糖尿病腎病動物模型建立的體會

代招弟

內蒙古民族大學附屬醫院，內蒙古 通遼 028000

糖尿病腎病動物模型建立的體會

代招弟

內蒙古民族大學附屬醫院，內蒙古 通遼 028000

目的：建立糖尿病腎病（DN）大鼠模型。方法：取Wistar大鼠24只，隨機分為空白對照組（12只）和模型組（12只）。模型組采用單純腹腔注射1%鏈脲佐菌素（STZ）懸液，復制Wistar大鼠糖尿病腎病動物模型。結果：單純腹腔注射1%鏈脲佐菌素懸液4周可成功復制糖尿病腎病大鼠動物模型。結論：采用單純腹腔注射鏈脲佐菌素方法復制糖尿病腎病大鼠模型，該方法具有簡便、容易掌握，短期內可誘導出大量滿意的動物模型。

鏈脲佐菌素懸液；糖尿病腎病；動物模型

1 儀器與藥物

1.1 儀器 SPS401F型電子天平（北京西杰公司）；GT10－2臺式高速離心機 （北京時代北利儀離心機儀器有限公司）；PRONTO－E全自動生化分析儀（意大利奔騰）；強生血糖儀 （美國強生公司）；強生血糖試紙 （美國強生公司）；HY－612半自動尿液化學分析儀（深圳市匯研科創生物科技有限公司）；HMIAS－2000彩色病理圖文分析系統（北京杰偉世視音頻設備有限公司）；KD－BM生物組織包埋機（浙江省華市科迪儀器設備有限公司）；KD－3358電腦超薄切片機 （浙江金華科迪儀器設備有限公司）。

1.2 試劑 鏈脲佐菌素（streptozotocin C8H15N3O7，美國Sigma公司）；檸檬酸 （北京東方博愛生物科技有限公司）；檸檬酸鈉 （北京東方博愛生物科技有限公司）；肌酐 （批號：A70333，上海撫生生物科技有限公司）；尿素試劑盒（批號：A64247，上海撫生生物科技有限公司）；其余試劑均為分析純。

1.3 STZ懸液的配制 檸檬酸緩沖液母液的配法：檸檬酸1.9214g加入二蒸水100ml配成A液，檸檬酸鈉2.9410g加入二蒸水100ml配成B液。1%鏈脲佐菌素緩沖液的配制：將A、B液按比例（1∶1.32）均勻混合，其pH值為4.19～4.22，將此緩沖液配成1%鏈尿佐菌素懸液。

1.4 試驗動物 Wistar大鼠，由吉林大學白求恩基礎醫學院實驗動物中心提供，衛生許可生產號：SCXK－（吉）2007－0003。

2 方法

2.1 造模方法及分組［1－2］選雄性Wistar大鼠24只，體重250～280g，隨機分為空白對照組（12只）和模型組（12只）。將模型組禁食12h后，用0.1mol／L檸檬酸－檸檬酸鈉緩沖液將鏈脲佐菌素配成1%的懸液，按56mg／kg體重單次腹腔注射1%鏈脲佐菌素懸液復制糖尿病腎病模型。腹腔注射66h后開始禁食，不禁水，由尾靜脈取血測定血糖，血糖≥16.8mmol／L者，為糖尿病造模型成功。

2.2 觀察與檢測指標 觀察情況：每天觀察大鼠的一般精神狀態、毛色、進食、飲水及尿量等，模型建立成功后，每兩周測定一次大鼠的體重，并加以記錄。空腹血糖：模型建立成功后，分別在第二、第四周末斷尾取血，采用血糖儀測定一次血糖。尿糖：模型建立成功后，分別在第二、第四周末，將大鼠放入洗凈的代謝籠內，收集尿液，用自動尿液分析儀測定。第四周末 （腹主動脈血）采用生化分析儀檢測。

2.3 統計方法 采用Excel軟件進行數據處理，數據用均數±標準差 （）表示，采用t檢驗，P＜0.05表示差異有統計學意義。

3 結果

3.1 一般表現 空白對照組大鼠一般精神狀態、毛色、飲食及尿量均正常。模型組大鼠于單次腹腔注射1%鏈脲佐菌素緩沖液3天后，即出現多食、多飲、多尿以及消瘦的狀況。在實驗期內，模型組大鼠體重一直下降，而空白對照組大鼠體重一直增加，見表1。

表1 糖尿病腎病大鼠體重的變化 （）

表1 糖尿病腎病大鼠體重的變化 （）

與空白對照組比較，★★P＜0.01。

組別 例數 第四周體重（g ）空白對照組12 355.4±30.8模型組 12 209.8±26.7★★

3.2 血糖變化 在本次實驗過程中，空白對照組大鼠的血糖始終維持在5mmol／L，范圍以內。模型組造模后第二、第四周末血糖明顯高于對照組（P＜0.01），見圖2。空白對照組大鼠尿糖一直陰性，而模型組大鼠尿糖幅度很大，一直處于＋＋＋～＋＋＋＋之間。

表2 糖尿病腎病大鼠血糖的變化 （）

表2 糖尿病腎病大鼠血糖的變化 （）

注：與空白對照組比較，▲▲P＜0.01。

組別 例數 第二周血糖（mmol／L）第四周血糖（mmol／L）空白對照組12 5.48±0.81 5.29±0.73模型組 12 21.96±2.06▲▲ 23.84±2.98▲▲

3.3 肌酐及血尿素氮 造模4周后，模型組大鼠血肌酐、血尿素氮與空白對照組大鼠同期比較顯著升高（P＜0.01），見表1。

表3 大鼠Cre、BUN變化

3.4 腎組織切片 由圖3、4可知，空白對照組大鼠腎小球、腎小管結構均正常，腎小管上皮細胞完整，未見管型變。由圖3、4可知，模型組大鼠部分腎小球肥大、增生，腎小球內毛細血管充血，與之相連近曲小管上皮水腫、空泡變，腎間質血管充血顯著。

4 討論

慢性腎功能衰竭 （CRF）是嚴重危害人類健康的多發病之一，其發病率呈逐年上升的趨勢，是世界性難題之一［2］。現代醫學領域中有很多糖尿病腎病動物模型的方法，如手術切除胰腺法、藥物破壞胰島素β細胞法及藥物與手術 （5／6腎臟切除）聯合制作法等，其中筆者選用單次大量腹腔注射1%鏈脲佐菌素緩沖液誘導速發型糖尿病模型［2］。本次試驗結果證明，單純腹腔注射鏈脲佐菌素溶液后4周時可成功的造成糖尿病腎病大鼠模型。該方法簡便、容易掌握，短期內可誘導出大量滿意的動物模型。

［1］中華醫學會糖尿病學分會.2007年版中國2型糖尿病防治指南［J］.中華流行病學雜志，2008，24（2）：22－23.

［2］王春艷.鏈脲佐菌素誘導大鼠2型糖尿病模型的建立 ［J］.吉林醫藥學院學報，2010，2（1）：22.

R587.2

A

1007－8517（2015）01－0113－02

2014.09.22）