紅花注射液對人肺癌A549細胞體外抑制的實驗研究

范林林胡亞南王恩軍靳 祎*

1.河北省保定市兒童醫(yī)院，河北 保定 071000；2.河北大學基礎(chǔ)醫(yī)學院，河北 保定 071000

紅花注射液對人肺癌A549細胞體外抑制的實驗研究

范林林1胡亞南1王恩軍2靳 祎2*

1.河北省保定市兒童醫(yī)院，河北 保定 071000；2.河北大學基礎(chǔ)醫(yī)學院，河北 保定 071000

目的：探討紅花注射液對人肺癌A549細胞體外增殖的影響。方法：采用MTT法測定了不同劑量的紅花注射液對A549細胞體外增殖的抑制作用。結(jié)果：紅花注射液對A549細胞增殖有較強的抑制作用；呈現(xiàn)良好的量效關(guān)系和時效關(guān)系。結(jié)論：紅花注射液對人肺癌A549細胞的增殖有較強的抑制作用。

紅花注射液；肺癌；細胞株A549；抑制作用

紅花在祖國醫(yī)藥學中的應用已有悠久的歷史，主要活性成分為紅花黃色素、黃酮類、脂肪酸、多糖，臨床主要用于月經(jīng)不調(diào)、痛經(jīng)、經(jīng)閉、跌打損傷、冠心病、血管栓塞性疾病、傳染性肝炎等的治療［1－3］。本試驗測定了不同劑量的紅花注射液對人肺癌A549細胞的外體抑制作用，為紅花抗腫瘤的深入研究及今后的臨床應用提供參考依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料 ①紅花注射液 （山西安特生物制藥股份有限公司，國藥準字Z14020734，批號20090614）；②人肺癌細胞株A549，由河北大學生命科學學院提供。

1.2 試劑與儀器 ①試劑：RPMI 1640培養(yǎng)基和胰蛋白酶（GIBCO公司）；胎牛血清（杭州四季青生物工程材料有限公司）；二甲亞砜（美國SIGMA公司）；青霉素、鏈霉素（華北制藥股份有限公司）。②儀器：CO2培養(yǎng)箱（MCO－20AIC，日本三洋公司）；生物安全柜（BHC－1300IIA2，蘇州蘇潔凈化設(shè)備有限公司）；倒置顯微鏡 （IX83，日本奧林巴斯公司）；酶標儀（HT2，美國BIO－RED公司）。

1.3 方法

1.3.1 細胞培養(yǎng) A549細胞復蘇后，貼壁生長于含10%胎牛血清、青霉素和鏈霉素各100U／m l的RPMI 1640完全培養(yǎng)液中，并置于37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

1.3.2 紅花注射液對A549細胞增殖的影響 采用MTT法，將A549細胞按照5×104個／ml的密度接種到96孔培養(yǎng)板中，試驗分為以下幾組：紅花注射液組（10μl、20μl、40μl、80μl）、陰性對照組 （加相同劑量的生理鹽水終體積為200μl／孔）。分別培養(yǎng)24h、48h和72h后加入5μg／μl的MTT液，繼續(xù)培養(yǎng)4h，棄上清液，加入二甲亞砜（DMSO），磁力震蕩15min，用酶標儀測定各孔吸光度A值，測定波長λ＝570 nm，計算細胞增殖的抑制率：抑制率（%）＝（陰性對照組A值－紅花注射液組A值）／陰性對照組A值×100%［4］。

1.3.3 細胞形態(tài)學觀察 取生長狀態(tài)良好的A549細胞接種于48孔細胞培養(yǎng)板內(nèi)，培養(yǎng)24h，紅花注射液組加入40μl／孔的紅花注射液，陰性對照組加入生理鹽水，培養(yǎng)24h后在倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)。

1.4 統(tǒng)計學分析 采用統(tǒng)計學軟件SPSS 16.0進行分析，實驗數(shù)據(jù)以 （）表示，組間比較采用單因素方差分析，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 紅花注射液對A549細胞增殖的抑制作用 紅花注射液（10μl／孔、20μl／孔、40μl／孔和80μl／孔）分別作用A549細胞24、48、72 h后，與陰性對照組比較，各劑量的紅花注射液在12、48、72 h對A549細胞增殖均有抑制作用，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。且隨著藥物劑量的提高和刺激時間的延長，紅花注射液對A549細胞的抑制作用也逐漸增強，即具有劑量和時間依賴性 （表1）。

表1 不同劑量的紅花注射液對A549細胞增殖的抑制作用（%，）

表1 不同劑量的紅花注射液對A549細胞增殖的抑制作用（%，）

注：與陰性對照組比較，*P＜0.05。

1.87±0.25 2.14±0.38 1.46±0.33紅花注射液組 10μl／孔 10.12±0.75* 18.43±1.45* 20.76±2.01*20μl／孔 15.40±3.81* 31.42±5.69* 41.00±4.32*40μl／孔 40.65±2.74* 44.08±3.35* 59.36±5.17*80μl／孔 54.39±3.15* 62.45±5.22* 73.74±6.93 24 h 48 h 72 h陰性對照組組別 劑量－*

2.2 細胞形態(tài)學變化 陰性對照組A549細胞貼壁良好，呈多角形或長梭形，邊界清晰，排列無方向性。紅花注射液組細胞多呈圓形，邊界胞膜起皺，可見大量懸浮細胞和碎片（圖1）。

3 討論

紅花注射液是從野生紅花藥材中經(jīng)過精制而成的中藥注射液，主要含有紅花黃色素、紅花醌苷、紅花素、新紅花苷等成份［5－6］。據(jù)報道，紅花注射液對體外培養(yǎng)的Hela細胞、HepG－2細胞的增殖有較強的抑制作用，并能促進細胞凋亡，其機制可能與抑制細胞中Survivin、Bcl－2蛋白的表達有關(guān)［7－8］。本試驗結(jié)果顯示，紅花注射液對體外培養(yǎng)的人肺癌A549細胞增殖有較強的抑制作用，并呈現(xiàn)良好的量效和時效關(guān)系，隨著藥物劑量和作用時間的增加，抑制作用明顯增強，但是其抑制細胞增殖的機制還有待進一步研究。

［1］汪宏雷.紅花的藥理作用［J］.中醫(yī)藥臨床雜志，2014，26（5）：519.

［2］萬春平.紅花的研究進展［J］.時珍國醫(yī)國藥，2011，14（1）：243.［3］李寶軍，劉志強.紅花藥理分析及臨床應用研究 ［J］.亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2014，10（15）：44－45.

［4］司徒鎮(zhèn)強，吳軍正.細胞培養(yǎng)［M］.西安：世界圖書出版公司，2004：186－191.

［5］趙劍鋒，劉靜，郭穎，等.紅花注射液化學成分及其活性研究 ［J］.中國中藥雜志，2014，39（16）：3102－3106.

［6］別磊，柴乃俊，常成，等.基于文獻的紅花注射液安全性研究 ［J］.中國中醫(yī)藥信息雜志，2014，21（11）：37－41.

［7］靳祎，石少慧，王恩軍，等.紅花注射液對人宮頸癌細胞株Hela體外增殖的影響［J］.軍醫(yī)進修學院學報，2007，28（6）：448.

［8］李福娟，石學魁，李玉婷，等.紅花注射液對HepG－2細胞Bcl－2和Survivin表達的影響［J］.中國實驗方劑學雜志，2013，19（21）：218－222.

R285.5

A

1007－8517（2015）12－0011－02

2015.04.21）

范林林（1978－），男，主治醫(yī)師，E-mail：843743796＠qq.com

靳祎（1977－），女，副教授，碩士，從事抗腫瘤中藥及化學生物學研究。E-mail：jinyi2009＠163.com