復方黃芪養心合劑對大鼠冠狀動脈結扎術后心室重構的影響

陳啟蘭祝光禮龔一萍潘 農齊國安赫小龍

復方黃芪養心合劑對大鼠冠狀動脈結扎術后心室重構的影響

陳啟蘭1祝光禮1龔一萍2潘 農1齊國安3赫小龍1

目的 觀察復方黃芪養心合劑（CAMNH）對大鼠冠狀動脈結扎術后心室重構（VR）的影響。方法 SD大鼠47只，取8只設為假手術組，另39只行冠狀動脈左前降支結扎術，術后10天存活大鼠29只，隨機分為復方黃芪養心合劑組（CAMNH組）、琥珀酸美托洛爾緩釋片組（MSSRT組）各10只，心室重構模型組9只。各組予相應藥物灌胃8周。術后第6周和第10周分別進行超聲心動圖檢測。結果 術后第6周，CAMNH組LVEF、FS分別為（61.19±8.42）%、（28.96±5.49）%，明顯低于假手術組的（77.08±6.08）%、（40.98±5.45）%（P＜0.01）；也低于MSSRT組的（70.59±8.65）%、（35.75±6.41）%（P＜0.05）；與模型組（64.35±6.12）%、（31.73±4.64）%相近（P＞0.05）。術后第10周，CAMNH組、MSSRT組LVDs分別為（4.73±0.43）mm、（4.88±0.48）mm，較模型組（6.44±2.01）mm明顯縮小（P＜0.01）。CAMNH組、MSSRT組的LVEF分別為（64.00±5.34）%、（63.03±4.35）%，均高于模型組的（43.74±8.96）%（P＜0.01）；CAMNH組、MSSRT組的FS分別為（30.64±3.60）%、（29.95±2.93）%，明顯高于模型組的（18.88±4.44）%（P＜0.01）。各組前后對比：LVDs：模型組增大（P＜0.05）；LVEF及FS：模型組及MSSRT組進一步降低（P＜0.01），CAMNH組無明顯變化（P＞0.05）。結論 CAMNH對大鼠冠狀動脈結扎術后心室重構有干預作用，能促使LVDs縮小，降低LVEF（%）、FS（%），其作用與MSSRT相當。

大鼠；心室重構；復方黃芪養心合劑；超聲心動圖；美托洛爾

冠狀動脈粥樣硬化性心臟病為臨床常見病[1]，因心肌缺血、梗死造成冠心病心室重構（ventricle remodeling，VR）也越來越多見，為避免其進行性進展導致心力衰竭，應重視對冠心病患者的心室重構進行干預。復方黃芪養心合劑（compound astragalus mixture nourishing heart，CAMNH）由黃芪、黨參、太子參、苦參、玄參、丹參、甘松、山楂等八味中藥組成，方中黃芪、黨參、太子參共同補益心氣，丹參、生山楂活血祛瘀、養血安心，甘松理氣，苦參清熱燥濕，玄參滋陰涼血，全方共起益氣養陰、祛瘀化濁之功效。本研究觀察CAMNH對大鼠冠脈結扎術后心室重構的影響。

1 材料與方法

1.1 動 物 健康雄性清潔級 Sprague-Dawley（SD）大鼠47只，體質量180～220g，8～10周齡，由上海西普爾-必凱實驗動物有限公司提供，合格證號：SCXK（滬）2008-0016。飼養于浙江中醫藥大學實驗動物研究中心，分籠飼養，每籠5只，清潔飼養室保持恒溫（20℃），相對濕度40%～60%，實驗動物許可證號：SYXK（浙）2008-0115。

1.2 藥 品

1.2.1 CAMNH處方組成和制劑工藝 CAMNH處方組成及批號：黃芪20g（批號101010），黨參20g（批號101005），太子參20g（批號101013），苦參20g（批號101022），丹參20g（批號101023），甘松20g（批號101019），炙甘草10g（批號101018），生山楂15g（批號101007）。單味中藥均由浙江省臨安市中藥藥材有限公司提供。將各藥加水煎煮2次，第一次1.5h，第二次0.5h，由杭州市中醫院藥劑制劑室制備成生藥濃度為2g/mL的生藥煎劑，4℃冰箱保存。

1.2.2 對照藥物 琥珀酸美托洛爾緩釋片（metoprolol succinate sustained-release tablets，MSSRT）（47.5mg/片，批號m14438），由阿斯特拉（無錫）制藥有限公司提供。將MSSRT研細，稱重，加蒸餾水溶解，7mL含9.5mg。

1.3 主要試劑和儀器 戊巴比妥鈉（25g/瓶，上海西唐 批號WS20080118）；動物呼吸機（DH-150，浙江大學醫學儀器廠）；Medlab-U/4CS生物信號采集處理系統（南京美易科技有限公司）；SEQUOIA512超聲診斷儀（Siemens，德國）；15L8W-S高頻線陣探頭（Siemens，德國）

1.4 實驗方法 47只SD大鼠隨機取8只為假手術組，其余39只大鼠行冠狀動脈左前降支結扎術，術后縫合，觀察10天。存活的29只大鼠按隨機數字表法分為CAMNH組、MSSRT組各10只，模型組9只。大鼠急性心肌梗塞制作參考《藥理實驗方法學》[2]方法：通過左冠狀動脈前降支高位結扎并略作改進。大鼠稱重，麻醉，固定，記錄Ⅱ導聯心電圖。氣管插管，呼吸機輔助呼吸（吸呼比1∶2，呼吸頻率60次/min，潮氣量3～4mL/100g）。進入胸腔，結扎左冠狀動脈前降支，結扎成功的標志為心電圖Ⅱ導聯即刻R波振幅明顯抬高，ST段抬高＞0.2mV以上。結扎術后觀察15min，關閉胸腔，擠出殘余空氣，逐層縫合胸壁組織，做好麻醉后復蘇及保暖工作。假手術組除不結扎冠脈左前降支外，其余步驟相同。CAMNH組予復發黃芪養心合劑7mL/（kg·d）灌胃；MSSRT組予琥珀酸美托洛爾緩釋片混懸液7mL/（kg·d）灌胃；模型組和假手術組均予蒸餾水7mL/（kg·d）灌胃，共計8周。全程記錄Ⅱ導聯心電圖并存盤。

1.5 觀察指標 冠脈結扎術后第6周、第10周分別進行超聲心動圖（ultrasono-cardiograph，UCG）測定，經麻醉、胸前備皮，探頭頻率調至14MHz，取胸骨旁左室長軸切面，由二維超聲引導M型曲線測量左心室舒張期內徑（LVDd，mm）、左心室收縮期內徑（LVDs，mm）、左心室射血分數（LVEF，%）、左心室內徑縮短率（FS，%），并進行前后對照分析。并進行前后對照及觀察指標變化幅度比較。

1.6 統計學方法 應用SPSS17.0軟件進行統計分析。計量資料以（±s） 表示，采用單因素方差分析進行組內比較和組間比較。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 實驗動物存活情況 左前降支冠脈結扎成功率為100%。冠狀動脈結扎術中死亡8只，術后觀察期間死亡2只，術后第6周末存活29只，存活率74.4%。術后第6周心臟彩超檢查麻醉CAMNH組死亡2只，術后第10周心臟彩超檢查麻醉模型組死亡1只，余均存活至實驗結束。

2.2 心電圖改變 手術前，大鼠心率多數高于400次/min，P波、QRS波、T波正常可辨（見圖1）；模型組可見ST段抬高＞0.2mV以上，T波、ST段與R波融合形成單向曲線，持續至手術結束，證明造模成功。MSSRT組可見Ⅱ導聯R波振幅明顯抬高，T波、ST段與R波融合形成單向曲線，持續至手術結束。CAMNH組可見Ⅱ導聯R波振幅抬高，T波、ST段與R波融合形成單向曲線，心律失常可見早搏（見圖1～4）。

圖1-4 大鼠冠脈左前降支結扎術后Ⅱ導聯心電圖

2.3 各組冠脈結扎術后UCG比較 術后6周，CAMNH組LVEF、FS明顯低于假手術組（P＜0.01）和MSSRT組（P＜0.05），與模型組相近（P＞0.05）。各組LVDd、LVDs比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。術后10周，CAMNH組、MSSRT組LVDs較模型組明顯縮小（P＜0.01）。CAMNH組、MSSRT組LVEF、FS均高于模型組（P＜0.01）。各組間LVDd比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。各組前后對比：模型組LVDs增大（P＜0.05）；模型組及MSSRT組LVEF及FS進一步降低（P＜0.01），CAMNH組無明顯變化（P＞0.05）。見表1。

3 討論

研究發現，心肌梗死后的VR是離心性重構，包括了Cx43的破壞與表達減少[3-5]、膠原增生[6-7]、心肌細胞凋亡的增加[8-10]和左室的增大。

本研究采用左冠狀動脈結扎法復制心肌梗死大鼠模型，可出現較大范圍的心肌梗死，以及血清膠原蛋白含量增加心肌肥大和左心室肥大等心室重構的病理學改變，與文獻報道相符[11]。

心肌梗死大鼠模型被廣泛用來檢測治療性干預措施對VR和心臟功能的效果。以往研究存在需要介入手段評價左心室功能或需要殺死動物才能測定等缺陷。李衛虹等[12]研究表明，超聲心動圖檢測LAEF和FS值不僅能準確地反映正常大鼠的心臟功能，也能準確地反映病變心臟功能。因此，認為應用超聲心動圖檢測小動物心臟功能方法確實可靠。具有無創、操作方便、可多次重復的特點，較血流動力學測定方法有不可比擬的優越性。冠脈結扎大鼠術后24h存活率為78.5%，術后6周時為74.4%，高于文獻報道術后6周時59%的存活率[14]。根據術后6周時超聲心動圖檢測結果VR實驗造模成功率為74.4%。

β-受體阻滯劑通過抑制交感神經興奮性，可使心室重構改善。臨床研究[14]證實，在一定劑量范圍內，隨著劑量增加，LVEF改善的程度明顯增加，說明治療效果與劑量有關。而且MSSRT已被廣泛推薦用于冠心病心室重構的防治[15]。

本實驗通過對SD大鼠冠脈結扎術后第6周、術后第10周先后兩次行超聲心動圖檢查，發現如下：LVDs（mm）在術后第10周，模型組較假手術組增大，MSSRT組較模型組增大，CAMNH組較模型組縮小。CAMNH與MSSRT對LVDs（mm）作用較為顯著，可以考慮將LVDs（mm）作為VR研究中一個較為理想的觀察指標。LVEF（%）及FS（%）在模型組術后第10周明顯降低，顯著低于假手術組，說明VR過程中心功能下降持續存在。假手術組LVEF（%）及FS（%）前后比較亦有下降，考慮整個實驗研究持續時間較長，可能與大鼠衰老相關。LVEF（%）及FS（%）在MSSRT組術后第10周較模型組明顯升高，較假手術組降低。

表1 各組大鼠冠脈左前降支結扎術后UCG比較（±s）

表1 各組大鼠冠脈左前降支結扎術后UCG比較（±s）

注：與假手術組比較，★P＜0.05，★★P＜0.01；與模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與MSSRT組比較，▲P＜0.05；與術后第6周比較，*P＜0.05，**P＜0.01 MSSRT：琥珀酸美托洛爾緩釋片；CAMNH：復方黃芪養心合劑

LVDs(mm)鼠數LVDd（mm）LVEF（%）FS（%）組別術后第6周假手術組模型型MSSRT組CAMNH組術后第10周假手術組模型型MSSRT組CAMNH組881 08 881 6.34±0.36 6.63±0.83 6.71±1.29 6.94±0.04 3.75±0.46 4.59±0.68★4.33±0.98 4.94±0.57★★77.08±6.08 64.35±6.12★★70.59±8.65 61.19±8.42★★▲40.98±5.45 31.73±4.64★★35.75±6.41 28.96±5.49★★▲08 6.74±1.45 7.89±2.16 6.98±0.72 6.84±0.53 4.30±1.22 6.44±2.01★★** 4.88±0.48△△4.73±0.43△△72.15±5.87* 43.74±8.96★★** 63.03±4.35★★△△** 64.00±5.34★△△36.70±4.29* 18.88±4.44★★** 29.95±2.93★★△△** 30.64±3.60★★△△

心肌梗死后的VR主要表現為心室的增大。心肌梗死屬于中醫的“真心痛”、“厥心痛”等范疇，而心室重構屬中醫“胸痹”、“濕濁”、“虛勞”等范疇。該病為本虛標實之證，心肌梗死后VR的中醫病機主要為氣陰兩虛、濁瘀內結。沈祥春等[16]研究發現太子參對急性心肌梗死心力衰竭大鼠心室重構有改善作用。池一凡等[17]研究認為黃芪可以延緩心肌纖維化及VR的進展。王偉[18]發現益氣養陰活血解毒中藥可縮小AMI后心室重構大鼠心肌梗死面積，抑制膠原蛋白合成、分泌和心肌肥厚、心肌纖維化。

CAMNH為院內制劑，臨床應用治療冠心病合并心室重構患者，可有效緩解胸悶、胸痛、氣短乏力、心悸心慌等癥。本研究結果顯示，在冠脈結扎術后心肌梗死所致VR的動物模型中，冠脈結扎術后SD大鼠VR過程中發生了LVDs（mm）的增大，LVEF（%）、FS（%）的降低。CAMNH能改善LVDs（mm）降低LVEF（%）、FS（%），其作用與MSSRT相當，具體作用機制有待于進一步研究。

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（收稿：2014-11-17 修回：2015-01-26）

Effects of Fufang Huangqin Yangxin Heji on Ventricular Remodeling in Rats

CHEN Qilan1，ZHU Guangli1，GONG Yiping2，PAN Nong1，QI Guoan3，HE Xiaolong1.1Department of Cardiovascular Diseases,Hangzhou Traditional Chinese Medical Hospital,Hangzhou (310007),China;2Department of TCM Diagnostics,Zhejiang Chinese Medical University,Hangzhou(310053),China;3Department of Internal Medicine,Xiaoshan District Traditional Chinese Medical Hospital of Hangzhou,Hangzhou(311201),China

Objective To investigate the effects of Fufang Huangqin Yangxin Heji（FHYH）on ventricular remodeling（VR）in rats after coronary artery ligation.Methods Forty-seven SD rats were random ly divided into sham operation group（n=8）and experimental group receiving ligation of left anterior descending branch（LAD）of coronary artery（n=39）.After 10 days,29 rats survived in the experimental group and then were random ly divided into 3 groups:FHYH group（n=10）,metoprolol succinate sustained-released tablets（MSSRT）group（n=10）,VR group（n=9）.Rats in 4 groups were treated with the corresponding drugs for 8 weeks.At the 6th and 10th week after ligation of LAD of coronary artery,left ventricular end-diastolic dimension（LVDd）,left ventricular end-systolic dimension（LVDs）,left ventricular ejection fraction（LVEF）and fractional shortening（FS）were measured with ultrasonic cardiogram（UCG）.Results At 6th week after ligation,LVEF and FS were 61.19%±8.42%and 28.96%± 5.49%in FHYH group,which were lower than those of sham operation group（77.08%±6.08%;40.98%±5.45%;P＜0.01）and those of MSSRT group（70.59%±8.65%;35.75%±6.41%;P＜0.05）,but did not differ from those of VR group（64.35%±6.12%;31.73%±4.64%;P＞0.05）.At the 10th week after ligation,compared with VR group,LVDs reduced（6.44±2.01mm vs 4.73±0.43mm and 4.88±0.48mm）,LVEF elevated（43.74%±8.96%vs 64.00%±5.34%and 31.73%±4.64%）,and FS increased（18.88%±4.44%vs 30.64%±3.60%and 29.95%±2.93%）in FHYH group and MSSRT group（all P＜0.01）.When comparing the change between the 6th week and the 10th week after ligation,itwas found that LVDs increased in VR group（P＜0.05）;LVEF and FS significantly reduced in VR group and MSSRT group（P＜0.01）and remained the same in FHYH group（P＞0.05）.Conclusion FHYH has effect on VR in rats after ligation of LAD of coronary artery by ameliorating the accretion of LVDs and the reduction of LVEF and FS, which is similar to the effect of MSSRT.

rats;ventricular remodeling;Fufang Huangqin Yangxin Heji;ultrasonocardiograph;metoprolol

1杭州市中醫院心血管內科（杭州 310007）；2浙江中醫藥大學中醫診斷學教研室（杭州 310053）；3杭州市蕭山區中醫院內科（杭州311201）

陳啟蘭，Tcl：13588750941；E-mail:1469013813@qq.com