不同產地差不嘎蒿的質量對比研究

王 琰劉 輝辛 艷黃勝陽*周海燕*

1.北京工業大學生命科學與生物工程學院，北京 100124；2.亞寶藥業集團股份有限公司，山西 風陵渡 044602

不同產地差不嘎蒿的質量對比研究

王 琰1劉 輝2辛 艷2黃勝陽1*周海燕2*

1.北京工業大學生命科學與生物工程學院，北京 100124；2.亞寶藥業集團股份有限公司，山西 風陵渡 044602

目的：考察不同產地差不嘎蒿藥材的各項質量指標，為其質量標準建立及優質產地的篩選提供一定的實驗依據。方法：采用HPLC法，流動相：乙腈－0.2%甲酸水（35∶65）流量：0.8ml／min；檢測波長：288nm；柱溫：30℃，測定指標性成分異櫻花素、圣草酚－7－甲醚的含量；按照2010年版 《中國藥典》（一部）附錄方法測定其醇溶性浸出物、水分、雜質、灰分含量及其酸敗度，綜合評定藥材質量。結果：不同產地的藥材之間有一定的差異，其中異櫻花素、圣草酚－7－甲醚含量差異較為明顯，水分隨保藏年份的增加而減少，其他項的差異保持在一定范圍內。結論：不同產地的差不嘎蒿藥材的質量有所不同，內蒙古自治區赤峰市可作為優質種源。

差不嘎蒿；不同產地；質量對比；異櫻花素；圣草酚－7－甲醚

差不嘎蒿為菊科植物差不嘎蒿Artemisia halodendron Turcz.的干燥成熟果實，又名有沙蒿、沙漠嘎、普勒罕達等，在 《中國沙漠地區藥用植物》［1］、 《中藥大辭典》［2］、《全國中草藥匯編》［3］中均有收載。差不嘎蒿味辛性溫，歸肝、肺經，具有抗炎［4］、止咳、祛痰、平喘［5］、解表、祛濕等功效，臨床用于治療腸癰腹痛、慢性盆腔炎、跌打損傷、風濕性關節炎、慢性氣管炎及支氣管哮喘等癥［1－3］。研究發現，差不嘎蒿藥材中含有大量的黃酮類成分［6－7］，并具有清除自由基、抗氧化、抗炎、抗腫瘤、抗病毒、抗突變、調節免疫、防治血管硬化、降血糖等功能［8］。對差不嘎蒿藥材祛痰平喘活性成分進行追蹤［5］，確定其有效部位為總黃酮，其中，異櫻花素和圣草酚－7－甲醚含量較高，為指標性成分［4］。

產地是影響中藥材質量的重要因素之一，當地所有的生態因子均與藥材質量有關，其中包括土壤、氣溫、降雨、光照、生態群落構成等。大多數藥材經過千百年來的篩選，

已將產地和質量緊密結合，即稱優質產地的藥材為道地藥材［9］。因此，產地作為中藥質量的本草學屬性在中藥質量評價中有著不可或缺的重要地位［10］。迄今為止，內蒙、甘肅、山西等地均被視為差不嘎蒿的主產區，但各地差不嘎蒿質量差別的研究尚未見報道。本實驗選取差不嘎蒿主產區的19批不同產地的藥材，分別測定指標性成分圣草酚－7－甲醚、異櫻花素的含量，藥材的醇溶性浸出物含量，穩定性指標酸敗度，安全性指標水分、雜質、灰分含量，對其進行綜合全面的質量評價。

1 儀器與材料

1.1 儀器 LC－20A高效液相色譜儀（DAD，Shimadzu Corporation）；雙列六孔電熱恒溫水浴箱（天津市泰斯特儀器有限公司）；KQ－500DE超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；WG136型電熱鼓風干燥箱 （天津市泰斯特儀器有限公司）；AB265－S精密電子天平（Mettler Toledo）；JA2003電子分析天平（上海舜宇恒平科學儀器有限公司）；DL－I－15電爐 （天津市泰斯特儀器有限公司）；馬弗爐 （弗恩森 （北京）電爐有限公司）。

1.2 材料 本次研究用19批差不嘎蒿藥材供試品均由亞寶藥業集團股份有限公司提供，涵蓋了內蒙古、山西、甘肅等地區在內的差不嘎蒿主產區，于秋天果實成熟時采收果穗，曬干，搓出種子，除去雜質。經中國醫學科學院藥物研究所馬林教授鑒定，各批供試品均為差不嘎蒿，詳見表1。

異櫻花素對照品、圣草酚－7－甲醚對照品自制，經面積歸一化法確定其純度均在98%以上；乙腈為色譜純；水為自制超純水；其余試劑均為分析純。

表1 差不嘎蒿采集情況表

2 方法與結果

2.1 指標性成分含量測定

2.1.1 色譜條件與系統適應性試驗［4］色譜柱：Phenomenex Extend（250mm×4.6mm，5μm），檢測波長：288 nm；流動相：乙腈－0.2%甲酸水溶液（35∶65）；流速0.8 m l／min；柱溫：30℃；進樣量：10μl。供試品中各相鄰色譜峰的分離度均符合要求，理論板數均不低于3000。對照品及樣品HPLC圖譜見圖1－3。

圖1 圣草酚－7－甲醚對照品的HPLC譜圖

圖2 異櫻花素對照品的HPLC譜圖

圖3 供試品的HPLC譜圖

2.1.2 對照品溶液的制備 取圣草酚－7－甲醚、異櫻花素對照品適量，精密稱定，加甲醇分別制成每1ml含圣草酚－7－甲醚76.20μg、異櫻花素26.18μg的溶液，即得。

2.1.3 供試品溶液的制備 將各批差不嘎蒿藥材粉碎，過三號篩。取藥材粉末約0.5g，精密稱定，置50ml具塞錐形瓶中，精密加85%乙醇20ml，稱定重量，超聲處理（功率500W，頻率40kHz）30min，放冷，用85%乙醇補足減失的重量，濾過，濾液蒸干，殘渣用甲醇溶解，并轉移至10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.1.4 線性關系考察 分別精密吸取濃度為127.00μg／ml的圣草酚－7－甲醚對照品溶液1、2、4、6、8、10m l，濃度為53.36μg／mL的異櫻花素對照品溶液1、2、4、6、8、10ml，依次用甲醇定容到10ml容量瓶中，搖勻。6個不同濃度的對照液分別進樣2次測定，每次10μl。以Y為峰面積，X為對照品進樣量，得圣草酚－7－甲醚回歸方程為Y＝2517.54X＋16207.66（R2＝0.9993），線性范圍：0.1270～1.2700μg／ml；異櫻花素回歸方程為Y＝3754067.83X＋15469.71（R2＝0.9995），線性范圍0.0534～0.5336μg／m l。2.1.5 精密度試驗 取76.20μg／ml圣草酚－7－甲醚、26.18μg／mL異櫻花素對照品溶液，重復進樣6次，每次進樣10μL，按照“2.1.1”項所述色譜條件測定，RSD分別為：0.47%、0.66%，表明精密度良好。

2.1.6 重復性試驗 取同一批差不嘎蒿種子粉末共6份，按照“2.1.3”項所述制成供試品溶液。測得圣草酚－7－甲醚、異櫻花素含量的RSD分別為0.84%、0.98%。

2.1.7 穩定性試驗 取同一份差不噶蒿種子供試品溶液，分別在0、2、4、6、8、12、16、20、24、32、40、48h后進行HPLC測定。結果圣草酚－7－甲醚、異櫻花素含量的RSD分別為0.65%、0.78%。表明供試品溶液在48h內基本穩定。

2.1.8 加樣回收率試驗 取已知圣草酚－7－甲醚、異櫻花素含量的差不嘎蒿種子樣品0.25g，精密稱定，分別加入對照品溶液適量，按“2.1.3”項下方法操作，吸取10μL進樣測定。結果圣草酚－7－甲醚、異櫻花素的平均回收率分別為101.3%、98.9%，RSD分別為1.05%、1.29%。

2.1.9 樣品測定 取不同產地差不嘎蒿藥材藥材，按“2.1.3”項下方法進行供試品溶液制備，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。結果見表2。

2.2 其他質量指標測定

按照2010年版 《中國藥典》（一部）中提供的方法，將差不嘎蒿粉碎后，分別測定其醇溶性浸出物含量、水分含量、雜質含量、灰分含量及其酸敗度。結果見表2。

表2 不同產地差不嘎蒿質量指標檢測結果

3 討論

從差不嘎蒿的各種成分含量數據可知，不同地區藥材質量是有差異性的。HPLC含量檢測結果顯示，圣草酚－7－甲醚含量以S4、S5、S14樣品較高，S3樣品含量最低；異櫻花素同樣是S4樣品含量最高，其次為S5，再次是S14、S15，其中S19含量最低。以上結果表明，內蒙古自治區赤峰市的樣品含指標性成分較高，質量較好。醇溶性浸出物檢測結果顯示，S14、S16藥材樣品含量較高，內蒙古自治區赤峰市樣品含量緊隨其次。

圖4 不同產地差不嘎蒿聚類樹狀圖

由于其他項含量測定數據量過大，故需要通過數理統計的方法進行數據分析，從而科學的表征這些差異。借助統計軟件SPSS13.0將有關差不嘎蒿質量的各項數據統一進行Zscores標準化處理，對標準化處理后的數據進行分層聚類分析。根據數據特點，對數據進行了Q型聚類分析，并繪制聚類樹狀圖，來評價不同地區差不嘎蒿質量的相似度，見圖4。

從圖4可見，S10、S11、S6、S8、S7、S12和指標性物質含量最高的S4樣品聚為一類；樣品S1自成一類，其他地區樣品大致聚為一類。聚類結果顯示，該藥材質量雖有差異，但不具有經緯地帶性，考慮是各樣品生長環境導致植物體內成分的代謝合成差異。

檢測結果顯示，該藥材含水量隨著儲藏年份的增加會逐年減少，在2.46%～7.85%之間，藥材表面有膠質層包裹，與其他種子類藥材水分限度相差不多［11］；雜質含量從4.98%～9.67%不等，整體雜質含量偏高，其中S4藥材雜質含量最高；總灰分是藥材中各種無機成分總量的指標，酸不溶性灰分大部分為沾染的泥沙。結果顯示，總灰分含量在5.90%～8.22%之間，酸不溶性灰分含量在0.15%～0.40%在之間，整體偏高，S4、S14、S16藥材樣品質量較好。綜合統計分析結果，以安全性指標評判，內蒙古中部地區的樣品質量較好。

差不嘎蒿酸敗度測定中，酸值為1.70～5.45之間，羰基值為1.999～8.146之間，過氧化值為0.041～0.156之間。與2010年版《中國藥典》一部收載的6種種子類藥材（郁李仁、柏子仁、桃仁、核桃仁、蓖麻子、榧子）酸敗度限度［11］以及國家動植物油脂標準限度［12－13］相比，多數數值偏低，說明本藥材中所含游離脂肪酸、低分子醛類或酮類及過氧化物較少，在一定程度上反映該藥材不易酸敗。分析藥材不易酸敗的原因可能與差不嘎蒿藥材外壁包裹膠膜層有關。

以指標性物質和醇溶性浸出物含量為主，綜合各個安全性指標對不同產地差不嘎蒿藥材質量進行評價，結果顯示各有優劣。但整體來說，內蒙古自治區赤峰市藥材品質最好，陜西省榆林市藥材質量相對較差。本研究以八個指標首次對19批藥材樣本進行了全面的質量對比評價，方法準確、穩定、重復性好，通過產地和指標性成分含量的相關試驗分析，在臨床用藥方面提供一定的參考，同時為差不嘎蒿藥材質量標準的建立、尋找優質產地實現GAP種植提供了依據。

［1］中國科學院冰川凍土沙漠研究所沙漠研究室編.中國沙漠地區藥用植物［M］.蘭州：甘肅人民出版社，1973：50－51.

［2］江蘇新醫學院.中藥大辭典 ［M］.上海：科學技術出版社，1986：1166.

［3］全國中草藥匯編組.全國中草藥匯編 ［M］.北京：人民衛生出版社，1978：815.

［4］張媛媛，喬延江.HPLC法測定沙漠嘎種子中兩種二氫黃酮的含量［J］.北京中醫藥大學學報，2008，31（1）：58－60.

［5］張媛媛.沙漠嘎種子平喘活性成分篩選及其質量研究 ［D］.北京：北京中醫藥大學.2006.

［6］王延年，郭亦然，艾路，等.沙漠嘎種子化學成分研究 ［J］.中國中藥雜志，2004，29（6）：506.

［7］王延年，艾路，喬延江.沙漠嘎種子化學成分的分離與鑒定 ［J］.中國實驗方劑學雜志，2004，10（3）：3－4.

［8］劉星雨，周敏，孫體健，等.天然黃酮類化合物的藥理活性及分離提取［J］.中國藥物與臨床，2014，14（5）：621－624.

［9］潘雪梅，韋輝，劉毅，等.不同產地丹參藥材質量研究 ［J］.中草藥，2011，42（9）：1833－1836.

［10］張鐵軍.中藥質量認識與質量評價［J］.中草藥，2011，42（1）：1－9.

［11］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典 （一部）［M］.北京：中國醫藥科技出版社，2010：193，231，260，262，330，341.

［12］中華人民共和國衛生部.GB 2716－2005.食用植物油衛生標準［S］.北京：中國標準出版社，2005：3.

［13］中華人民共和國衛生部.GB10146－2005.食用動物油脂衛生標準［S］.北京：中國標準出版社，2005：193.

Study on quality contrast of Artem isia halodendron Turcz.from different habitats

WANG Yan1LIU Hui2XIN Yan2HUANG Shengyang1*ZHOU Haiyan2*
1.College of Life Science and Biotechnology，Beijing University of Technology，Beijing 100124，China；2.Yabao Pharmaceutical Group Company，Shanxi044602，China

Objective Study the quality indicators of Artemisia halodendron Turcz.In different areas，to provide some academic basis for quality criterion and origin select of Artemisia halodendron.M ethod The methods of HPLC（mobile phase of acetonitrile－0.2%formic acid water（35：65）；The flow rate was 0.8 ml／min，the detection wavelength was 288 nm，column temperature 30℃）was used to determine the content of the signature ingredients－Isosakuranetin and Eriodictyol－7－methyl ether.According to the 2010 pharmacopoeia appendixmethod for determining the ethanol-soluble，moisture，impurities，ash content and its degree of rancidity.To evaluate the quality of Artemisia halodendron in a comprehensiveway.Results There aremany differences between all the medicines，especially the contentof Isosakuranetin and Eriodictyol－7－methyl ether.Moisture content decreased with the increase of the preservation time，and other quality indexs remain within a certain range of differences.Conclusion The content of chemical compositions in Artemisia halodendron from different place has a significant difference and and Artemisia halodendron in Chifeng，Inner Mongolia could be used as a high quality germplasm.

Artemisia halodendron Turcz.；Different habitats；Quality contrast；Isosakuranetin；Eriodictyol－7－methyl ether

R284.1

A

1007－8517（2015）17－0027－04

2015.05.27）

王琰（1990－），碩士研究生在讀，主要從事天然產物化學研究。E－mail：wyan＠emails.bjut.edu.cn

周海燕（1972－），博士，副主任藥師，主要從事中藥質量研究。E－mail：zhouhaiyan＠yabaoyaoye.com黃勝陽（1964－），博士，副教授，主要從事中藥有效成分與新藥開發研究。E－mail：hsy＠bjut.edu.cn