立枯絲核菌對馬鈴薯侵染過程的顯微結構觀察與胞壁降解酶活性的測定

拓寧,張君,邱慧珍*,張文明,張春紅,劉星,朱靜

(1.甘肅農業大學資源與環境學院，甘肅 蘭州 730070； 2.甘肅省干旱生境作物學重點實驗室，甘肅 蘭州 730070)

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立枯絲核菌對馬鈴薯侵染過程的顯微結構觀察與胞壁降解酶活性的測定

拓寧1，2,張君1，2,邱慧珍1，2*,張文明1，2,張春紅1，2,劉星1，2,朱靜1，2

(1.甘肅農業大學資源與環境學院，甘肅 蘭州 730070； 2.甘肅省干旱生境作物學重點實驗室，甘肅 蘭州 730070)

由立枯絲核菌引起的馬鈴薯莖潰瘍病(黑痣病)已成為限制甘肅省馬鈴薯產業健康發展的主要土傳病害之一。本研究在盆栽試驗條件下將病原菌接種于馬鈴薯植株的莖基部，顯微觀察侵染過程，并測定了胞壁降解酶活性的變化。結果表明,土壤中接種病原菌后，馬鈴薯侵染順序依次為：芽-莖-根-匍匐莖-塊莖；接菌12 h后菌絲開始附著寄主表面，36 h后形成附著胞，48 h后形成侵染墊；電鏡下可見，細胞壁變形、斷裂，細胞膜破損，質體結構變形，細胞質溶解和質壁分離等；纖維素酶(Cx)、多聚半乳糖醛酸酶(PG)和果膠甲基半乳糖醛酸酶(PMG)的活性高達1.7，2.9和3.1 μg/(h·g)，顯著高于對照，尤其是PG和PMG的活性，為對照的兩倍。這些酶活性的提高可能與組織壞死有關。

立枯絲核菌；侵染過程；超微結構；透射電鏡；胞壁降解酶

馬鈴薯(Solanumtuberosum)是位居小麥(Triticumaestivum)、水稻(Oryzasativa)和玉米(Zeamays)之后的第四大糧食作物[1]，近年種植面積和產量持續增長，已成為調整中國種植業結構和農民增收的主要糧食作物之一[2]。甘肅省以其獨特的土壤和氣候特點成為我國重要的馬鈴薯種薯和商品薯基地以及淀粉加工基地，馬鈴薯生產已成為帶動全省農業和農村經濟發展，促進農業增效，農民增收的戰略性主導產業，在保障我省糧食安全和主產區農民收入方面發揮著十分重要的作用[3-6]。而近年來馬鈴薯真菌病害的普遍發生，已成為馬鈴薯產業健康發展的主要限制因子[4-5,7-8]，尤其是由立枯絲核菌(Rhizoctoniasolani)侵染引起的馬鈴薯莖潰瘍病，發病日趨嚴重，對馬鈴薯塊莖產量、商品價值和馬鈴薯產業的可持續發展產生了極大影響[9-11]。因此，探明馬鈴薯立枯絲核菌的致病機理對病害的有效防控具有十分重要的意義。

由立枯絲核菌引起的馬鈴薯莖潰瘍病(又稱莖基腐病、黑痣病、絲核菌潰瘍病和黑色粗皮病)是一種真菌性病害，以帶病種薯和土壤為主要傳播途徑[12-13]。主要危害幼芽、莖基部、匍匐莖和薯塊[14-17]。田間發病的馬鈴薯植株最直觀的癥狀表現為莖潰瘍和莖基部隘縮，感病植株的塊莖表現黑痣。由于立枯絲核菌可侵染馬鈴薯不同部位引起多種癥狀，病理和生理機制可能非常復雜，所以已有的研究主要集中在立枯絲核菌融合群鑒定[7]、生物學特性[18]以及病害的防治技術等方面[19-20]，而對病原菌致病機理的研究鮮有報道。

水稻立枯絲核菌的研究指出，胞壁降解酶的產生是水稻立枯絲核病菌重要的致病因子之一，人工培養產生的胞壁降解酶能引起水稻葉鞘細胞膜透性改變和組織浸解，可損傷組織結構，使細胞壁斷裂，細胞器變形等，在病斑形成和擴展中起重要作用[21-22]。另有研究指出，果膠酶是水稻立枯絲核菌的致病因子，病菌產生果膠酶和纖維素酶的量與致病性密切相關[23]。

為此，我們通過接種病原菌，利用透射電鏡技術，結合植株形態組織學研究的方法，觀察立枯絲核菌侵染馬鈴薯芽和莖等器官的發病進程和侵染結構的形成過程以及立枯絲核菌對馬鈴薯莖基部組織和細胞的破壞作用，同時測定莖基部組織胞壁降解酶的活性，旨在探明馬鈴薯立枯絲核菌可能的致病機理，以及病原菌胞壁降解酶的產生與寄主植物的組織和細胞遭受破壞作用之間的關系，為馬鈴薯莖潰瘍病的防控提供基礎。

1 材料與方法

1.1試驗設計

盆栽試驗于2014年4-9月在甘肅農業大學網室進行，設2個處理：對照，空白不接菌的PDB培養基；處理，接入病原菌的PDB培養基，將病原菌按0.5 g/kg的量均勻拌入滅菌土壤中。采用20 cm×25 cm陶土盆，每盆裝土9 kg，每盆種植4株，每處理種20盆，共80次重復。

供試品種：馬鈴薯“大西洋”，由甘肅省景泰縣條山農場提供；供試菌株：馬鈴薯立枯絲核菌(R.solani)-JT18，由本課題組提供。供試土壤：采自景泰條山農場。

1.2病原菌和供試土壤的準備

將立枯絲核菌菌餅(直徑9 mm)接種于PDB培養基中，于25℃ 黑暗培養3 d，用無菌紗布過濾菌絲，自然曬干稱重后豆漿機打碎備用。

土壤進行高壓滅菌，121℃滅菌30 min，取出后晾2 h，進行第2次滅菌，方法同上，之后自然晾干備用。

1.3樣品采集與處理

分別在苗期取樣5次(播種后23，26，29，32，35 d)，現蕾期取樣1次(50 d)，盛花期1次(65 d)，每處理隨機取樣6株，帶回實驗室后取處理莖基部發病組織1 g用于測定胞壁降解酶，設3次重復。

于播種30 d后取對照健康幼苗莖基部，用無菌水沖洗3遍后，剪成3 cm的小段，放在盛有0.8%的500 mL水瓊脂的盤中，將在PDA培養基上培養3 d的病原菌菌餅(0.9 mm)接種于莖段上，每莖段接種一個菌餅，設6次重復。25℃黑暗離體培養，用于觀察立枯絲核菌侵染結構。

于播種后35,50和65 d取對照莖基部健康組織與處理莖基部發病組織，無菌水洗滌3遍后切成1 mm3大小的組織塊，3%的戊二醛4℃下固定備用，用于觀察立枯絲核菌對馬鈴薯組織和細胞破壞作用的超微結構變化。試驗設3次重復。

每次取樣后觀察馬鈴薯形態特征，記錄病情指數與發病進程。

1.4立枯絲核菌對馬鈴薯侵染過程的觀察

將播種30 d后離體接種培養的馬鈴薯地下莖分別于接種后4，8，12，24，36，48 h取樣，從菌片邊緣橫切制片。以不接菌的健康馬鈴薯苗為對照。將切片用95%酒精和冰醋酸等量混合固定5 min,然后用0.05%的棉蘭染液染色20 min,在光學顯微鏡下觀察并拍照[24]。

1.5立枯絲核菌對馬鈴薯組織和細胞的破壞作用

分別取已處理好對照莖基部健康組織與處理發病組織，經3%的戊二醛4℃下固定后，系列丙酮脫水，Epoin812樹膠包埋，切片染色后用JEM-1230型透射電鏡觀察[25-26]。

1.6立枯絲核菌對馬鈴薯莖基部胞壁降解酶活性的影響

1.6.1胞壁降解酶的提取 參照陳夕軍等[21]的方法，在樣品中加入5 mL 0.25 mol/L 氯化鈉提取液，適量石英砂冰浴研磨。過濾后4℃下15000 r/min離心20 min，取上清液(粗酶液)備用。

1.6.2胞壁降解酶的純化 取上述提取的粗酶液，加入硫酸銨至60%飽和度，4℃下靜置5 h后, 1500 r/min離心20 min，棄上清液。用50 mmol/L醋酸-醋酸鈉緩沖液(pH 5.0)溶解沉淀，并在該緩沖液中于4℃ 下透析2 d，每12 h換1次透析液，純化的酶保存在-18℃下備用。

1.6.3胞壁降解酶的測定 采用紫外—可見光分光光度法測定胞壁降解酶的活性。取上述粗酶液，分別加入纖維素酶Cx(B-1, 4-內切葡聚糖酶)，果膠酶PG(多聚半乳糖醛酸酶)和PMG(果膠甲基半乳糖醛酸酶)的反應底物，利用 DNS法在540 nm處測定OD值，分別計算活性。酶活單位用每h每g樣品在50℃催化底物生成半乳糖醛酸的質量表示(即μg/h·g)[27]。

1.7數據處理

用SPSS 21.0軟件對試驗數據進行統計分析，同一時間不同處理的數據采用Duncan法完成；圖表繪制在Microsoft Excel 2007軟件上進行。

2 結果與分析

2.1馬鈴薯立枯絲核菌的侵染過程

2.1.1馬鈴薯莖潰瘍病發病進程 于播種10 d后開始取樣，觀察到馬鈴薯莖潰瘍病的整個發病進程：馬鈴薯播種后10 d開始發育芽，20 d后芽上出現褐色病斑，該部位生長點壞死，不再繼續生長。感病重者幼芽腐爛死亡，形成芽腐，(圖1-1，1-2)。播種30 d后馬鈴薯全部出苗，莖開始發育，35 d后在莖基部觀察到褐色病斑(莖潰瘍)，感病重者可造成立枯(圖1-3，1-4)。40 d后根系黑褐色菌核或褐色潰瘍，重者腐爛死亡(圖1-5)，此時匍匐莖開始發育。50 d后在匍匐莖上可觀察到黑褐色病斑，病斑處不再發育，頂端不能膨大，不再形成薯塊(圖1-6)。60 d后開始形成薯塊，處理較對照薯塊體積小，數量少。75 d后在薯塊上可觀察到少量黑痣，為黑褐色菌核(圖1-7)。90 d后收獲時，在處理盆栽中發現，成熟塊莖的感病程度不同，輕者表面形成的黑痣量較少，重者形成大量菌核，其大小形狀不規則，呈土壤顆粒狀，且不易被沖洗掉，而菌核下邊的組織完好(圖1-8，1-9)。觀察中統計接種病原菌后植株發病率為72.5%，有黑痣的塊莖占總塊莖數的69.2%。結果表明，立枯絲核菌對馬鈴薯的侵染隨著各器官的發育而發展，侵染順序依次為：芽-莖-根-匍匐莖-塊莖。

2.1.2馬鈴薯立枯絲核菌侵染結構的形成 取播種30 d后的對照健康馬鈴薯莖基部離體培養，觀察其顯微結構，發現接菌4 h后，在培養基表面即可看到菌絲開始沿著莖段表面生長，但顯微結構顯示尚未看到菌絲(圖2-1)。12 h后，在寄主表面可看到菌絲開始附著生長(圖2-2)，24 h后附著菌絲少量結合在一起，開始輕度纏繞，36 h后菌絲頂端開始膨大變粗，分枝增多，分枝再分裂出許多粗短的側枝，開始形成附著胞的雛形。至48 h后，形成侵染結構，菌絲繼續分枝，頂端膨大，分枝再不斷分出許多短粗的側枝，側枝頂端膨大形成附著胞。菌絲分枝間相互交錯，纏繞，逐漸形成網狀結構(圖2-3)，隨后，網狀結構生出的側枝緊密結合在一起，聚集成團，形成侵染墊(圖2-4)。侵染墊緊貼在寄主表面，呈橢圓形。

圖1 馬鈴薯莖潰瘍病發病進程

1：播種20 d后對照馬鈴薯芽；2：播種20 d后處理馬鈴薯芽，出現病斑；3：播種35 d后對照馬鈴薯莖；4：播種35 d后處理馬鈴薯莖，出現病斑；5：播種40 d后處理馬鈴薯根出現褐色潰瘍斑；6：播種50 d后處理馬鈴薯匍匐莖出現病斑；7：播種75 d后處理馬鈴薯形成少量黑痣；8：播種90 d后形成的少量黑痣；9：播種90 d后形成的大量黑痣。
1:Control potato buds after seeding 20 d; 2:Treatment potato buds show scab after seeding 20 d; 3:Control potato stems after seeding 35 d; 4:Treatment potato stems show scab after seeding 35 d; 5:Treatment potato roots show brown ulceration after seeding 40 d; 6:Treatment potato stolons show scab after seeding 50 d; 7:Treatment potato tubers show little black scurf after seeding 75 d; 8:Treatment potato tubers show little black scurf after seeding 90 d; 9:Treatment potato tubers show more black scurf after seeding 90 d.

圖2 馬鈴薯立枯絲核菌侵染結構的形成

1：接菌4 h后組織結構清晰可見(×100)；2：接菌12 h后可見少量菌絲附著(×100)；3：接菌48 h后形成附著胞，菌絲形成網狀結構(×100)；4：網狀結構形成侵染墊(×100)。
1:Organizational structure is clearly visible after inoculation 4 h(×100); 2:Few hyphae were attached after inoculation 12 h (×100); 3:Appressoria formation and hyphae a mesh structure 48 h after inoculation(×100); 4:Infection cushions formed (×100).

2.2立枯絲核菌對馬鈴薯組織和細胞的破壞作用

透射電鏡的結果顯示在菌絲侵入前，細胞結構清晰可見，細胞壁，質膜完整光滑，核質豐富。質體(主要為造粉體)與線粒體等細胞器緊靠細胞壁排列，形態規則正常。菌絲侵入后馬鈴薯莖基部細胞發生了明顯的變化。播種后35 d電鏡結果顯示細胞壁縫隙增大，細胞壁變形，粗細不均(圖3-1，3-2)，菌絲可穿透淀粉粒，淀粉粒體積變大，數量增多(圖3-3，3-4)，并擠壓細胞核，使核縊縮(圖3-5)；播種后50 d結果顯示對細胞器造成了影響，質體結構變形，片層結構消失(圖3-6，3-7)，同時細胞壁斷裂，細胞膜破損(圖3-8)；播種后65 d結果顯示，細胞質溶解，質壁分離，細胞器離壁，結構松散(圖3-9)。

圖3 立枯絲核菌對馬鈴薯組織和細胞的破壞作用

1：對照馬鈴薯細胞壁膜完整(×20000)；2：處理馬鈴薯細胞壁變形(×20000)；3：對照馬鈴薯淀粉粒(×5000)；4：處理馬鈴薯淀粉粒，數量增多，體積變大(×5000)；5：菌絲穿透淀粉粒，并擠壓細胞核(×10000)；6：對照馬鈴薯質體片層結構清晰(×10000)；7：處理馬鈴薯質體變形，片層結構消失(×15000)；8：對照馬鈴薯細胞膜破損(×10000)；9：處理馬鈴薯細胞質溶解，質壁分離(×5000)。
1:The normal structure of cell membrane in control potato (×20000); 2:Deformation of potato cell wall in treatment potato (×20000); 3:Starch grains in control potato (×5000); 4:More and bigger starch grains in treatment potato (×5000); 5:Hyphae penetrate starch grains and squash nuclear (×10000); 6:Plastid lamellar structure is distinct in control potato (×10000); 7:Plastid structural deformation, lamellar structure disappearance in treatment potato (×15000); 8:Cell membranes damage in treatment potato (×10000); 9:Cytoplasm dissolution and plasmolysis (×5000).

2.3立枯絲核菌對馬鈴薯莖基部胞壁降解酶活性的影響

圖4 不同時期纖維素酶(Cx)活性變化

試驗結果表明，處理馬鈴薯莖基部組織的兩種果膠酶，多聚半乳糖醛酸酶(PG)、果膠甲基半乳糖醛酸酶(PMG)和纖維素酶(Cx)的活性均高于對照。

2.3.1立枯絲核菌對纖維素酶活性的影響 如圖4所示，處理馬鈴薯在播種后23 d酶活性達到最高峰，達到1.7 μg/(h·g)，顯著高于對照，至播種后50 d，酶活性略有下降，但始終與對照差異顯著。

2.3.2立枯絲核菌對果膠酶活性的影響 PG活性測定結果如圖5所示，測定時期內處理活性始終顯著高于對照。播種23 d后酶活性最高，達到2.9 μg/(h·g)，高于對照141.67%。略下降后又呈上升趨勢，在32 d時上升到第2個活性高峰，達到2.6 μg/(h·g)，之后呈下降趨勢。

圖5 不同時期多聚半乳糖醛酸酶(PG)活性變化

圖6 不同時期果膠甲基半乳糖醛酸酶(PMG)活性變化

如圖6所示，病原菌對馬鈴薯莖基部PMG活性造成了顯著影響，在播種后23 d處理馬鈴薯莖基部酶活性顯著高于對照，達到3.1 μg/(h·g)，為對照的2倍。在26 d時開始呈下降趨勢，50 d后處理與對照酶活性基本相同，無顯著差異。

根據已有的研究表明，立枯絲核菌侵染馬鈴薯主要是在出苗之前，對芽的侵染帶來出苗率低等問題[15]，因此本實驗在苗期連續取樣，結果顯示，在播種23 d后，處理馬鈴薯莖基部胞壁降解酶活性含量均為最高，分別達到1.7，2.9和3.1 μg/(h·g)，其中PG與 PMG活性為對照的兩倍。說明它們在病斑形成或擴展過程中可能交替或協同發揮作用。

3 討論

本研究通過盆栽試驗，首次觀察到立枯絲核菌對馬鈴薯芽、莖、根等器官的侵染過程，研究表明，病原菌對馬鈴薯各器官的侵染都隨著器官發育而發展，侵染順序依次為：芽-莖-根-匍匐莖-塊莖。病原菌侵染寄主植物后依次形成：芽上的褐色病斑、芽腐，莖基部形成褐色病斑，植株立枯，根系黑褐色菌核或褐色潰瘍，根系腐爛死亡，匍匐莖黑褐色病斑，頂端不再膨大，薯塊上形成黑痣。并發現一般在器官形成10 d左右可觀察到病斑出現。對馬鈴薯莖潰瘍病已有的研究表明，隨著生育期的延長，感病程度增加，器官表面形成菌核后，變為黑褐色病斑，繼而莖基部潰瘍斑造成立枯，最后出現腐爛現象，使芽、莖、根等都不能繼續生長，器官死亡[13,28]。

本研究發現，在立枯絲核菌的侵染過程中，會形成附著胞與侵染墊的侵染結構，但與在小麥，水稻及玉米上已有的研究結果相比有差異。本研究中尚未發現劉雪梅和肖建國[29]研究發現的菌絲圈結構，與陶家鳳[30]的研究結果類似。在形成侵染結構的時間上不同作物也存在差異，本研究表明，在接種24 h后出現侵染結構雛形，36 h后形成附著胞，48 h后形成侵染墊，繼而再通過表皮或直接進入組織。可能在接種36～48 h侵入寄主。陳捷等[31]在玉米上的研究結果顯示，侵染時間在12～24 h之間，也晚于陶家鳳[30]對水稻的研究，該研究表明在接種10～12 h后侵入寄主，16 h即可在寄主細胞中發現立枯絲核菌菌絲。

立枯絲核菌在不同作物上形成侵染結構的種類和入侵時間之間存在差異，可能原因一是立枯絲核菌對不同寄主侵染過程不同，二是立枯絲核菌種類較多，根據陶家鳳[30]的研究表示不同融合群之間入侵時間不同，因此菌株的差異也可能帶來入侵時間與侵染結構的不同。具體原因有待進一步研究。

病原菌接種后馬鈴薯莖基部出現黑褐色潰瘍病斑，電鏡結果顯示，立枯絲核菌侵染馬鈴薯莖基部后，可使莖基部組織結構發生變化，細胞遭受破壞。

胞壁降解酶測定結果表示，在對照健康莖基部組織中均可測到Cx、PG和PMG，但活性較低，可能是正常的馬鈴薯莖基部細胞會產生少量的胞壁降解酶，當接種病原菌后，病原菌產生酶或刺激寄主本身酶活性提高[32]，導致處理后馬鈴薯莖基部胞壁降解酶活性上升，顯著高于對照。35 d后開始呈下降趨勢，至65 d基本與健康組織活性相同，說明此時酶活性相應恢復到正常水平，不再發揮作用，這與玉米莖腐病[32]，黃瓜棒孢葉斑病[33]，水稻紋枯病[21]，馬鈴薯干腐病[2]的研究結果一致。表明病原菌接種后對馬鈴薯植株莖基部細胞胞壁降解酶活性的提高，可能是馬鈴薯莖基部器官和細胞受到破壞的重要原因之一。

這一結論已在其他作物上得到研究證實。陳夕軍等[21]的研究結果表明,水稻紋枯病菌產生的胞壁降解酶能引起水稻葉鞘的細胞膜損傷，并且病斑部胞壁降解酶活性顯著高于健康組織。張紅等[22]的研究結果表明，果膠酶和纖維素酶可使水稻葉鞘細胞超微結構受到嚴重破壞，如細胞壁部分裂解、葉綠體和線粒體損傷等。陳捷等[34]發現玉米胚根經胞壁降解酶處理后，細胞壁變薄、粗細不均，局部變形、斷裂，相鄰細胞壁消失，分離嚴重，細胞器分辨不清，結構松散。這些結果提示病原菌侵染后，胞壁降解酶具有顯著的致病作用。Pierson和Walker[35]的研究推測纖維素酶在分解細胞壁中可能起到重要作用。李寶聚等[36]的研究結果表明在胞壁降解酶對黃瓜葉片細胞的作用過程中，首先是果膠酶降解果膠層，然后是纖維素酶、果膠酶對柵欄組織的分解，最后是纖維素酶作用于薄壁細胞壁，二者協同作用于細胞內部組織。

4 結論

本實驗認為立枯絲核菌侵染馬鈴薯的過程首先是菌絲在土壤中生長，擴展遇到寄主后開始附著在其表面。附著生長48 h后，菌絲形成侵染結構，胞壁降解酶活性上升，導致細胞壁受損，使細胞壁變形、斷裂，從而使菌絲直接進入細胞，侵入后，纏繞并穿透淀粉粒，推測可能利用其中的營養物質不斷繁殖，之后破壞其他細胞器，直至細胞質溶解，細胞器結構松散，細胞凋亡。從器官發育、菌絲附著、侵入細胞到植株感病，這一過程可能會歷時10 d左右完成，因此芽、莖、根等器官發育10 d后表現出病癥。關于立枯絲核菌的致病機理，國內外都有研究，可尚無定論，認為立枯絲核菌的致病機理是復雜的，在病菌侵染的過程中，胞壁降解酶是如何作用的，還需進一步研究。

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Pathogenic mechanism ofRhizoctoniasolanipotato blight Ⅰ Micro-structure observation of the infection process and measurement of cell wall degradation enzyme activity

TUO Ning1，2, ZHANG Jun1，2, QIU Hui-Zhen1，2*, ZHANG Wen-Ming1，2, ZHANG Chun-Hong1，2,LIU Xing1，2，ZHU Jing1，2

1.CollegeofResourcesandEnvironmentalSciences,GansuAgriculturalUniversity,Lanzhou730070,China; 2.GansuProvincialKeyLabofAridlandCropScience,Lanzhou730070,China

Stem canker (black scurf disease) caused byRhizoctoniasolanihas become one of the main soil-borne diseases which limit the development of the potato industry in Gansu province.In this study,R.solanispores were inoculated onto the stem base of potato plants grown in pots.The infection process and activity of potato cell wall degradation enzymes was observed and measured.Results showed that the infection sequence was bud, stem, root, stolon and lastly tuber.Hyphae attached to the surface of the host within 12 h, appressoria formed in 36 h, infection cushions formed in 48 h.Deformation and fracture of the cell wall, damage to the cell membrane, and the effects of plasmolysis such as deformation and fracture of the cell wall, damage to the cell and plastid membranes and the dissolution of cytoplasm were then observed under the electron microscope.The activities of cellulase (Cx), polygalacturonase (PG) and polymethyl-galacturonase (PMG) were 1.7, 2.9 and 3.1 μg/(h·g), respectively, and these values were significantly higher than those of the control group.The activities of PG and PMG were as twice those of the control group.The increased enzyme activity may be related to tissue necrosis.

Rhizoctoniasolani; infection process; ultrastructure; transmission electron microscope; cell-wall-degrading enzymes

10.11686/cyxb2015051

http://cyxb.lzu.edu.cn

2015-01-27；改回日期：2015-03-18

國家自然科學基金(31360500)，國家公益性行業(農業)科研專項(201103004)和國家科技支撐計劃項目(2012BAD06B03)資助。

拓寧(1989-)，女，甘肅蘭州人，在讀碩士。 E-mail:tuoning1989@126.com

*通信作者Corresponding author.E-mail:hzqiu@gsau.edu.cn

拓寧, 張君, 邱慧珍, 張文明, 張春紅, 劉星, 朱靜.立枯絲核菌對馬鈴薯侵染過程的顯微結構觀察與胞壁降解酶活性的測定.草業學報, 2015, 24(12):74-82.

TUO Ning, ZHANG Jun, QIU Hui-Zhen, ZHANG Wen-Ming, ZHANG Chun-Hong, LIU Xing, ZHU Jing.Pathogenic mechanism ofRhizoctoniasolanipotato blightⅠ Micro-structure observation of the infection process and measurement of cell wall degradation enzyme activity.Acta Prataculturae Sinica, 2015, 24(12):74-82.