300C03)。
TS254.4
A
1002-0306(2015)11-0394-06
10.13386/j.issn1002-0306.2015.11.071