高效液相色譜法檢測食用油中的丙二醛

朱洪亮,葛芳芳,管佳麗

(1.嘉興市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗所,浙江嘉興 314050;2.嘉興市農(nóng)產(chǎn)品監(jiān)測中心,浙江嘉興 314050)

高效液相色譜法檢測食用油中的丙二醛

朱洪亮1,2,葛芳芳1,管佳麗1

(1.嘉興市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗所,浙江嘉興 314050;2.嘉興市農(nóng)產(chǎn)品監(jiān)測中心,浙江嘉興 314050)

建立了柱前衍生高效液相色譜檢測食用油中丙二醛的方法。樣品中的丙二醛用三氯乙酸溶液提取后與硫代巴比妥酸(TBA)進行衍生化反應(yīng)后,采用液相色譜分離,熒光檢測器測定。在優(yōu)化的條件下,丙二醛的檢出限為0.02mg/kg,回收率在87.1%～103.2%之間,相對標準偏差小于6%。該方法具有操作簡單、靈敏度高等特點,適用于食用油中丙二醛的測定。

丙二醛,高效液相色譜,食用油

丙二醛(Malonaldehyde,MDA)是油脂氧化變質(zhì)生成的過氧化脂質(zhì),在熱、光、重金屬等過氧化物分解因子存在下,進一步分解產(chǎn)生的一種醛類物質(zhì)。通常油脂在氧化過程中,產(chǎn)生的過氧化物會不斷降解,使過氧化值會逐漸下降,因此很難判斷油脂的氧化酸敗程度。但隨著油脂氧化變質(zhì)程度的發(fā)展,丙二醛的含量值會有明顯的增高,并且丙二醛的穩(wěn)定性好,因此更能準確反映油脂的氧化程度[1-2]。

氧化酸敗的食用油脂不僅會產(chǎn)生不良風味,影響食用口感,而且由于脂肪酸組成發(fā)生了變化,長期食用會使得人體缺乏必需的脂肪酸,并產(chǎn)生動脈粥樣硬化,誘發(fā)心腦血管疾病,嚴重危害人體健康[3];此外,酸敗產(chǎn)生的自由基會促使人體衰老,產(chǎn)生的氫過氧化物具有潛在的致癌性[4],因此對油脂中的丙二醛含量進行監(jiān)測具有重要意義。

目前測定油脂中丙二醛含量的方法主要是硫代巴比妥酸(TBA)比色法[5-6],但是TBA與丙二醛的反應(yīng)具有非特異性,測定的丙二醛含量比實際含量要高,增高的原因是樣品中除丙二醛之外其它的醛類和酮類也能參與反應(yīng)。高效液相色譜法通過液相色譜柱將不同顯色物質(zhì)相互分離能夠避免其他物質(zhì)對丙二醛測定的干擾,近來已見報道,但相關(guān)研究主要用在血液、尿液等生物體系及飼料中丙二醛含量的測定[7-10],對油脂中的丙二醛含量的液相色譜檢測方法尚未見報道。本實驗利用TBA與丙二醛反應(yīng)生成的衍生物具有熒光性,利用HPLC對油脂樣品中的干擾成分進行分離,對樣品中的丙二醛含量進行測定。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1,1,3,3-四乙氧基丙烷標準品 日本TCI公司;三氯乙酸、乙二胺四乙酸二鈉、硫代巴比妥酸均為分析純;乙腈 色譜純;大豆油、菜籽油、食用豬油、花生油、玉米油均為送檢樣品。

Agilent1100高效液相色譜儀,配熒光檢測器 美國Agilent公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 待測樣品的提取 樣品處理:稱取5g油脂(精確至0.0001g)于250mL三角燒瓶中,準確加入50.0mL三氯乙酸混合提取液(75g/L三氯乙酸與1.0g/L乙二胺四乙酸二鈉水溶液),振蕩提取0.5h,取約25mL提取液于50mL離心管中,5000r/min離心8min。

1.2.2 衍生反應(yīng)的溫度 在5種溫度下(60,70,80,90,100℃)分別MDA標準溶液與TBA反應(yīng),結(jié)果發(fā)現(xiàn)適當提高溫度有利于提高衍生化反應(yīng)的進行,反應(yīng)在90℃時衍生物含量最大,繼續(xù)升高溫度對衍生物的生成量影響不大,甚至開始下降,為了避免其它副反應(yīng)的產(chǎn)生,選擇90℃作為反應(yīng)溫度。

表1 溫度對MDA響應(yīng)面積的影響Table 1 The effect of temperature on the corresponding area of MDA

1.2.3 衍生反應(yīng)的時間 取MDA標準溶液分別與TBA衍生反應(yīng)15、20、30、45、60min,比較衍生產(chǎn)物的色譜峰面積。當反應(yīng)在20min后,所得衍生物的峰面積變化不大,考慮時間成本,選擇20min作為衍生反應(yīng)的時間。

1.2.4 標樣及樣品的處理 各取5.00mL離心后的樣品處理液及標樣于25.0mL比色管中,加入5.0mL TBA溶液,在90℃下分別將MDA與TBA反應(yīng),水浴保溫20min,冷卻,上清液過膜,進樣測定。

1.2.5 色譜分析條件 色譜柱:ODS-2 Hypersil C18柱(200mm×4.6mm,5μm);柱溫:30℃;進樣體積:10μL;流速:1.0mL/min;流動相:乙腈+水(25∶75);檢測波長:激發(fā)波長525nm,發(fā)射波長560nm。

1.2.6 標準溶液的配制與曲線繪制 丙二醛標準溶液由1,1,3,3-四乙氧基丙烷水解制得。稱取0.315g1,1,3,3-四乙氧基丙烷,用水溶解后稀釋至1000mL,此標準儲備溶液濃度為100μg/mL。用去離子水稀釋至濃度為0.1、0.5、1.0、2.0、5.0μg/mL,與待測樣液一同衍生后進液相色譜儀。以待測物的峰面積y對濃度x(μg/mL)做標準曲線。

2 結(jié)果與分析

2.1 液相色譜分析條件的選擇

考察了不同流動相比例組成對MDA分離檢測的影響:當有機相組成為甲醇時,色譜峰保留時間明顯延長,且峰面積較小,因此選擇乙腈作為流動相;添加一定濃度的磷酸二氫鉀有利于色譜峰形的改善,綜合考慮,選擇乙腈與0.05mol/L的磷酸二氫鉀溶液混合體系作為流動相,兩者的比例為25∶75。

圖1 濃度為0.05μg/mL的MDA標準色譜圖Fig.1 Standard chromatogram of 0.05μg/mL MDA

圖2 MDA標準曲線Fig.2 Standard curve of MDA

2.2 線性范圍和檢出限

將MDA標準系列溶液按1.2方法衍生,以選定的液相色譜條件進行HPLC分析,以保留時間定性,以峰面積對濃度做標準曲線,結(jié)果表明,MDA在0.1～5.0μg/mL范圍內(nèi),線性回歸方程為y=486.8x-91.02,相關(guān)系數(shù)r=0.9993。以信噪比S/N=3計算方法的檢出限為0.02mg/kg。

2.3 回收率及精密度

分別取一定量的大豆油、菜籽油、食用豬油、花生油、玉米油樣品,加入MDA兩個不同濃度水平,混勻后按照1.2方法進行提取、衍生、檢測,重復6次實驗,計算平均回收率及相對標準偏差,結(jié)果見表2。

表2 回收率測定結(jié)果(n=6)Table 2 Results of spiked recovery test(n=6)

表2結(jié)果表明,以高效液相色譜法測定食用油脂中的丙二醛,對不同樣品加標的平均回收率在87.1%～103.2%之間,相對標準偏差均小于6%,回收率較高,相對標準偏差較小,滿足實際檢測需要。

3 結(jié)論

本文成功建立了采用柱前衍生HPLC-FLD法檢測食用油脂中的丙二醛含量,方法前處理簡單,靈敏度和準確度較好,能夠有效避免傳統(tǒng)比色法檢測丙二醛含量帶來的誤差,可用于實際工作中油脂中丙二醛含量的檢測。

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Determination of malondialdehyde in edible oils by high performance liquid chromatography

ZHU Hong-liang1,2,GE Fang-fang1,GUAN Jia-li1

(1. Jiaxing Product Quality Supervision Testing Institute,Jiaxing 314050,China;2. Jiaxing Agriculture Products Supervision & Teting Agency,Jiaxing 314050,China)

A method was developed for determination of malondialdehyde(MDA)in Oil by high performance liquid chromatography.The malondialdehyde was extracted by trichloroacetic acid solutions and reacted with thiobarbituric acid(TBA)in samples. The final derivatives were separated by C18column and analyzed by HPLC with fluorescence detector. Under the optimized conditions,the limit of detection was 0.02mg/kg,the recovery was in the range of 87.1%～103.2%,the RSD was less than 6%. This method was simple,high sensibility and suitable for the analysis of MDA in edible oils.

malondialdehyde;high performance liquid chromatography;edible oils

2014-03-27

朱洪亮(1981-)，男，工程師，研究方向：食品質(zhì)量安全與檢測。

TS227

A

1002-0306(2015)01-0309-03

10.13386/j.issn1002-0306.2015.01.056