黃羽肉雞組織中磺胺間甲氧嘧啶的殘留消解規(guī)律研究

吳 波，羅厚強，段龍川，楊飛萍

(1.溫州市動物疫病預(yù)防控制中心，浙江溫州325000;2.溫州科技職業(yè)學院動科系;3.溫州市農(nóng)產(chǎn)品檢測中心)

磺胺間甲氧嘧啶(SMM)是高效人工合成類抗菌藥，抗菌作用和預(yù)防細菌感染效果屬磺胺類中最強［1、2］，常用于防治畜禽菌源性感染和球蟲病［3］，也可用作飼料添加劑，以提高畜禽抗病力和生產(chǎn)性能。磺胺類藥物殘留期較長，容易在畜禽產(chǎn)品中殘留。藥物殘留可破壞人體造血系統(tǒng)，引起溶血性貧血癥、粒細胞缺乏癥、血小板減少癥等，容易導(dǎo)致細菌耐藥性的產(chǎn)生［4、5］。

藥物的原型及代謝產(chǎn)物在機體內(nèi)的殘留消解是一個復(fù)雜的過程，不同畜種的殘留消解規(guī)律有所不同［6］，國內(nèi)外的科研人員曾研究了SMM 在豬［1］、山羊［7］、家兔［8］、馬［9］等動物體內(nèi)的藥代動力學過程。但是，黃羽肉雞可食組織中的藥物殘留消解規(guī)律研究至今未見報道。為了保證黃羽肉雞產(chǎn)品安全可靠，維護消費者利益，筆者通過磺胺間甲氧嘧啶藥物在黃羽肉雞組織內(nèi)的休藥期驗證試驗，以掌握該藥物在不同組織內(nèi)的殘留消解規(guī)律，同時為合理給藥以達到最佳療效提供參考，特進行本試驗。

1 材料與方法

1.1 藥品及儀器 磺胺間甲氧嘧啶鈉:商品名制菌磺，SMM 含量45%，生產(chǎn)批號:20140121，購自廣東某動物保健品有限公司。SMM 對照品:含量99.23%，購自Dr.Ehrenstorfer GmbH 公司，純度不低于98.0%。ACQUITY UPLC-Xevo TQ 超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀，配有電噴霧離子(ESI)源;高速冷凍離心機，超聲清洗儀，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，漩渦混勻器。

1.2 試驗動物及分組 40日齡黃羽肉雞160 羽，體重1.5 ±0.2 kg，公母各半，試驗前確保無磺胺類藥物使用記錄。

供試雞隨機分為對照組和低(50 mg/kg)、中(100 mg/kg)、高(200 mg/kg)三個磺胺類藥物梯度劑量試驗組，每組40 羽。

1.3 飼養(yǎng)管理及給藥方法 供試肉雞全部籠養(yǎng)，自由采食和飲水。40日齡開始，對照組僅飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗組飼料中分別以50 mg/kg、100 mg/kg 和200 mg/kg 水平添加磺胺間甲氧嘧啶鈉，連喂7 d 后停藥，停藥后不同時間點測定供試黃羽肉雞可食組織中SMM 殘留量。

1.4 采樣及樣品處理 停藥后0 d，3 d，10 d，15 d，20 d，25 d，28 d，30 d，32 d，35 d 時間點每組隨機選取4 羽，稱重后立即屠宰、取樣。每雞各取胸肌和腿肌約25 g、全肝、全腎，樣品編號后置－20℃冷凍保存，待測。

取5.0 g 經(jīng)切碎勻漿的可食組織樣品，置50 mL離心管中，加入無水硫酸鈉5 g 和乙腈20 mL，渦旋混勻2 min，超聲5 min，以8 000 r/min 冷凍離心5 min。將上層提取液轉(zhuǎn)移至100 mL 棕色雞心瓶中，殘渣加入乙腈20 mL 重復(fù)操作1 次。合并提取液，向雞心瓶中加入異丙醇10 mL。置40℃以下水浴減壓濃縮至近干，用氮氣吹干。準確加入1.0 mL 初始流動相，渦旋混勻溶解殘留物，轉(zhuǎn)移至10 mL 具塞聚丙乙烯離心管中，加入正己烷1 mL，混勻，以10 000 r/min 冷凍離心5 min，取下層液過0.2 μm 微孔濾膜，濾液待測定。

1.5 測定方法

色譜條件:色譜柱:ACQUITYUPLCTMBEHC18色譜柱(100 mm×21 mm，1.7 μm;Waters 公司);柱溫35℃;樣品溫度10℃;進樣體積5 μL;流動相A為乙腈，B 為0.1%(體積分數(shù))甲酸水溶液;流速:0.25 mL/min。

質(zhì)譜條件:電離方式ESI +;電離電壓:3.50 kV;離子源溫度:150℃;錐孔反吹氣流量:50 L/h;脫溶劑氣溫度:350℃;脫溶劑氣流量:800 L/h;采集模式:多反應(yīng)監(jiān)測(MRM);碰撞室氣流量:0.2 mL/min。

1.6 回收率和精密度測定 采用未檢測出磺胺間甲氧嘧啶鈉的肌肉、肝及腎樣品作為空白樣品，分別進行加標回收及精密度試驗，每個濃度設(shè)4 個平行樣品，結(jié)果詳見表1。

表1 方法回收率及精密度實驗數(shù)據(jù)

由表1可見，加標回收率范圍100% ～120%，相對標準偏差均小于9.0%，表明SMM 0.1 mg/kg殘留濃度附近具有較高的準確度。

3 結(jié)果與分析

3.1 停藥后各時間點黃羽肉雞可食組織中SMM 殘留量測定 詳見表2。

表2 磺胺間甲氧嘧啶在黃羽肉雞組織中的消解規(guī)律

由表2可見，對照組肉雞的肌肉、肝、腎組織中均未檢測到SMM。試驗組肉雞各停藥時間點可食組織中SMM 殘留濃度，停藥0 d 時，中劑量組肌肉、肝和腎組織中殘留量分別為5.231 mg/kg、10.240 mg/kg 和15.439 mg/kg，SMM 在組織中濃度分布差異較大，三個梯度試驗組組織殘留量高低順序依次為腎＞肝＞肌肉。

SMM 在停藥0－3 d 區(qū)間內(nèi)殘留消解速度較快，如圖1所示。其中，腎組織在0 d 時殘留濃度最高，殘留量下降速度最為迅速，中劑量試驗組10 d后，殘留量低于我國最高殘留限量標準(0.1 mg/kg)［10］，殘留濃度為0.090 mg/kg，停藥30 d 后，未檢出殘留物;中劑量試驗組肝組織在停藥15 d 后SMM 殘留量已低于最高殘留限量標準，殘留濃度為0.088 mg/kg，停藥35 d 后，未檢出殘留物;肌肉組織SMM 殘留代謝消解相對緩慢，停藥30 d 后，藥物殘留量為0.084 mg/kg。

圖1 磺胺間甲氧嘧啶在黃羽肉雞組織中的消解規(guī)律

3 小結(jié)與討論

三個劑量試驗組在黃羽肉雞腎組織中代謝消解較快，其次是肝組織，肌肉組織中SMM 代謝消解速度較緩慢。在0 d，三個梯度劑量試驗組SMM 殘留濃度差異明顯，15 d 后殘留濃度及消解速度趨于一致。中劑量試驗組肌肉、肝、腎組織分別停藥30 d、15 d、10 d 后，殘留量均低于我國規(guī)定的最高殘留限量標準。

2005年版《中國獸藥典》規(guī)定磺胺間甲氧嘧啶在肉雞中的休藥期為28 d。黃羽肉雞品種生長周期相對較長，藥物代謝速度可能低于其他肉雞品種，肌肉組織中的SMM 殘留量在28 d 時則尚未達到安全標準。

根據(jù)本次試驗，筆者認為針對黃羽肉雞品種，在臨床使用SMM 時，28 d 的休藥期可能尚不安全，應(yīng)按照30 d 或者以上的休藥期執(zhí)行，才能確保黃羽肉雞可食組織中的SMM 殘留低于國家規(guī)定的最高限量標準。

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［10］中華人民共和國農(nóng)業(yè)部公告第235 號.動物性食品中獸藥最高殘留限量［S］.