HPLC法測定三拗魚龍合劑中橙皮苷的含量

王 虎 任路路任 瑩 許廣華 司 永 李小偉

安徽省太和縣中醫院，安徽 太和 236607

HPLC法測定三拗魚龍合劑中橙皮苷的含量

王 虎 任路路*任 瑩 許廣華 司 永 李小偉

安徽省太和縣中醫院，安徽 太和 236607

目的：建立三拗魚龍合劑中橙皮苷的含量測定方法。方法：采用HPLC法測定，色譜柱為碳十八烷基硅烷鍵合硅膠柱；流動相為乙腈－0.4%磷酸水溶液（20∶80）；檢測波長：283nm；流速：1.0ml／min；柱溫：30℃。結果：橙皮苷在13.91～222.6μg／ml范圍呈良好的線性關系，平均回收率100.11%，RSD＝1.37%（n＝6）。結論：該方法簡單、準確，重復性、穩定性良好，精密度高，結果可靠，可作為三拗魚龍合劑質量控制的方法。

三拗魚龍合劑；橙皮苷；HPLC

三拗魚龍合劑由魚腥草、浙貝母、陳皮等藥味組成，為太和縣中醫院醫院制劑。具有宣肺平喘、止咳消痰的功效，用于急、慢性支氣管炎。作為醫院制劑，原標準中無含量測定項。為了更好的控制醫院制劑的質量，使本制劑療效穩定可控，本文采用高效液相色譜法測定陳皮中橙皮苷的含量，該法靈敏度高，專屬性好，操作簡單，重復性好，可作為三拗魚龍合劑質量控制的方法。

1 儀器與材料

1.1 儀器 安捷倫LC－1220型高效液相色譜儀；紫外檢測器；101－1A型數顯恒溫干燥箱（上海光地儀器設備有限公司）；AL－120型電子天平（瑞士梅特勒－托利多儀器公司）；HS－180型超聲波清洗機（寧波海曙金蘭教儀科研究所）。

1.2 試藥 三拗魚龍合劑（批號：20140417、20140712、20140906，太和中醫院中藥制劑室）；橙皮苷對照品（批號：110721－201316，中國藥品生物制品檢定所）；乙腈為色譜純；水為純化水；其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱：依利特Hypersil ODS（4.6mm×250mm，5μm）；流動相：乙腈－0.4%磷酸水溶液（20∶80）；檢測波長：283nm；流速：1.0ml／min；柱溫：30℃；進樣量：20μl。理論塔板數以橙皮苷計應不低于4000，分離度大于1.5。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取橙皮苷對照品適量，加甲醇－0.4%磷酸水溶液（1∶1）制成每1ml含50μg的溶液。

2.3 供試品溶液的制備［1］密量取本品5ml，置25ml量瓶中，加甲醇20ml，超聲處理（功率100W，頻率40kHz）20min，放冷，用甲醇定容，搖勻，離心（3000r／min，10min），精密移取上清液5m l置10m l量瓶中，用0.4%磷酸稀釋至刻度，搖勻，過0.45μm濾膜，即得。

2.4 干擾試驗 按處方比例及生產工藝制備不含陳皮的三拗魚龍合劑，再按供試品溶液的制備方法制成陰性對照溶液。取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液按上述色譜條件測定，記錄色譜圖。結果表明，陰性對照溶液在與橙皮苷對照品相同保留時間處未顯色譜峰，故認為無干擾。見圖1。

2.5 線性關系考察 精密稱取橙皮苷對照品11.13mg，置25m l量瓶中，用甲醇定容，作為儲備液。精密移取儲備液5m l，置10m l量瓶中，用甲醇－0.4%磷酸溶液（1∶1）稀釋至刻度，搖勻，作為2號對照品溶液；同法制成3、4、5號對照品溶液。分別精密吸取各對照品溶液20μl，按上述色譜條件進樣。以對照品的進樣量為橫坐標 （X），峰面積為縱坐標（Y），得回歸方程：Y＝1.945×10－9X－0.002225532，R＝0.9996。結果表明，橙皮苷在13.91～222.6μg／m l范圍內線性關系良好。

2.6 精密度試驗 取“2.5”項下3號對照品溶液，按上述色譜條件連續進樣6次，測定峰面積。結果橙皮苷峰面積RSD為0.92%。結果表明儀器精密度良好。

2.7 重復性試驗 取同一批號（20140417）樣品6份，分別按 “2.3”項下方法制備供試品溶液，并按上述色譜條件進樣測定其含量。結果橙皮苷平均含量為0.4856mg／m l，RSD為1.34%，結果表明方法重復性良好。

2.8 穩定性試驗 取同一批號（20140417）供試品溶液，室溫下放置，按上述色譜條件，分別于配制后0、2、4、6、8、12、24 h進樣測定，記錄橙皮苷峰面積。結果峰面積RSD為1.76%。結果表明供試品溶液在24h內基本穩定。

2.9 加樣回收率試驗［2－3］取已知含量的同一批號（20140417）樣品6份，分別精密加入濃度為0.4452mg／ml橙皮苷對照品溶液1.0 ml，按“2.3”項下的制備方法制備供試品溶液，按上述色譜條件測定其含量，計算回收率。結果見表1。2.10 樣品含量測定 取樣品3批，按所述方法測定，以外標法計算含量。結果見表2。

表1 橙皮苷加樣回收率試驗結果

表2 樣品測定結果

3 結果與討論

3.1 流動相的選擇 HPLC法測定橙皮苷含量的文獻［4－7］較多，常采用甲醇－水系統和乙腈－水系統。由于峰形較差，常會在流動相中添加一定比例酸改善峰形。試驗考察了甲醇－0.4%醋酸水溶液（35∶65）、甲醇－0.4%磷酸水溶液（20∶80）、乙腈－0.4%磷酸水溶液（20∶80）等流動相，發現乙腈－0.4%磷酸水溶液（20∶80）峰形較為滿意，且保留時間適宜、分離度良好，故選擇此條件作為測定條件。

3.2 樣品處理 分別對樣品超聲10、15、20、25min后進樣考察，結果顯示超聲20min含量高于15min，而超聲25min被測組分含量幾乎不再增加，故確定超聲時間20min即可。由于定容后樣品過濾較困難，試驗時間長，故選擇離心法除去雜質。且離心后與直接過濾樣品的色譜峰面積相比較，無明顯差異。樣品用甲醇處理后直接進樣，色譜峰前沿明顯，分離度差。用0.4%磷酸稀釋后進樣，峰形較為滿意。故樣品處理后，故加入適量磷酸以調整峰形。

采用HPLC法測定三拗魚龍合劑的含量，操作簡便，結果準確可靠，重現性好，可用于該品種的質量控制和穩定性考察，為三拗魚龍合劑質量標準的建立提供依據。

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［4］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典 （一部）［S］.北京：中國醫藥科技出版社，2010：176－177.

［5］孫冬梅，畢曉黎，胥愛麗，等.HPLC法測定不同產地陳皮藥材中橙皮苷的含量［J］.中國實驗方劑學雜志，2009，15（11）：1－3.

［6］焦志峰，遲棟.HPLC法測定香砂六君合劑中橙皮苷的含量［J］.光明中醫，2011，26（4）：695－696.

［7］仇雅靜，朱梓文.HPLC法測定通腸理氣合劑中芍藥苷和橙皮苷的含量［J］.中國藥事，2012，26（12）：1366－1368.

R284.1

A

1007－8517（2015）01－0044－02

2014.10.12）

王虎（1971－），男，主管中藥師，主要從事中藥炮制與制劑工藝的研究。E－mail：157914824＠qq.com

任路路（1984－），男，主要從事中藥新劑型的研究。E－mail：lubyhui68＠163.com