廣西壯藥薏苡葉甲醇提取物抗氧化活性研究

黃 瑩，程世嘉，李蕓達，馬忠麗，韓光順，李兆疊，黃鎖義

·藥學研究·

廣西壯藥薏苡葉甲醇提取物抗氧化活性研究

黃 瑩a，程世嘉a，李蕓達a，馬忠麗a，韓光順a，李兆疊a，黃鎖義b*

目的 探究薏苡葉甲醇提取物的抗氧化活性。方法 通過采用清除O2-·、清除DPPH·和Fe3+還原力的不同體外抗氧化模型，評價薏苡葉甲醇提取物的抗氧化活性。結果 不同的體外抗氧化模型顯示薏苡葉甲醇提取物具有較強的抗氧化活性。其中當自由基清除率為50%時，薏苡葉甲醇提取物的濃度(IC50)均接近0.6 mg/mL，且清除率與濃度均有一定的正相關性；普魯士藍法測定也提示其對Fe3+具有較強的還原能力。結論 薏苡葉甲醇提取物具有較強的抗氧化性，且在一定的濃度范圍內，其抗氧化能力與濃度呈現良好的量效關系，可為薏苡藥品的臨床應用和開發新型功能食品提供實驗依據。

薏苡葉；甲醇提取物；抗氧化活性

0 引言

薏苡(Coix lacryma-jobi L.var.ma-yuen Stapf)為禾本科(Gramineae)薏苡屬(Coix L)草本植物，其干燥成熟種仁稱為薏苡仁(Coix seed),具有健脾補肺、清熱透濕、利尿消炎、鎮痛排膿等功效[1]。目前研究表明，薏苡中含有三酰甘油、薏苡內酯、薏苡多糖、甾醇類化合物、茚化合物、三萜類化合物、生物堿類化合物及多種氨基酸和微量元素等[2]。薏苡仁具有抗腫瘤、免疫調節、降血糖血鈣、降壓、抗病毒及抑制胰蛋白酶等多方面的藥理活性[3]，且其抗腫瘤活性物質主要在甲醇提取物中[4-5]。經文獻調研，目前國內外對于薏苡的研究主要集中于薏苡仁，對薏苡非種子部位的相關研究很罕見，限制了薏苡的深度開發和利用。由此，本試驗采用超氧陰離子、DPPH自由基和Fe3+還原力的不同體外抗氧化模型，以其還原力和清除自由基能力為指標，評價薏苡葉甲醇提取物的抗氧化活性，以期進一步優化薏苡的綜合利用價值，為加快薏苡藥品的臨床應用和開發新型功能食品提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 儀器 高速萬能粉碎機(FW100)(天津泰斯特儀器有限公司)，電子天平(上海民橋精密科學儀器有限公司)，電熱式恒溫水浴鍋(箱)(江蘇金壇宏凱儀器廠)，循環水真空抽氣泵(上海嘉鵬科技有限公司)，架盤藥物天平(HC·TP12A-1)(北京醫用天平廠)，臺式離心機(上海安亭科學儀器廠)，755B紫外可見分光光度計(上海精科)，722N可見分光光度計(上海精科)，旋轉蒸發器(RE-52AA)(上海安亭實驗儀器有限公司)。

1.1.2 試藥 廣西壯藥薏苡葉，采集于廣西百色市西林縣。甲醇、鄰苯三酚、三羥甲基氨基甲烷、鹽酸、無水乙醇、十二水合磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、三氯乙酸(TCA)、三氯化鐵、鐵氰化鉀及七水合硫酸亞鐵等試劑均為分析純；DPPH(美國Signa 公司)；試驗用水為蒸餾水，所用儀器均經自來水清洗后蒸餾水潤洗晾干備用。

1.2 試驗方法

1.2.1 提取物的制備 稱量薏苡葉干品粉末80 g置于蒸餾燒瓶中，按料液比1∶80加入甲醇，恒溫70 ℃下水浴加熱1.5 h，抽濾2次，合并2次濾液。濾液利用旋轉蒸發儀減壓濃縮后制成浸膏備用。

1.2.2 清除O2-·能力 采用鄰苯三酚自氧化法[6]進行測定。具體方法如下：取0.5 mol/L、pH 8.2的Tris-HCl緩沖液4.5 mL于干燥具塞比色管中，置于25 ℃水浴中預熱20 min，分別加入不同濃度的待測品0.2 mL,后均加入0.3 mmol/L鄰苯三酚(由10 mmol/L HCl制)0.3 mL，混勻后25 ℃水浴中準確反應4 min，立即加入10 mmol/L HCl 2滴終止反應，緩沖液調零，在320 nm處測定吸光度A。其清除率計算公式：清除率(%)=[1-(A1-A2)/A0]×100%(其中A0為加鄰苯三酚但不加樣品時的吸光度；A1為加樣品和鄰苯三酚時的吸光度；A2為加樣品不加鄰苯三酚時的吸光度)。

1.2.3 清除DPPH·能力 按照文獻[6]方法進行測定。DPPH·是一種穩定的自由基，與抗氧化劑發生反應，顏色發生變化，由深紫色變為淡黃色，可以用紫外可見分光度法定量測定。取0.5 mL新配置的DPPH溶液[c(DPPH)=6×10-4mol/L]置于10 mL的具塞比色管中，然后加入不同濃度的樣品溶液1 mL，無水乙醇定容至5 mL，室溫暗光下反應30 min，以無水乙醇調零，在517 nm處測定其吸光度A。以高濃度逐漸稀釋的方式檢測不同濃度樣品對自由基的清除率，以自由基清除率為50%時，樣品的濃度(IC50)來衡量樣品對自由基的清除能力。IC50越小，表明樣品清除DPPH·的能力越強。其清除率計算公式：清除率(%)=[(A1-A2)/A1]×100%(其中A1為反應時間t=0 min時空白吸光度，A2為反應時間t=30 min時的吸光度)。

1.2.4 還原Fe3+能力 抗氧化劑的還原力與其抗氧化活性之間存在聯系，抗氧化劑是通過自身的還原作用給出電子而清除自由基的，還原力越強，抗氧化性越強，藥物還原力的大小在一定程度上反映了其預防性抗氧化功能的強弱[7]。因此，可通過測定還原力來說明抗氧化活性的強弱。采用普魯士藍法[7]進行測定。取1 mL樣液于試管中，依次加入2.5 mL 0.2 mo1/L pH 6.6的磷酸緩沖溶液和2.5 mL 1%鐵氰化鉀[K3Fe(CN)6]溶液，于50 ℃水浴中保溫20 min后快速冷卻，再加入2.5 mL 10%三氯乙酸溶液，以3 000 r/min離心10 min，取上清液2.5 mL，依次加入2.5 mL蒸餾水、0.5 mL 0.1%三氯化鐵溶液振蕩搖勻，靜置10 min后在700 nm下檢測其吸光度。

2 結果與分析

2.1 清除O2-·能力 見圖1。從圖1中可知，當O2-·清除率為50%時，樣品的濃度(IC50)接近0.6 mg/mL，濃度較小，說明薏苡葉甲醇提取液對O2-·具有較好的清除活性，且在試驗設置濃度范圍內，隨著提取液濃度的增加，薏苡葉甲醇提取液對O2-·的清除作用增強。

圖1 超氧自由基清除率

2.2 清除DPPH·能力 見圖2。從圖2中可知，在試驗設置濃度范圍內，隨著提取液濃度的增加，對DPPH·的清除率呈上升趨勢，當DPPH·清除率接近50%時，樣品的濃度(IC50)僅為0.6 mg/mL，濃度很小，表明薏苡葉甲醇提取物清除DPPH·的能力比較強。

2.3 還原Fe3+能力 見圖3。由圖3可知，在700 nm處，隨著薏苡葉甲醇提取物濃度的增加，吸光度值呈遞增趨勢，對Fe3+還原能力增強，且在試驗設置的濃度范圍內薏苡葉甲醇提取物還原力與其濃度大小呈正相關。

圖2 DPPH自由基清除率

圖3 還原Fe3+能力吸光度值

3 討論

人體的許多疾病和組織損傷等與體內的氧化應激反應有關，大量資料顯示,炎癥、腫瘤、衰老、血液病，以及心、肝、肺、皮膚等各方面疑難疾病的發生機制與體內自由基產生過多或清除自由基能力下降有著密切的關系[8]。眾多研究表明，自由基的清除是抗氧化劑發揮抗氧化作用的主要機制[9]。因此，從天然產物中尋找高效、穩定、低毒的抗氧化劑成為目前研究的一個熱點，其中藥用植物提取物是天然抗氧化劑的一個重要來源；而良好的抗氧化劑同樣具有良好的還原能力，因此可以通過測定抗氧化物質的還原能力來間接評價其抗氧化活性。在測定樣品的抗氧化活性時，需要采用多種方法來綜合評價分析樣品的抗氧化活性[10]。因此，本研究采用清除O2-·、清除DPPH·和Fe3+還原力的不同體外抗氧化模型對薏苡葉甲醇提取物的抗氧化活性進行研究。

本研究結果表明，當O2-·和DPPH·清除率為50%時，薏苡葉甲醇提取物的濃度(IC50)均接近0.6 mg/mL，濃度較小，說明薏苡葉甲醇提取物對兩種自由基具有較強的清除能力；普魯士藍法測定也提示其對Fe3+具有較強的還原能力；因此說明薏苡葉甲醇提取物具有較強的抗氧化活性，且各抗氧化模型均提示，在一定的濃度范圍內，薏苡葉甲醇提取物的抗氧化能力與其濃度呈現良好的量效關系。體外抗氧化活性試驗結果雖不一定能完全代表體內清除自由基的作用，但對薏苡葉藥物功效的初步篩選仍具有重要參考價值，可為優化薏苡非種子部位的資源利用提供實驗依據，也可為加快薏苡藥品的臨床應用和開發新型功能食品提供線索。目前研究發現，植物提取物的抗氧化活性成分主要有多糖類化合物、黃酮類化合物、多酚類化合物、生物堿類、皂苷類、維生素類、多肽類等[11]，薏苡葉甲醇提取物的抗氧化活性可能與薏苡中含有薏苡多糖、生物堿類化合物等活性成分有關，但有關薏苡葉甲醇提取物抗氧化作用的具體有效活性成分及詳細作用機制還有待進一步研究。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].北京:中國醫藥科技出版社,2010:353-354.

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Antioxidation activities of methanol extracts from Guangxi′s zhuang medicine coix leaves

HUANG Yinga,CHENG Shi-jiaa,LI Yun-daa,MA Zhong-lia,HAN Guang-shuna,LI Zhao-diea,HUANG Suo-yib*

(a.College of Clinical Medicine,b.College of Pharmacy,Youjiang Medical College for Nationalities,Guangxi 533000,China)

Objective To study the antioxidation activities of methanol extracts from Coix leaves.Methods Several differentinvitroantioxidant models,which included scavenging of DPPH·,O2-· and Fe3+reducing power,had been used to evaluate the antioxidant activity of methanol extracts from Coix leaves.Results The differentinvitroantioxidant models showed that methanol extracts from Coix leaves had strong antioxidation activities.When the free radical scavenging rate was 50%,the concentration of methanol extracts from Coix leaves(IC50)was close to 0.6 mg/mL,and the scavenging rate was positively correlated with the concentration;The result of Prussian blue method also showed that methanol extracts from Coix leaves had strong ability to reduce Fe3+.Conclusion Methanol extracts from Coix leaves have strong antioxidant activity.The antioxidization effect and the concentration show good concentration-response relationship in a certain range.The result can provide experimental basis to the clinical application of Coix medicines and the development of new functional food.

Coix leaves;Methanol extracts;Antioxidation activities

2014-06-05

右江民族醫學院a.臨床學院，b.藥學院，廣西 533000

國家自然科學基金資助項目(81360684)；廣西自然科學基金資助項目(2011GXNSFA018046)；廣西中醫藥科技專項資助課題(GZKZ 10-128)；廣西中醫藥管理局課題(gzzc1047)；廣西醫學科學實驗中心開放基金專項資助項目(KFJJ2011-04)

10.14053/j.cnki.ppcr.201501017

*通信作者