PTEN、OPN在上皮性卵巢惡性腫瘤組織中的表達及意義

西電集團醫院婦產科 (西安 710077)

曹 馨

PTEN、OPN在上皮性卵巢惡性腫瘤組織中的表達及意義

西電集團醫院婦產科 (西安 710077)

曹 馨

目的：探討PTEN、OPN在上皮性卵巢惡性腫瘤中的表達及意義。方法：采用免疫組織化學染色法檢測12例正常卵巢組織、19例良性上皮性卵巢腫瘤組織、18例交界性卵巢腫瘤組織、60例上皮性卵巢惡性腫瘤組織中PTEN和OPN的表達，分析其表達的差異性。結果：PTEN、OPN在上皮性卵巢惡性腫瘤組織、交界性上皮性卵巢腫瘤組織、良性卵巢腫瘤組織、正常的卵巢組織中其陽性表達率分別為25.00%、88.90%、94.70%、100.00%和76.66%、27.77%、15.78%、8.00%。PTEN在上皮性卵巢惡性腫瘤中的表達率隨臨床分期升高，隨病理分級的減低而降低；OPN的表達率隨臨床分期升高，隨病理分級的減低而升高;二者的表達呈負相關。結論：①PTEN、OPN的表達在上皮性卵巢惡性腫瘤、交界性卵巢上皮性腫瘤、良性卵巢腫瘤、正常卵巢組織均存在統計學差異，且呈負相關。②二者聯合檢測可能對上皮性卵巢惡性腫瘤的輔助診斷有一定意義。

有研究表明PTEN與OPN在腫瘤細胞的發生、轉移中發揮重要作用。卵巢上皮性惡性腫瘤按照國際婦產科聯盟(FIGO)2000年制定的手術及病理分期標準[1],分為漿液性乳頭狀囊腺癌、粘液性乳頭狀囊腺癌、腺癌、透明細胞癌及未分化癌。本研究擬通過檢測上皮性卵巢惡性腫瘤組織交界性、良性上皮性卵巢腫瘤組織，正常卵巢組織中PTEN、OPN的表達情況及相關性分析，探討二者對上皮性卵巢惡性腫瘤早期診斷、預后評估的意義。

資料與方法

1 材料來源 隨機選取西安交通大學第二附屬醫院2009年1月至2012年9月間手術切除的卵巢組織標本109例，包括12例正常卵巢標本，19例良性卵巢上皮性腫瘤標本，18例交界性卵巢上皮性腫瘤標本，60例上皮性卵巢惡性腫瘤標本(其中均包括漿液性、粘液性、子宮內膜樣3個組織類型)。

2 一般資料 109例患者年齡19～74歲，均為首次發病，術前2個月未行任何治療，未合并有其他各系統的惡性腫瘤，依據卵巢惡性腫瘤FIGO 2000標準及WHO標準，將60例上皮性卵巢惡性腫瘤分期為：Ⅳ期15例，Ⅲ期20例，Ⅱ期14例，Ⅰ期11例；組織學類型為：19例漿液性囊腺癌，23例粘液性囊腺癌，18例子宮內膜樣癌；病理分級為：低分化(G3)組30例，中分化(G2)組14例，高分化(G1)組16例。

3 方 法

3.1 實驗方法：所有標本均在同一條件下采用免疫組化SP 法進行染色。即用型鼠抗人PTEN單克隆抗體(克隆號：MAB847)、即用型鼠抗人OPN單克隆抗體(克隆號：28h6)，均購自R&D Systems公司，即用型二抗檢測試劑盒購自福建邁新生物公司，取PBS代替一抗作為陰性對照，公司提供陽性對照切片。

3.2 免疫組化結果判定：PTEN染色陽性部位主要位于胞漿、胞核，OPN染色陽性部位主要位于胞核中，陽性表達均呈黃色或棕黃色顆粒。每例標本用隨機方法選取10個高倍視野，計數每視野100個細胞。按照陽性細胞百分率，著色程度進行計算分析。陽性細胞百分率評分法：陽性細胞所占百分率≤10%：1分，11%～50%：2分，51%～75%：3分，≥75%：4分。陽性細胞著色強度評分法：無色：0分，淡黃色：1分，棕黃色：2分，棕褐色：3分。結果為二者評分之乘積，大于3分判定為陽性，0～3分判定為陰性。標本由2名病理醫師盲法閱片作出判定。

3.3 統計學方法：數據經SPSS13.0軟件進行統計學分析。采用χ2檢驗進行顯著性檢驗，當t<1，n<40應用精確概率法求得P值，采用Spearman等級相關性對PTEN和OPN相關性進行分析。當P<0.05為統計學有顯著差異。

結 果

1 PTEN、OPN的表達：PTEN在正常卵巢組織、良性上皮性卵巢組織、交界性上皮性卵巢腫瘤組織、惡性上皮性卵巢腫瘤組織中的陽性表達率分別為100%、94.70%、88.90%、25%。前三者與惡性上皮性卵巢腫瘤組織中表達率相比較均有統計學差異(正常組-惡性組：P=0.000;良性組-惡性組：P=0.000;交界組-惡性組：P=0.000)。OPN在正常卵巢組織、良性上皮性卵巢組織、交界性上皮性卵巢腫瘤組織、惡性上皮性卵巢腫瘤組織中的陽性表達率分別為8%、15.78%、27.77%、76.66%。前三者與惡性上皮性卵巢腫瘤組織中表達率相比較均有統計學差異(正常組-惡性組：P=0.000;良性組-惡性組：P=0.000，交界組-惡性組：P=0.000)，見表1(圖1～8)。

表1 PTEN、OPN在不同卵巢組織中的表達

2 PTEN、OPN的表達與上皮性卵巢惡性腫瘤臨床病理之間的關系： PTEN在上皮性卵巢惡性腫瘤不同臨床分期、病理分級中的表達率存在統計學差異(I-II期組-III-IV期組：P=0.001，G1組-G2組：P=0.009，G1組-G3組：P=0.000，G2組-G3組：P=0.027)。隨著上皮性卵巢惡性腫瘤的臨床分期升高、病理分級的減低，PTEN蛋白的陽性表達率降低；PTEN在漿液性囊腺癌、卵巢子宮內膜樣癌、粘液性囊腺癌不同組織類型中的表達率，兩兩比較無統計學差異。OPN在上皮性卵巢惡性腫瘤不同臨床分期、病理分級中的表達率存在統計學差異(I-II期組-III-IV期組：P=0.000，G1組-G2組：P=0.014，G1組-G3組：P=0.000，G2組-G3組：P=0.027)，隨著上皮性卵巢惡性腫瘤的臨床分期升高、病理分級的減低，OPN蛋白的陽性表達率升高；OPN在漿液性囊腺癌、粘液性囊腺癌、卵巢子宮內膜樣癌不同組織類型中的表達率，兩兩比較無統計學差異，見表2。

3 PTEN、OPN表達的相關性： 在15例PTEN表達陽性的標本中，有9例OPN的陰性表達，在45例PTEN表達陰性的標本中，有40例OPN的陽性表達。統計學分析采用Spearman等級相關法，結果提示PTEN和OPN表達呈負相關(P<0.01)。

表2 PTEN、OPN的表達與上皮性卵巢惡性 腫瘤臨床病理之間的關系

討 論

1 PTEN在上皮性卵巢惡性腫瘤中的表達及意義：已有研究證實PTEN 在多種腫瘤組織中存在表達下調、缺失或突變，如膀胱癌[2]、乳腺癌[3]、子宮內膜癌[4]等。關于PTEN與卵巢惡性腫瘤關系的實驗研究大多數研究者所持觀點不進相同：PTEN基因的低表達或缺失與上皮性卵巢惡性腫瘤的發生、發展有關。本研究結果顯示卵巢正常組織中PTEN陽性表達率是惡性上皮性卵巢腫瘤組織中PTEN陽性表達率的4倍?？梢奝TEN是上皮性卵巢惡性腫瘤相關的抑癌基因，PTEN的低表達和(或)缺失參與了上皮性卵巢惡性腫瘤的發生、發展過程。Schondorf[5]對40例上皮性卵巢惡性腫瘤組織的PTEN分析結果顯示，隨著臨床分期的升高、病理分化的降低PTEN表達逐漸下降。與本研究所得結果基本相同。PTEN在腫瘤發生早期表達明顯減弱(早期上皮性卵巢惡性腫瘤組織的PTEN陽性表達率為48.0%，明顯低于正常卵巢組織100%的表達)，提示在腫瘤發生早期就存在PTEN的明顯低表達，有望成為卵巢惡性腫瘤高危人群的早期篩查指標之一。

2 OPN在上皮性卵巢惡性腫瘤中的表達及意義：許多研究均發現OPN和上皮性卵巢惡性腫瘤的轉移、侵襲密切相關，可彌補CA125在上皮性卵巢惡性腫瘤患者病情、治療反應監測中的不足。Kim[6]使用酶聯免疫吸附法進行了類似研究與本研究應用免疫組化方法所得結果基本相同?？梢奜PN在上皮性卵巢惡性腫瘤中高表達，是上皮性卵巢惡性腫瘤相關的癌基因，與上皮性卵巢惡性腫瘤發生、發展密切相關。但OPN蛋白在上皮性卵巢惡性腫瘤組織中的表達率為76.66%，其特異性中度，若將其和其它敏感基因在上皮性卵巢惡性腫瘤組織中的表達檢測聯合應用，不但有易于上皮性卵巢惡性腫瘤的診斷及預后評估，更有利于上皮性卵巢惡性腫瘤的早期診斷。

3 PTEN、OPN在上皮性卵巢惡性腫瘤中的相關性達及意義：磷酸化及去磷酸化通常是調節細胞生長、增殖分化的主要機制。PTEN可通過PI3K/Akt信號轉導途徑發揮其抑癌作用[7]，其通過抑制PIP3激酶的磷酸化，使PIP3保持在低水平，阻滯 Akt 及下游激酶的活性，使腫瘤細胞發生凋亡。OPN也可通過PI3K/AKT途徑抑制細胞凋亡，進一步調節腫瘤細胞浸潤和轉移，促進腫瘤細胞生長。共同的信號傳導通路形成了兩者之間的相關聯系。從而，推測正因為此PTEN對OPN信號傳導途徑抑制作用的減少或消失使得OPN在卵巢惡性腫瘤組織中的表達明顯增加。本研究結果顯示， PTEN 表達與OPN 的表達呈負相關。從本研究結果可以推測 PTEN與OPN可以聯合作為判斷上皮性卵巢腫瘤惡性程度、評估患者預后的指標。它提供了有關惡性卵巢上皮性腫瘤發生、發展分子生物學水平的一條新的研究思路。

[1] 邢蘭瑛，蔡東閣，劉 星.桂枝茯苓膠囊及生長抑素類似物在30例卵巢癌化療中的作用研究[J]．陜西中醫，2006，27(10)：1169-1170.

[2] 葉木石，蘇 勁．PTEN、PCNA、CerbB-2在膀胱尿路上皮癌中的表達及意義[J]．實用臨床醫藥雜志，2011，15 (24): 50-52．

[3] 陳 勇，郭 偉，李洪濤．抑癌基因PTEN和FHIT在乳腺癌中的表達及意義[J]．中華全科醫學，2013，11 (12): 1847-1848．

[4] 陳迎秀，王學芳．PTEN及P53蛋白在不同類型子宮內膜組織中的表達及意義[J]．實用臨床醫藥雜志，2009，13 (11): 91-92．

[5] Schondorf T, Cohing U J, Roth G. Time to progression is dependent on the expression of the tumour suppressor PTEN in ovarian cancer patients[J]. Euro Journal of Cli Inv Gomes, 2003, 33(1): 256-260.

[6] Kim J H, Skates S J, Uede T,etal. Osteopontin as a potential diagnostic biomarkerfor ovarian cancer[J]. J Am Med Assoc, 2002, 287(13): 167l-l679.

[7] Bouali S, Chretien A S, Ramacci C,etal. PTEN expression controls cellular response to cetuximab by mediating PI3K/AKT and RAS/RAF/MAPK downstream signaling in KRAS wild-type, hormone refractory prostate cancer cells[J]. Oncol Rep, 2009, 21(3): 731-735.

(收稿：2014-08-12)

Expression and significance of PTEN and OPN in epithelial ovarian cancer

Xi Dian Group Hospital

(Xi’an 710077) Cao Xin

Objective: To study the effect of PTEN and OPN in the occurrence and development of epithelial ovarian cancer. Methods : The expressions of PTEN and OPN protein were evaluated 60 in epithelial ovarian cancer, 18 borderline epithelial ovarian tumor, 19 epithelial ovarian tumor and 12 the normal ovary tissue by inununohistochemistry(SP method). Applied medical statistics methods to analysis of the difference of expression. Results: The positive rate of PTEN,OPN in epithelial ovarian cancer, borderline epithelial ovarian tumor , benign epithelial ovarian tumor , normal ovary tissue was 25.00%、88.90%、94.70%、100.00%；76.66%、27.77%、15.78%、8.00%，The expression level of PTEN decreased with the increase of clinical stage ,with the decrease of pathology level. The expression rate of OPN increased follow the increase of clinical stage ,follow the decrease of pathology level. PTEN lower expression and expression of OPN had negative relevance. Conclusion: ①The expression of PTEN、OPN Respectively have evident difference in epithelial ovarian cancer, borderline epithelial ovarian tumor , benign epithelial ovarian tumor, normal ovary tissue,both is negative correlation. ②Combined detection both may have some significance for early diagnosis of ovarian cancer.

Ovarian neoplasms/immunology @ PTEN genes Osteapontin/immunology Immunohistochemistry Genes,suppressor

卵巢腫瘤/免疫學 @PTEN基因 骨橋蛋白/免疫學 免疫組織化學 基因，抑制

R392.3

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2015.03.008