蒙醫五味甘露浴對佐劑性關節炎大鼠血清白介素的影響

陳英松 水 玲 烏云格日樂 吳七柱

內蒙古醫科大學，內蒙古 呼和浩特 010110

蒙醫五味甘露浴對佐劑性關節炎大鼠血清白介素的影響

陳英松 水 玲 烏云格日樂 吳七柱

內蒙古醫科大學，內蒙古 呼和浩特 010110

目的：觀察蒙醫五味甘露浴對佐劑性關節炎（AA）大鼠的血清IL－1β、IL－2、IL－6和TNF－a含量的影響。方法：將40只SD雄性大鼠隨機分為四組，每組10只。模型組、來氟米特組、五味甘露藥浴組三組大鼠進行造模，無菌條件下在右后足趾部注射0.1ml的CFA（完全弗氏佐劑）致炎，正常對照組注射同劑量的生理鹽水。造模后第3d開始對五味甘露藥浴組進行1次／d，30min／次，連續藥浴治療15d，溫度為40±2℃。正常對照組和模型組做溫水浴對照，來氟米特組以0.17g／kg劑量灌胃來氟米特治療15d。采用ELISA法檢測大鼠血清白介素含量。結果：模型組與正常對照組相比血清IL－1β、IL－2、IL－6和TNF－a的含量明顯升高（P＜0.05），來氟米特組和五味甘露浴組與模型組相比血清IL－1β、IL－2、IL－6和TNF－a的含量明顯降低（P＜0.05），蒙醫五味甘露藥浴組與來氟米特組比血清白介素顯著降低，但無統計學意義（P＞0.05）。結論：蒙醫五味甘露藥浴可通過調節AA大鼠血清白介素IL－1β、IL－2、IL－6和TNF－a的含量，起到免疫調節作用。

蒙醫；五味甘露浴；AA大鼠；白介素

蒙醫在千百年的應用形成了簡、便、驗、廉且療效獨特等優點。五味甘露浴是以小白蒿、水柏枝、麻黃、杜鵑葉、刺柏等五種藥物組成，臨床應用治療RA等風濕病方面具有一定的療效。本研究采用CFA誘導的佐劑性關節炎模型大鼠，檢測治療前后血清IL－1β、IL－2、IL－6和TNF－a的含量的影響，探討蒙醫五味甘露浴的免疫調節機制。

1 材料

1.1 實驗動物 清潔級雄性SD大鼠40只，4～6周齡，體重180～200g，由北京實驗動物科技有限公司提供，適應性飼養3天，自由飲水和攝食。

1.2 藥物與試劑 完全弗氏佐劑（CFA，Sigma公司產品），IL－1β、IL－2、IL－6、TNF－a ELISA檢測試劑盒，（批號分別為：DZE30419、DZE30648、DZE30646、DZE30635，北京新亞太生物科技有限公司）；五味甘露浴劑（批號：720121110，內蒙古自治區中蒙醫醫院中心制劑室提供），來氟米特（國藥準字號：H20000550，蘇州長征一欣凱制藥有限公司）。

1.3 儀器 80－2式離心機（金壇市化城敏科實驗儀器廠）；特制浴療器等。

2 方法

2.1 動物分組與造模 將40只SD大鼠，隨機分為正常對照組、模型組、來氟米特組和五味甘露浴組，每組10只。模型組、來氟米特組、五味甘露浴組大鼠進行造模。無菌條件下在右后足趾注射0.1ml的CFA（內含0.1℅滅活結核桿菌）致炎［1］，正常對照組注射同劑量的0.9%的生理鹽水，之后針眼處涂抹紫藥水。

2.2 給藥方法 正常對照組在第3d開始進行溫水浴治療，1次／d，30min／次，連續治療15d。水浴方法為在50×30× 20cm的半透明塑料容器中加入溫度為40±2℃的清潔飲用水1000ml，將大鼠的四肢和尾部浸泡在溫水中，治療結束后用清潔毛巾擦拭干凈后放入鼠籠中。模型組在造模之后的浴療方法同正常對照組。來氟米特組在造模后第3d開始灌胃來氟米特，0.17g／kg的給藥量1次／d，連續灌胃15d。藥浴組在造模后第3d開始進行溫五味甘露浴（33.4%）治療，浸泡方法同正常對照組。

2.3 取材、檢測方法 末次治療后24h，用烏拉坦腹腔麻醉大鼠，切開腹腔用5ml注射器抽取約4－5ml腹主動脈血，注入管中，靜放1－2h后，4000 r／min離心10 min，取上清液。采用酶聯免疫吸附法 （ELISA）檢測大鼠血清白介素IL－1β、IL－2、IL－6、TNF－a含量，按試劑盒說明操作。

2.4 統計學方法 采用SPSS 13.0統計軟件分析，計量數據以均數±標準差 （±s）表示，多組間單因素方差分析法，P＜0.05表示差異具有統計學意義。

3 結果

模型組與正常對照組比血清白介素IL－1β、IL－2、IL－6和TNF－a的含量明顯升高（P＜0.05），來氟米特組和五味甘露浴組與模型組比血清白介素含量明顯降低 （P＜0.05），蒙醫五味甘露浴組與來氟米特組比血清白介素顯著降低，但差異無統計學意義（P＞0.05）。

表1 各組大鼠血清IL－1β、IL－2、IL－6、TNF－a含量的比較 （±s）

表1 各組大鼠血清IL－1β、IL－2、IL－6、TNF－a含量的比較 （±s）

注：與正常對照組相比較，*P＜0.01；與模型組相比較，△P＜0.05。

組別 例數 IL－1β／ng／L IL－2／ng／L IL－6／ng／L TNF－a／ng／L正常對照組 10 2.52±0.77 74.09±22.95 74.09±22.95 16.49±5.58模型組 10 5.18±0.83* 181.29±31.15* 181.29±31.15* 29.47±8.94*來氟米特組 10 3.92±0.88△ 150.06±16.38△ 150.06±16.38△ 23.82±8.94△五味甘露浴組 10 3.76±1.25△ 141.01±48.75△ 141.01±48.75△ 20.52±5.11△

4 討論

類風濕關節炎（Rheumatoid Arthriti，RA）是以損害滑膜、軟骨和骨的一種慢性、炎癥性自身免疫性疾病。大鼠佐劑性關節（Adjuvant arthritis，AA）模型在臨床表現、病理學、免疫學改變和病理機制等與RA具有許多相似特征，是研究RA病理機制和評價RA治療藥物較理想的動物模型［2］。蒙醫五味甘露浴療效確切，臨床應用廣泛，在白脈病、腰腿痛、風濕性關節炎、類風濕性關節炎、痛風、強直性脊柱炎、胃病、皮膚病、骨關節病等具有較好的作用。在作用機制研究也取得了一定進展［3］，是治療RA的藥浴代表療法之一。

CFA誘導的動物模型是一種免疫性關節炎模型，主要表現為多發性關節炎；組織學特點包括關節局部炎癥細胞的大量浸潤，增生性滑膜炎，關節軟骨及骨組織的破壞；在免疫功能方面不僅在細胞免疫有表現，而且在體液免疫也有一定的體現。IL－1β具有多種生物學特性，是免疫反應、炎癥及組織損傷的主要介質之一，可刺激滑膜細胞生成，活化滑膜細胞及破骨細胞產生金屬蛋白酶和膠原酶，從而造成骨與關節的破壞。TNF－a是RA發病機制的促炎性因子，參與整個RA的病變過程［4］。IL－6作用于IL－1β、TNF－a不同，它不能直接刺激骨膜成纖維細胞和軟骨細胞產生金屬蛋白和膠原酶，但能誘導肝細胞分泌急性期蛋白，并誘導其他細胞因子如IL－1β、IL－2、TNF－a的產生進而發揮致病作用。研究發現，IL－1β和TNF－a在RA患者外周血和滑膜液中均增高，可激活血管內皮細胞，增強內皮細胞中黏附分子的表達，使小分子炎癥介質增強，導致骨及軟骨的破壞［5］。

蒙醫理論認為RA病屬 “托來”范疇，其主要致病因素是 “黃水”，“黃水”與血交搏注關節，導致局部氣血運行受阻所致。強勞內傷，關節扭傷，飲食過多，酗酒，汗出受風寒，中潮濕之毒等，均為誘發本病之常見因素。其臨床表現為起病急驟，多在夜半突感關節劇痛而驚醒，伴以發熱等全身癥狀。四肢關節顯著紅腫熱痛，患部皮膚偶見紫斑，當疾病進展時關節逐漸肥大，活動漸受限制，其程度隨發作次數而增加，最后導致關節畸形僵硬。受累關節以跖趾關節最多，其次為踝、手、腕、膝、肘及足部等其他關節，肩及髖關節則甚少波及。治宜以燥黃水，舒筋為原則［6］。

蒙醫五味甘露浴是利用機械作用 （包括浮力作用和壓力作用兩個方面）、溫度作用、化學作用和蒙醫五味甘露浴的綜合調整等協同作用使人體的外部浸漬，以達到防治疾病的一種療法，是蒙醫臨床外治法重要組成部分［7］。實驗結果表明，蒙醫五味甘露浴具有較好的免疫調節作用，能夠明顯降低CFA誘導的佐劑性關節炎大鼠血清IL－1β、IL－2、IL－6和TNF－a的含量。提示蒙醫五味甘露浴通過調節AA大鼠血中IL－1β、IL－2、IL－6和TNF－a的含量，抑制AA大鼠骨與軟骨的破壞，減輕滑膜炎癥，是否有其它因子參與調節還有待進一步研究。

［1］陳柏松，徐玉東，鐘淑琦，等.大鼠佐劑性關節炎模型的建立與評價［J］.哈爾濱醫科大學學報，2005，12（6）：489－491.

［2］李培培，解國雄，宋珊珊，等.大鼠佐劑性關節模型表現特征及評價指標［J］.中國免疫學雜志，2012，28（5）：453.

［3］宇妥·元丹貢布.四部醫典 ［M］.上海：上海科學技術出版社，1987：298.

［4］天河，布和巴特.蒙藥五味甘露藥浴研究進展 ［J］.中國民族醫藥雜志，2011，5（5）：61－62.

［5］張良，白人驍.細胞因子與類風濕關節炎治療新進展 ［J］.中國醫藥導報，2008，5（11）：27－29.

［6］蒙古學百科全書編輯科員會 《醫學卷》編輯委員會編.蒙古學百科全書（醫學卷）［M］.呼和浩特：內蒙古人民出版社，2002：724－725.

［7］陳英松.蒙醫學適宜技術及應用 ［M］.呼和浩特：內蒙古大學出版社，2011：93.

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1007－8517（2015）13－0001－02

2015.04.16）