紅細胞冷凝集對全血細胞計數影響分析

范紅平，忽勝和

(大理學院附屬醫院檢驗科，云南 大理 671000)

全血細胞分析是臨床上使用廣泛的常規檢驗，因此準確的血細胞計數的結果為臨床提供了重要的依據。標本的狀態直接影響到測結果的準確性。如何提升實驗室質量成為廣大檢驗工作者面臨的日益突出的問題[1]。標本的正確性是實驗室質量控制的關鍵環節。標本的狀態除了護士采血的正確操作，還與標本自身的一些異常情況相關。這些異常情況就需要檢驗人員來發現。血細胞分析檢測中紅細胞冷凝集是影響血細胞計數結果不準確的因素之一，在檢驗工作中時有發生。因此，我們篩選了一部分紅細胞冷凝集標本進行檢測，再將這些標本37°C水浴后重新檢測，將兩次檢測結果進行比較分析，了解紅細胞冷凝集對血細胞計數結果的影響。

1 對象與方法

1.1 研究對象 收集我院2014年9月至2015年2月有紅細胞冷凝集的血細胞分析標本46例，男29例，女17例，年齡8~75歲。標本紅細胞冷凝集判斷標準：平均紅細胞血紅蛋白濃度（MCHC）超過參考上限20g/L[2]，排除標本脂血，溶血，及球形紅細胞等情況，并且肉眼觀察有紅細胞凝集的現象。

1.2 標本采集 用EDTA-K2抗凝采血管采靜脈血2.0ml混勻。采血順暢，壓脈帶壓迫時間<1min。

1.3 儀器與試劑 日本Sysmex公司生產的XN-2000全自動血細胞分析儀。質控品及試劑均為Sysmex配套原裝試劑。

1.4 檢測方法 每日先進行室內質控，在控后再進行標本的檢測，按紅細胞冷凝集判斷標準篩選出冷凝集的標本。將標本置于37°C水浴箱30min，取出觀察試管內抗凝血，未發現管壁內有凝集顆粒，混勻后立即上機再次測定[3]，如管壁仍然有凝集顆粒則延長水浴時間至50min，再進行檢測。

1.5 數據處理 結果用統計軟件SPSS12.0處理，采用配對t檢驗對結果進行比較分析，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

冷凝集標本在水浴前后檢測結果WBC，RBC，Hct，MCV，MCH，MCHC 六個項目的結果水浴前后比較有統計學意義（P<0.05），而Hb和PLT水浴前后結果無統計學意義(P>0.05)。細胞冷凝集標本在水浴前后的檢測結果見表1。

表1 紅細胞冷凝集標本水浴前后結果比較

3 討論

檢驗質量是實驗室永恒的主題，為臨床提供準確可靠的檢驗結果是檢驗科工作的目標和責任。檢驗結果的準確，包括了實驗前標本準確的采集，檢測儀器的狀態，試劑的質量，檢驗結果的審核分析等方面。其中檢驗結果的審核分析是實驗室工作中重要的環節。通過結果的審核分析可以發現標本的異常情況，及時予以糾正則可以保證結果的準確性。紅細胞冷凝集是導致血細胞計數錯誤結果的因素之一，在日常檢驗工作中時有發生。紅細胞冷凝集是一種現象，當血液離體后，在低于體溫環境的試管內發生肉眼可見的凝集現象，當恢復至體溫條件時（37°C），冷凝集現象可解除。血液標本出現紅細胞冷凝集現象明顯影響到全血細胞計數的結果。從本次的數據結果顯示WBC，RBC，Hct水浴后結果升高，MCV，MCH，MCHC結果在水浴后檢測結果

降低，有統計學意義，而Hb，PLT的差異無統計學意義。紅細胞凝集使得紅細胞凝集成團，體積增大，這部分紅細胞未能計數在紅細胞內，導致紅細胞計數假性降低，多個紅細胞聚集后形成的紅細胞團在通過計數孔時引起脈沖增大，引起MCV假性升高，凝集的RBC使MCV增高，同時RBC計數減低，但二者以RBC計數減少為主，因此Hct隨之也降低，并造成了由 RBC，Hb，HCT 計算得到的 MCH，MCHC結果異常升高。冷凝集素除對紅細胞有作用外，也可凝集淋巴細胞，中性粒細胞，單核細胞，巨噬細胞和血小板，使WBC，PLT的結果也假性減低[4]，當紅細胞凝集體中包含白細胞時，其體積擴大，其體積超出血細胞分析儀在白細胞測定的閾值范圍，超出白細胞散點圖分布區域，從而將其排除在外，造成漏檢而導致數量下降[5]。本次數據顯示PLT在水浴前后結果差異無統計學意義，其原因為冷凝集素引起的紅細胞凝集有別于啟動正常凝血途徑而發生的血液凝固[6]，紅細胞冷凝集是一個可逆的過程，不消耗凝血因子及血小板。RBC與PLT雖然在相同的計數池內計數，二者計數體積相差較大，檢測體積范圍差別較大，因此凝集的紅細胞對于PLT的計數無明顯干擾，XN-2000全自動血細胞分析檢測PLT采用的是鞘流計數方法，鞘流技術一定程度上降低了細胞凝集的干擾，避免了異常血細胞脈沖的發生，降低了細胞凝集的干擾，因此水浴前后PLT計數結果無顯著差異性。Hb檢測是通過加入SLS溶血素溶解紅細胞，采用比濁法測定，紅細胞凝集對該方法無干擾，因此水浴前后結果差異無統計學意義。綜上所述，血液標本出現紅細胞冷凝集現象可以明顯影響全血細胞分析的結果，導致檢測結果與標本的真實結果存在較大的差異。冷凝集素抗體可為多克隆或單克隆自身抗體，絕大多數單克隆冷凝集抗體發現于淋巴網狀內皮細胞瘤患者，而多克隆冷凝集抗體則是由于感染引起[7]。冷凝集素對人紅細胞I類抗原有特異性，30°C以下可使紅細胞凝集，溫度提高后凝集消失，健康人的血清中冷凝集素效價不高，一般在16°C以下可發生凝集，30°C以上不發生凝集[8]，所以實驗室溫度是避免血液標本冷凝集的一個重要環節。為了防止可能出現的RBC冷凝集現象對血細胞計數結果的影響，必需使實驗室保持在合適的溫度（18~22°C），低于 15℃或高于30°C均對血細胞計數結果有影響[9]。除了保證實驗室溫度，檢測人員應該仔細審閱檢驗結果（如Hb與RBC的不符合）和直方圖的改變[10]。實驗室還應該建立復檢標準，根據國際血液學標準化委員會推薦的復檢規則第13條規定，平均紅細胞血紅蛋白濃度(MCHC)超過正常上限20g/L時，要求檢查標本是否有脂血，溶血，凝集及球形紅細胞。根據這條規則可發現標本冷凝集現象或其他的一些異常標本。因此保證實驗室在適宜的溫度可一定程度避免紅細胞冷凝集，實驗室制定恰當的復檢規則對檢驗結果審核分析，則可以及時發現紅細胞冷凝集標本，對標本進行相應處理后重新測定，保證檢驗結果的準確性。

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