龍城和迪法克鵪鶉血清尿酸生理值范圍探討

王雨，林志健，張冰，聶安政，周月，朱春勝，牛紅娟，王雪潔

（北京中醫(yī)藥大學中藥學院，北京 100029)

研究報告

龍城和迪法克鵪鶉血清尿酸生理值范圍探討

王雨，林志健，張冰*，聶安政，周月，朱春勝，牛紅娟，王雪潔

（北京中醫(yī)藥大學中藥學院，北京 100029)

目的探討不同品系、性別鵪鶉血清尿酸值生理值范圍。方法收集本實驗室前期11批不同品系、性別鵪鶉的血清尿酸值，動態(tài)觀察其血清尿酸的含量變化，利用醫(yī)學參考值的方法對收集到數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。結果雄性迪法克鵪鶉血清尿酸的平均值為（221.06±79.59)μmol/L，血清尿酸水平參考值范圍為（87.32～382.34)μmol/L；雌性迪法克鵪鶉血清尿酸的平均值為（189.85±68.58)μmol/L，血清尿酸水平參考值范圍為（72.72～369.73)μmol/L；雄性龍城鵪鶉血清尿酸的平均值為（217.22±72.91)μmol/L，血清尿酸水平參考值范圍為（82.92～360.24)μmol/L，雌性龍城鵪鶉血清尿酸的平均值為（197.27±66.84)μmol/L，血清尿酸水平參考值范圍為（95.36～348.73)μmol/L。通過對不同品系雄雌鵪鶉血清尿酸值的比較，發(fā)現(xiàn)雌性鵪鶉的血清尿酸值均低于雄性鵪鶉，差異有顯著性（P＜0.01)；通過對不同品系雌雄鵪鶉各日齡組的比較，發(fā)現(xiàn)不同品系雌雄鵪鶉各日齡組間的血清尿酸值差異無顯著性。結論明確了不同品系、性別鵪鶉血清尿酸水平變化范圍。

鵪鶉；尿酸；生理值

尿酸作為一種還原性物質參與人體內的氧化還原過程，正常范圍內的尿酸具有抗氧化、抗DNA損傷等生理功能，一旦超出其正常范圍可能導致高尿酸血癥，特別是近年來，隨著現(xiàn)代生活水平的不斷提高，人們生活習慣、飲食結構的改變，糖、脂、蛋白質的大量攝入，高尿酸血癥的患病率不斷升高，并有年輕化的趨勢[1］，有研究顯示高尿酸血癥與肥胖、高血壓、高脂血癥、冠狀動脈粥樣硬化性心臟病、胰島素抵抗的發(fā)生密切相關，已成為識別代謝綜合征的早期標志[2］。因此，為了對高尿酸血癥進行進一步研究，一個合理穩(wěn)定的動物模型及模型動物尿酸指標參考值的建立至關重要。近五十多年來，鵪鶉作為新型實驗模型被用于各疾病領域，因其與人類相似的嘌呤核苷酸代謝途徑，有報道將鵪鶉作為塑造高尿酸血癥首選動物模型[3、4］。然而，目前國內外對于鵪鶉尿酸生理值范圍鮮有報道，本文主要報道不同品系、性別鵪鶉的血清尿酸值，并對數(shù)據(jù)進行比較分析得出其參考值范圍，以期為實驗研究提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物

迪法克鵪鶉、龍城鵪鶉共11批，其中雄性迪法克鵪鶉42只，雌性迪法克鵪鶉22只；雄性龍城鵪鶉73只，雌性龍城鵪鶉43只，均為6～14周齡，均購自北京種禽公司德嶺鵪鶉廠。收集本實驗室前期測得的這11批6～14周齡不同品系、性別鵪鶉的血清尿酸值共1160例，各值均源于實驗對照組數(shù)據(jù)，其中雄性迪法克鵪鶉287例，雌性迪法克鵪鶉180例，雄性龍城鵪鶉408例，雌性龍城鵪鶉285例。

1.1.2 檢測試劑盒與儀器

Sunrise酶標儀，瑞士Teacan公司；尿酸檢測試劑盒（尿酸酶比色法)，批號:141181，均購自中生北控生物科技股份有限公司。

1.2 飼養(yǎng)環(huán)境條件

各批實驗均于北京中醫(yī)藥大學動物室進行，自由攝食，實驗室溫（24±1)℃，濕度40% ～70%，鵪鶉育成料由北京種禽公司德嶺鵪鶉廠提供，配方:玉米52%，豆粕25%，骨粉與微量元素各6%，石粉5%，棉籽殼和麩皮各3%。

1.3 方法

1.3.1 血液采集方法

實驗動物均禁食不禁水12 h，頸靜脈取血，3000 r/min離心10 min，分離血清后進行生化指標檢驗。

1.3.2 統(tǒng)計方法

數(shù)據(jù)在SAS 9.2軟件中統(tǒng)計，所有數(shù)據(jù)經正態(tài)分布和方差齊性檢驗，符合正態(tài)分布且方差齊的使用醫(yī)學參考值法，不符合正態(tài)分布或不滿足方差齊性檢驗使用百分位數(shù)法[16］，以此確定正常值范圍。兩組數(shù)據(jù)的比較根據(jù)各組正態(tài)及方差齊與否選擇雙尾t檢驗或是非參數(shù)檢驗，P＜0.05具有統(tǒng)計學意義。多組數(shù)據(jù)比較根據(jù)各組正態(tài)及方差齊與否選擇ANOVA分析或非參數(shù)檢驗，P＜0.05具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 兩品系雌雄鵪鶉不同日齡體重統(tǒng)計結果

據(jù)表1可見，兩品系雌雄鵪鶉體重呈持續(xù)穩(wěn)定增長，相同日齡下龍城雌雄鵪鶉體重均低于迪法克雌雄鵪鶉。

2.2 同一品系雌雄鵪鶉血清尿酸值結果分析

結果顯示，雌性龍城鵪鶉的血清尿酸值低于雄性龍城鵪鶉，差異有顯著性（P＜0.01)。雌性迪法克鵪鶉的血清尿酸值低于雄性迪法克鵪鶉，差異有顯著性（P＜0.01)。同時，雄性龍城鵪鶉和雄性迪法克鵪鶉血清尿酸值差異無顯著性（P＞0.05)，雌性龍城鵪鶉和雌性迪法克鵪鶉血清尿酸值差異無顯著性（P＞0.05)。見表2。

表1 兩品系雌雄鵪鶉不同日齡體重統(tǒng)計結果（±s，g)Tab.1 The body weight ofmale and female quails on different days

表1 兩品系雌雄鵪鶉不同日齡體重統(tǒng)計結果（±s，g)Tab.1 The body weight ofmale and female quails on different days

注:相同日齡同性別不同品系比較*P＜0.05，**P＜0.01。Note.Comparison between different strains of the same day-age and gender，*P＜0.05，**P＜0.01.

日齡 ♂♀Age（days)龍城Longcheng 42 148.99±9.84 131.99±8.87**157.4±20.11 137.86±10.71 49 152.62±11.5 132.88±9.13**174.59±23.37 149.25±14.05 56 165.26±13.59 142.52±10.5**195.38±20.67 172.25±17.57 63 173.24±20.64 144.50±9.94**212.04±18.35 186.81±15.03 70 169.34±10.87 144.26±10**209.17±20.64 190.72±15.62 77 171.49±11.18 145.61±9.76**214.89±19.69 192.1±16.38 84 174.99±11.94 147.02±10**217.2±19.75 190.13±14.21 91 172.51±12.25 145.80±10.26**213.82±20.07 188.61±15.52迪法克Difake龍城Longcheng迪法克Difake

2.4 兩品系雌雄鵪鶉不同日齡組血清尿酸統(tǒng)計分析

由表3可見經ANOVA分析或非參數(shù)檢驗，迪法克雌雄鵪鶉和龍城雌雄鵪鶉各日齡組間血清尿酸值差異均無顯著性（P＞0.05)。

表2 兩品系雌雄鵪鶉血清尿酸統(tǒng)計結果（±s，μmol/L)Tab.2 The serum uric acid inmale and female quails

表2 兩品系雌雄鵪鶉血清尿酸統(tǒng)計結果（±s，μmol/L)Tab.2 The serum uric acid inmale and female quails

注:雌雄性別比較*P＜0.05**P＜0.01。Note.Comparison betweenmale and female quails，*P＜0.05**P＜0.01.

品系Strains參考范圍Reference range龍城Longcheng 雄性 217.22±72.91 82.92～360.24雌性 197.27±66.84**95.36～348.73迪法克Difake 雄性 221.06±79.59 87.32～382.34雌性 189.85±68.58**72.72～369.73性別Genders尿酸Uric acid

表3 兩品系雌雄鵪鶉不同日齡組血清尿酸統(tǒng)計結果（±s，μmol/L)Tab.3 The serum uric acid in male and female quails in the age of different days

表3 兩品系雌雄鵪鶉不同日齡組血清尿酸統(tǒng)計結果（±s，μmol/L)Tab.3 The serum uric acid in male and female quails in the age of different days

日齡 ♂♀Age（days)龍城Longcheng 42 259.15±93.65 213.32±77.16 184.11±64.83 193.10±64.60 49 237.08±103.39 221.70±79.52 199.45±67.94 220.21±86.87 56 217.20±82.37 204.04±68.92 210.13±80.90 189.55±61.83 63 214.67±76.32 206.13±70.41 224.21±81.49 209.06±70.65 70 220.33±64.60 225.19±70.34 184.95±70.97 184.58±58.97 77 198.66±67.43 215.73±71.83 172.46±67.25 205.48±65.49 84 203.51±81.11 243.89±80.34 156.36±46.39 196.43±57.90 91 198.34±52.08 220.90±55.15 177.45±69.82 170.02±44.82迪法克Difake龍城Longcheng迪法克Difake

3 討論

高尿酸血癥動物模型主要有大鼠、小鼠及禽類動物如雞和鵪鶉，不同動物造模各有特點。嚙齒類動物大鼠、小鼠廣泛用于高尿酸血癥動物模型，但其體內含有尿酸酶，尿酸酶可將尿酸轉化為更易溶于水的尿囊素排出體外，這與人類的代謝途徑相差較大，造模較困難，并且模型維持時間較短。自1992年即有研究者利用基因工程技術破壞尿酸酶基因，獲得尿酸酶缺乏的突變小鼠，雖然尿酸水平極顯著升高，但價格昂貴，操作復雜，對腎臟損傷嚴重，死亡率高。亦有注射外源性尿酸的相關造模報道，均維持時間較短。禽類動物體內不含尿酸酶，與人類的嘌呤核苷酸代謝途徑相似度較高，大部分以尿酸的形式從尿中排出，僅有很少一部分（約為1/20)被分解為尿囊素、氨等，故可將禽類動物應用于高尿酸血癥模型的建立[5］。鵪鶉，屬鳥綱（Aves)，雞形目（Callformes)，雉科（Phasianidae)，鶉（Coturnix)，其學名為Coturnix japonica，是雞形目中較小的一種家禽，結合飼養(yǎng)以及實驗操作的可行性可作為高尿酸血癥較理想的動物模型。在實驗研究中，對血液生化指標進行評價時，不僅需要與空白對照組的數(shù)據(jù)進行比較，還需與其正常參考值進行比較，才能更好地進行判斷，臨床上對不同人群的血液生化指標進行了研究并給出了正常值的參考范圍，對于常用實驗動物大小鼠亦有血液生化指標參考值的報道。陳奇等[6］對嚙齒類實驗動物大小鼠的血尿酸值進行了研究，給出了大鼠血尿酸參考值范圍為15～21 mg/dL，小鼠血尿酸參考值范圍為17～28 mg/dL，而對于禽類動物的血尿酸值參考范圍鮮有報道，迄今只有兩篇文獻對鵪鶉的血尿酸的測定進行了研究[7、8］，因此，鵪鶉血尿酸正常參考值的探討對于高尿酸血癥的研究具有十分重要的意義。

本實驗室前期對鵪鶉的飼養(yǎng)環(huán)境與條件給出了規(guī)范標準，室溫為（24±1)℃，濕度為40% ～70%，每天給予12 h的光照，飼料均為北京種禽公司德嶺鵪鶉廠提供的鵪鶉育成料，從而保證實驗鵪鶉穩(wěn)定的正常生活狀態(tài)。本實驗室前期亦對不同造模劑及其不同劑量誘導鵪鶉高尿酸血癥進行了系統(tǒng)的觀察，發(fā)現(xiàn)15 g/（kg·d)酵母食餌誘導的鵪鶉高尿酸血癥模型具有血尿酸異常出現(xiàn)時間較早，模型穩(wěn)定、重復性好，實驗操作方便，肝腎功能無明顯損害、與人類飲食結構改變相類似等特點，可以作為尿酸紊亂的較理想的實驗對象[9-11］。目前常用于實驗動物的鵪鶉的品系有朝鮮龍城鵪鶉及法國迪法克鵪鶉，本實驗室亦對不同品系、不同性別的鵪鶉及其造模特征進行了大量的研究，發(fā)現(xiàn)雄性迪法克鵪鶉在喂飼15 g/（kg·d)酵母食餌7 d后其血清尿酸水平顯著升高，并可持續(xù)升高至第32天[12］，雌性迪法克鵪鶉在喂飼15 g/（kg·d)酵母食餌7 d后其血清尿酸水平顯著升高，并可持續(xù)升高至第28天[13］。

流行病學研究顯示成年男性的血尿酸水平顯著高于閉經前女性的血尿酸水平[14］，這與本研究結果中雄性迪法克鵪鶉血尿酸值顯著高于雌性迪法克鵪鶉相似，Hosoyamada等[15］研究證實雌激素可通過調節(jié)尿酸轉運蛋白促進尿酸排泄，故本研究結果可能與雌激素存在一定關系，其具體機理需要進一步探討。本研究結果亦顯示兩種品系雌雄鵪鶉不同日齡組間的血清尿酸值差異無顯著性，且各組血清尿酸值波動較穩(wěn)定，這亦提示鵪鶉可作為高尿酸血癥合理穩(wěn)定的動物模型。本文初步建立不同品系、性別鵪鶉的尿酸參考值范圍，可為鵪鶉應用于實驗動物提供一定的參考，豐富其生物信息庫，從而滿足臨床醫(yī)學和藥理研究的需要。

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Normal range of serum uric acid in quails of different strains and genders

WANG Yu，LIN Zhi-jian，ZHANG Bing*，NIE An-zheng，ZHOU Yue，ZHU Chun-sheng，NIU Hong-juan，WANG Xue-jie
（Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100029，China)

ObjectiveTo explore the normal range of serum uric acid in quails.M ethodThe data were collected from male and female quails of different strains in 11 experiments，and analyzed by the way ofmedical reference value.ResultThemean value of serum uric acid ofmale Difake strain quails was（221.06±79.59)μmol/L，and the normal range was（87.32 to 382.34)μmol/L.Themean value of serum uric acid of female Difake strain quails was（189.85± 68.58)μmol/L，and the normal range was（72.72 to 369.73)μmol/L.The mean value of serum uric acid of male Longcheng strain quailswas（217.22±72.91)μmol/L，and the normal range was（82.92 to 360.24)μmol/L.Themean value of serum uric acid of female Longcheng strain quails was（197.27±66.84)μmol/L，and the normal range was（95.36 to 348.73)μmol/L.The serum uric acid value of female quails was significantly lower than that ofmale quails. There was no significant difference in the value of serum uric acid between female and male quails from each day-age groups.ConclusionsThis study has established the normal ranges for serum uric acid in quails of different strains and genders.

Quail；Uric acid；Normal range

Q95-33

A

1005-4847（2015)06-0582-04

10.3969/j.issn.1005-4847.2015.06.007

2015-09-16

國家自然科學基金資助課題（81403152)；教育部高等學校博士學科點專項科研基金（20130013120001，20120013130002)；北京中醫(yī)藥大學青年教師專項自主課題（2013-QNJSZX008)；北京中醫(yī)藥大學科研創(chuàng)新團隊（2011-CXTD-014)。

王雨（1991-)，女，碩士研究生，研究方向:中藥防治代謝性疾病研究，E-mail:wangyuxh@163.com。

張冰（1959-)，女，教授/主任醫(yī)師，博士生導師，研究方向:中藥防治代謝性疾病研究，E-mail:zhangbing6@263.net。