黃疸肝病患者檢測白細胞異常直方圖原因探討

孫燕飛

【摘要】? 目的：探討黃疸肝病患者應用K-4500血液分析儀檢測白細胞計數出現一種異常直方圖的原因。方法：白細胞計數出現異常直方圖的黃疸肝病患者標本，同時用手工目視計數法進行白細胞計數，并對標本進行洗滌（去除黃疸血漿、白細胞、血小板），再應用K-4500檢測白細胞，所得結果運用stata 7.0進行統計分析，并同時與肝功能指標做分析。結果：出現異常直方圖的黃疸肝病患者標本，K-4500計數結果明顯高于目視計數法，P<0.001;應用K-4500檢測洗滌紅細胞（去除黃疸血漿、白細胞、血小板）稀釋樣本，所得單位紅細胞的白細胞結果與原樣本差異無統計學意義，P>0.05。出現異常直方圖的病例與對照組比較，肝功能部分指標差異有顯著性，P<0.001。結論：出現此種異常直方圖的黃疸標本的白細胞計數，儀器法結果明顯高于手工法。而這一原因主要是由于紅細胞破壞不完全所致，且與肝臟代謝異常有關。?【關鍵詞】? 黃疸;直方圖;白細胞

1? 材料與方法1.1? 研究對象? 我院肝科住院患者16例（慢性重癥肝炎14例，肝硬化2例），黃疸（379.68±192.06）μmol/L，對照組為隨機抽取肝科住院患者25例（肝硬化3例，慢性肝炎21例，肝癌1例），其白細胞直方圖分布正常。1.2? 試劑和材料? 采用日本Sysmex公司的K-4500三分類血液分析儀，均采用原裝進口試劑，用儀器配套的校正品校正后，質控品的測試結果均在控制范圍內。1.3? 方法1.3.1? 儀器法? 所有標本系靜脈血2 ml注入含有15 g/L EDTAK2 20 μl的真空試管中，充分混勻抗凝，2 h內上機檢測。當樣本的白細胞直方圖呈圖1所示的特征性曲線時，將樣本復檢，2次結果均值作為儀器檢測結果。1.3.2?? 手工法? 2%冰醋酸?? 0.38 ml加入血樣20 μl混勻，充入計數池進行白細胞計數，2次結果取均值為最終結果。此操作由2名技術熟練的檢驗師進行。1.3.3? 鏡下觀察? 將樣本及對照標本（正常白細胞直方圖）在機外模擬K-4500白細胞檢測流程（稀釋液0.994 ml，白細胞溶血素0.5 ml，全血6 μl，13 s）鏡下觀察。1.3.4? 將樣本去除血漿后用生理鹽水洗滌，4 000 r/min離心15 min，去除白細胞及血小板層，再用生理鹽水將紅細胞稀釋至原樣本數，誤差<5%。手工檢測白細胞<0.2×109/L，血小板<5×109/L，再上機檢測。1.3.5? 兩組對比? 用stata 7.0統計軟件分析異常直方圖樣本組與對照組的肝功能生化指標，試尋找出現異常直方圖的代謝基礎。 2? 結果2.1? 白細胞計數? 異常直方圖樣本的白細胞總數，儀器檢測（69.34±43.23）×109/L，手工檢測（5.4±2.16）×109/L，儀器檢測白細胞總數比手工檢測顯著增高。配對t檢驗，t值為6.126 4，P<0.001。對照標本儀器檢測（4.61±1.77）×109/L，手工檢測（4.52±1.55）×109/L，兩結果差異無統計學意義。t值為0.190 7，P>0.5。2.2? 樣本在機外模擬K-4500白細胞檢測流程，鏡下觀察到一些碎片，可見白細胞，偶見紅細胞。正常對照標本未觀察到碎片。2.3? R值? 為去除操作過程中的影響因素及白細胞的影響，準確評估此類重癥黃疸肝病患者的紅細胞對儀器檢測白細胞總數的影響，特設定一個指標R值。原樣本的R值=（機測白細胞值-手工檢測白細胞值）×103/紅細胞總數;而已去除血漿。白細胞及血小板的樣本R值=（機測白細胞值-手工空白）×103/紅細胞總數。去除血漿、白細胞及血小板的樣本仍然出現異常直方圖，它的R值（24.89±17.44）與原樣本的R值（25.02±17.50）進行配對t檢驗，差異無顯著性。t值為0.381 4，P>0.05，即此類異常直方圖的出現主要與紅細胞有關。2.4? 樣本組（異常直方圖）與對照組的肝功能生化指標的分析顯示? 樣本組與對照組的總膽紅素（TBil）、白蛋白（Alb）、總膽固醇（Chol）、高密度脂蛋白膽固醇（HDLc）結果進行兩樣本t檢驗，差異有統計學意義，P<0.001;而他們的丙氨酸氨基轉換酶（ALT）、堿性磷酸酶（ALP）差異無統計學意義，P>0.5

3? 結論本文所探討的異常白細胞直方圖的特征是在35 fl～98 fl范圍內的細胞異常增多，其主峰靠近35 fl右側，呈單邊下降。日本Sysmex公司的K-4500血液分析儀的白細胞分析流程是先用溶血素溶解紅細胞，然后依據電阻脈沖原理對白細胞計數分類。白細胞的計數取決于計數池中顆粒的多少。正常人紅細胞膜表面脂蛋白含量極少，加入溶血素后紅細胞很快破壞;而一些有黃疸的肝病患者，紅細胞膜表面脂類異常，具有抵抗溶血素的作用，導致紅細胞溶血不完全。在本實驗中，我們發現紅細胞溶血后仍存在部分紅細胞和紅細胞碎片，這與異常白細胞直方圖的特征基本相符。手工檢測由于使用顯微鏡目測，能夠排除紅細胞及紅細胞碎片的影響，此結果與有關研究相符。體外標本去除高膽紅素血漿后，不能導致儀器檢測白細胞數的改變，此結果與有關研究相符。有研究表示體外去除高膽紅素血漿后，白細胞結果有明顯改變，還有研究提出此異常白細胞直方圖是由于肝病患者血液中大血小板數目異常導致，由于儀器分析原理及試劑的不同，同一份樣本也并非所有血液分析儀都出現因為紅細胞膜抗溶性增強導致的白細胞計數異常增高。肝病高膽紅素病例中，膽紅素與自由基形成膽紅素自由基，紅細胞內的血紅蛋白又為損傷性自由基提供了氧化還原催化劑鐵，所以紅細胞極易受到過氧化損傷。有研究認為膽紅素自由基對紅細胞的損傷作用主要是降解膜骨架收縮蛋白。黃益民等發現自由基可損傷膜的完整性，不僅造成脂疏水羥鏈中不飽和鍵的減少，同時還攻擊其親水頭部及界面區而引起膜磷脂（PL）分于極性，構象和有序變化;自由基造成膜蛋白巰基氧化，二硫鍵和氧化硫基團的形成可直接造成膜蛋白的重構，還引起膜表面蛋白鍥狀缺損的分子結構變化，從而引起紅細胞膜的剛性化，造成紅細胞流變性降低，高膽紅素病例有紅細胞脆性降低。有研究表明慢性肝病紅細胞膜的膽固醇（Ch）/PL之比升高，密度增大。K-4500計數白細胞時用于溶解白細胞的是Sulfolyser-季胺鹽表面活性劑，溶解這種膜結構發生改變的紅細胞時，PL難以與膜分離，紅細胞破壞不完全。本研究中，血清Chol、HDLc與對照組相比顯著性降低，筆者考慮可能HDLc的下降使Ch停留在紅細胞內增多，膜Ch升高。【參考文獻】?[1] 從玉隆，王淑娟.今日臨床檢驗學[M].北京：中國科學技術出版社，1997：41.[2] 鄺泳云.一種異常白細胞直方圖的分析及原因初探[J].上海醫學檢驗雜志，2000，15：15