抗宮炎片中齊墩果酸和熊果酸的含量測定

姚小玲

湘雅博愛康復(fù)醫(yī)院，湖南 長沙 410151

抗宮炎片中齊墩果酸和熊果酸的含量測定

姚小玲

湘雅博愛康復(fù)醫(yī)院，湖南 長沙 410151

目的：測定不同生產(chǎn)廠家生產(chǎn)的抗宮炎片中齊墩果酸和熊果酸的含量，為抗宮炎片質(zhì)量控制和評價提供依據(jù)。方法：采用高效液相色譜法。結(jié)果：不同廠家抗宮炎片中齊墩果酸和熊果酸含量存在較小差異。結(jié)論：該方法可用于抗宮炎片中齊墩果酸和熊果酸的含量測定。

抗宮炎片；齊墩果酸；熊果酸；HPLC

抗宮炎片由廣東紫珠干浸膏、益母草干浸膏和烏藥干浸膏等成分組成。具有清濕熱、止帶下的作用，臨床主要用于濕熱下注所致的帶下病，如宮頸糜爛、白帶量增多等。研究發(fā)現(xiàn)，紫珠中含有黃酮、酚酸、三萜和苯丙素等類別化合物［1－4］，黃酮是其抗宮頸炎有效成份［5］，三萜主要含齊墩果酸和熊果酸等成分［6－7］，有良好的護肝作用和對肝臟的抗脂質(zhì)過氧化 （LPO）作用［8－9］；益母草主要含有生物堿、黃酮和二萜類等成分，總生物堿具有明顯的抗炎鎮(zhèn)痛作用和改變血流動力學及血液流變學作用［10－11］；烏藥主要含有生物堿和萜類成分，生物堿具有較好的抗菌和抗病毒作用［12－13］。本實驗采用高效液相色譜法對抗宮炎片中齊墩果酸和熊果酸的含量進行測定，為抗宮炎片的質(zhì)量評價提供依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Agilent1260高效液相色譜儀、G1311B四元泵（帶在線脫氣機）、G4212B DAD陣列二極管檢測器、Agilent漢化版色譜工作站；迪馬Diamonil C18（250mm×4.6mm，5μm）色譜柱；電子分析天平（島津AUW120D）；超聲波中藥處理機（LC－350A）。

1.2 試劑 齊墩果酸對照品（批號：110709－201206）、熊果酸對照品（批號：110742－201220）由中國藥品生物制品檢定研究院提供；甲醇、乙腈為色譜純 （天津賽福瑞科技有限公司）；水為重蒸水；其它試劑均為分析純。

1.3 試藥 抗宮炎片分析樣品購置于湖南懷化龍源藥業(yè)，分別為2個廠家8個批次的樣品，編號見表3。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：迪馬Diamonil C18（250mm× 4.6mm，5μm）；流動相：乙腈－水（92∶8）；流速：0.5m l／min；進樣量：10μl；檢測波長210nm。上述條件下齊墩果酸和熊果酸基線基本能夠分離，峰形對稱，色譜圖見圖1。

2.2 對照品溶液的制備 分別精確稱取齊墩果酸4.0mg、熊果酸4.4mg于10ml容量瓶，用甲醇溶解并定容至刻度，即得0.40mg／m l齊墩果酸儲備液和0.44mg／ml熊果酸儲備液。

2.3 供試品溶液的制備 取抗宮炎片1片，去包衣，干燥碾碎，稱取樣品粉末（過40目篩）0.2g于10ml容量瓶中，加入甲醇約8ml，放入超聲波中藥處理機中處理45min，取出，放至室溫，用甲醇定容至刻度，進樣前用微孔濾膜（0.45μm）過濾，得到供試品溶液。

2.4 線性關(guān)系考察 分別精密量取0.1、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0ml的齊墩果酸和熊果酸于10ml容量瓶，用甲醇定容至刻度，即得4.0、20.0、40.0、60.0、80.0、100.0、120.0μg／m l齊墩果酸系列濃度校正液和4.4、22.0、44.0、66.0、88.0、110.0、132.0μg·m l－1系列濃度校正液，按照2.1色譜條件進樣，以濃度為橫坐標，面積響應(yīng)值為縱坐標，分別得齊墩果酸和熊果酸的標準回歸方程：Y＝5.0672X－1.5431（R＝0.9997）；Y＝4.1054X＋1.0553（R＝0.9995），表明齊墩果酸和熊果酸分別在0.0400～1.2000μg、0.0440～1.3200μg范圍內(nèi)線性良好。

2.5 精密度試驗 吸取同一對照品溶液與同一供試品溶液各10μl，分別連續(xù)7次進樣，測定峰面積，對照品與供試品峰面積的RSD分別為0.69%和0.55%。

2.6 穩(wěn)定性實驗 取同一供試品溶液，分別于0、1、2、4、8、16、24h時段進樣，其峰面積的RSD為1.38%，結(jié)果表明樣品溶液24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 重復(fù)性實驗 取同一批次的抗宮炎片7份，精密稱取0.2g，按照“2.3項”處理，“2.1項”色譜條件進樣，測得齊墩果酸和熊果酸含量分別為：0.1116mg／g，0.2209mg／g，RSD（n＝7）分別為1.87%和1.35%。

2.8 加樣回收率試驗 精密稱取同批次已知含量的抗宮炎片6份，分別置于10m l容量瓶中，并加入齊墩果酸和熊果酸，按照“2.3項”處理、“2.1項”色譜條件進樣分析，測定齊墩果酸和熊果酸的含量，計算回收率見表1、2。

2.9 樣品含量測定 精確稱取兩個廠家的抗宮炎片，每個廠家5批，每批取5個平行樣，按照“2.3項”進行樣品處理、“2.1項”色譜條件進樣分析，用外標法分別對齊墩果酸和熊果酸進行含量測定，結(jié)果見表3。

圖1 A對照品 B樣品 1齊墩果酸 2熊果酸

表1 抗宮炎片中齊墩果酸的精密度和回收率結(jié)果

表2 抗宮炎片中中熊果酸的精密度和加樣回收率結(jié)果

表3 抗宮炎片樣品齊墩果酸和熊果酸的含量

3 討論

實驗過程中試用了不同的流動相，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，流動相為乙腈－水 （92∶8）時峰形對稱，出峰時間適宜，雜質(zhì)峰對被檢測峰干擾小。因此，實驗采用乙腈－水 （92∶8）作為流動相。

實驗采用試用無水乙醇和甲醇作為超聲提取溶劑，超聲提取45min，齊墩果酸和熊果酸基本能提取完全，乙醇作為提取溶劑時有較強的溶劑峰，故本實驗采用甲醇作為提取溶劑。

藥典規(guī)定，抗宮炎片質(zhì)量標準以廣東紫珠中連翹酯苷B和金石蠶苷為標志物來評價其質(zhì)量，固定相為十八烷基鍵合硅膠，以乙腈－0.5%磷酸溶液（18∶82）為流動相［14］。此色譜條件極易讓弱極性物質(zhì)在色譜柱上形成強吸附而降低柱效，而采用本實驗色譜條件則不會出現(xiàn)以上狀況，借此作為抗宮炎片質(zhì)量評價方法有一定的意義。

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R284.1

A

1007－8517（2015）01－0016－02

2014.09.28）

國家臨床重點專科建設(shè)經(jīng)費資助（2013544）。

姚小玲（1980－），女，藥劑師，主要從事醫(yī)院藥房工作和管理。E-mail：yxl327＠163.com