普洱熟茶茶褐素對2型糖尿病小鼠降糖作用研究

徐湘婷王 鵬羅紹忠侯 艷邵宛芳楊繼紅*

1.昆明醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院暨重點實驗室，云南 昆明 650500；2.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)龍潤普洱茶學(xué)院，云南 昆明 650201

普洱熟茶茶褐素對2型糖尿病小鼠降糖作用研究

徐湘婷1王 鵬1羅紹忠1侯 艷2邵宛芳2楊繼紅1*

1.昆明醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院暨重點實驗室，云南 昆明 650500；2.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)龍潤普洱茶學(xué)院，云南 昆明 650201

目的：探討普洱熟茶提取物茶褐素對2型糖尿病小鼠的降血糖作用及其機制。方法：高脂飲食加低劑量鏈脲菌素建立小鼠2型糖尿病模型，連續(xù)灌胃給予0.25、0.5、1.0g／kg／d茶褐素6周，實驗結(jié)束后檢測空腹血糖、胰島素、甘油三酯、總膽固醇，取肝臟測肝糖原含量。結(jié)果：普洱熟茶茶褐素與模型組比較：空腹血糖、胰島素、甘油三酯、總膽固醇顯著降低，肝糖原顯著升高。結(jié)論：普洱熟茶提取物茶褐素可有效降低2型糖尿病小鼠的血糖水平及改善其糖、脂代謝，作用機制可能與增加胰島素敏感性有關(guān)。

茶褐素；糖尿病小鼠；血糖

2型糖尿病（Type 2 diabetes，T2DM）的主要表現(xiàn)是出現(xiàn)胰島素抵抗（Insulin Resistance，IR）和胰島β細(xì)胞功能失常引起的相對胰島素不足［｀1－3］。雖然目前口服降糖西藥能有效的控制T2DM的高血糖，但對T2DM慢性并發(fā)癥的預(yù)防和治療仍缺乏有效措施，并且具有較大的毒副作用［｀4－5］。普洱茶是以云南大葉種曬青茶為原料，按特定的加工工藝生產(chǎn)的具有獨特品質(zhì)特征的茶葉［｀6－7］。目前，對綠茶、烏龍茶等各種茶類已有不少的研究報道，但對普洱茶的功效研究尚屬起步階段，普洱熟茶茶褐素（Theabrownins，TB）對T2DM作用的研究報道很少，故本實驗擬探討普洱熟茶TB對T2DM小鼠降糖作用及可能機制。為今后普洱茶功能食品的研發(fā)或其單體物質(zhì)開發(fā)抗糖尿病藥物提供科學(xué)依據(jù)及理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 5～6周齡SPF級C57BL／6J小鼠60只，雄性，18±2g，北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司［｀SCXK（京）2012－0001］。

1.2 高脂飼料 71.8%基礎(chǔ)飼料、2%膽固醇、8%蛋黃粉、18%豬油、0.2%膽酸鈉［｀8］。

1.3 受試物劑量設(shè)置及分組

1.3.1 受試物 普洱熟茶TB由云南農(nóng)業(yè)大學(xué)龍潤普洱茶學(xué)院制備提供，4℃低溫冷藏保存。所用茶葉樣品由三個機構(gòu)提供的不同來源的普洱茶熟餅1∶1∶1混合：①云南龍潤茶業(yè)集團(tuán)云南農(nóng)大龍潤普洱茶學(xué)院監(jiān)制；（龍潤）；②中國普洱茶研究院研制，云南省思茅茶樹良種場生產(chǎn)； （帕卡）；③云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究院西雙版納普洱茶研究院，勐海縣云茶科技有限責(zé)任公司；（云茶）。

1.3.2 60只小鼠隨機分成2組 陰性對照組（10只）及模型動物 （50只），陰性對照組給予基礎(chǔ)飼料，模型組給予高脂飼料造模4周，腹腔注射鏈脲菌素（Streptozotocin，STZ）50mg／kg（臨用前溶解于0.1 mol／L、pH4.2的檸檬酸一檸檬酸鈉緩沖溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用，置于冰上），連續(xù)3d［｀9－11］。穩(wěn)定1周后空腹血糖（Fasting blood glucose，F(xiàn)BG）高于11.1mmol／L為糖尿病模型建造成功［｀12］。根據(jù)空腹血糖水平，把模型動物50只隨機分成5組，即模型組、二甲雙胍組（0.15g／kg·bw）、普洱熟茶TB低（0.25g／kg·bw）、中（0.50g／kg·bw）、高劑量組（1.0g／kg·bw），每組10只動物。陰性對照組及模型組灌胃給予0.9%的生理鹽水，其余4組不同組別動物每天給予相應(yīng)受試物或?qū)φ掌芬淮危B續(xù)給藥6周。

1.4 試驗儀器 TMS－1024全自動生化分析儀，日本京都；ADVIA Centaur CP全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀，德國；ACCU－CHEK Active血糖儀，美國羅氏公司；Diagnostics Ins.KDC－2046離心機，中國科技大學(xué)科技實業(yè)總公司中佳光電儀器分公司；BIO－RAD 550酶標(biāo)儀，美國BIO－RAD公司。

1.5 觀察指標(biāo) 實驗結(jié)束后，所有動物禁食不禁水12h，摘眼球取血，4℃，3000r／min離心10min，取血清，放入－80℃冰箱冷凍待測。檢測空腹血糖（Fasting blood glucose，F(xiàn)BG）、胰島素（Fasting insulin，F(xiàn)INS）、甘油三酯（Triglyceride，TG）、總膽固醇（Total cholesterol，TC），肝勻漿制備測定肝糖原含量。1.6 統(tǒng)計方法 應(yīng)用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件包對試驗數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差 （±s）表示，各組間FBG、FINS、TG、TC和肝糖原的比較采用單因素方差分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 普洱熟茶TB對小鼠空腹血糖的影響

2.1.1 與陰性對照組比較 模型組、二甲雙胍組、普洱熟茶TB低中高劑量組小鼠空腹血糖無論在給藥前，還是連續(xù)給藥6周后均顯著的高于陰性對照組（P＜0.01），提示模型成功。

2.1.2 灌胃6周后 普洱熟茶TB的中、高劑量組及二甲雙胍組血清空腹血糖明顯低于模型組 （P＜0.01）及同組給藥前血糖水平（P＜0.05或P＜0.01），而且呈現(xiàn)劑量效應(yīng)關(guān)系，提示普洱熟茶TB有明顯降低糖尿病小鼠血糖水平的作用，見表1。

表1 普洱熟茶TB對糖尿病小鼠空腹血糖的影響 （±s，n＝10）

表1 普洱熟茶TB對糖尿病小鼠空腹血糖的影響 （±s，n＝10）

注：與模型組相比，**P＜0.01；與給藥前比較，＃P＜0.05，＃＃P＜0.05。

組別 給藥劑量／g／kg 給藥容量 血糖／mmol／L給藥前 給藥6周0.2ml／10g 4.11±0.67 4.22±0.86模型組 ／ 0.2ml／10g 14.52±2.11 17.59±3.64二甲雙胍組 0.15 0.2ml／10g 14.44±1.93 9.43±3.29**＃＃TB低劑量組 0.25 0.2ml／10g 14.68±2.13 15.48±3.25 TB中劑量組 0.5 0.2ml／10g 14.83±2.32 12.34±2.44**＃TB高劑量組 1.0 0.2ml／10g 15.12±2.22 10.64±3.02**＃＃陰性對照組 ／

2.2 普洱熟茶TB對糖尿病小鼠胰島素、血脂及肝糖原的影響

2.2.1 6周實驗結(jié)束時，普洱熟茶TB中、高劑量組及二甲雙胍組較模型組血清胰島素水平有顯著的降低 （P＜0.01），而且呈現(xiàn)劑量效應(yīng)關(guān)系，低劑量組與模型組相比有降低趨勢，但差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義 （表2），提示TB降低了糖尿病小鼠胰島素分泌水平。

2.2.2 普洱熟茶TB高劑量組 二甲雙胍組血清TG、TC

水平較模型組相比顯著降低，TB低、中劑量組與模型組相比有降低趨勢，但差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義 （P＞0.05），提示TB有改善脂質(zhì)代謝的作用 （表2）。

2.2.3 普洱熟茶TB高劑量組 二甲雙胍組肝糖原較模型組顯著升高（P＜0.05或P＜0.01），低、中劑量組與模型組相比有升高趨勢，但差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義 （P＞0.05），有一定的劑量效應(yīng)關(guān)系，提示普洱熟茶TB有抑制肝糖原分解、促進(jìn)其累積的作用 （表2）。

表2 普洱熟茶TB對糖尿病小鼠胰島素、血脂及肝糖原的影響 ±s，n＝10）

表2 普洱熟茶TB對糖尿病小鼠胰島素、血脂及肝糖原的影響 ±s，n＝10）

注：與模型組相比，*P＜0.05，**P＜0.01。

26.78±5.97 0.98±0.44 2.60±0.73 29.13±7.47模型組 93.57±24.04 2.51±0.92 4.52±1.39 11.90±3.33二甲雙胍組 49.50±17.75** 1.66±0.71* 3.44±1.43 16.41±4.41*TB低劑量組 80.78±20.41 2.14±0.74 4.71±1.39 12.14±3.43 TB中劑量組 63.76±18.93** 1.80±0.67 4.19±1.31 14.61±3.89 TB高劑量組 53.85±21.61** 1.71±0.68* 3.23±1.19* 17.10±3.63／mg／g陰性對照組組別 胰島素FIns／m IU／L TG／mmol／L TC／mmol／L 肝糖元**

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Hypoglycem ic Effects of Fermented Puer tea Extracts－Theabrownins in M ice of Type 2 Diabetes

XU Xiangting1，WANG Peng1，LUO Shaozhong1，HOU Yan2，SHAOWanfang2，YANG Jihong1**

theabrownins；diabetetic mice；blood glucose

Objective：To explore the hypoglycemic effects andmechanisms of theabrownins from fermented Puer tea inmice of Type 2 diabetes.Methods：To develop amicemodel of type 2 diabetesmellitus by high fat dietwith low dose streptozotocin.At the experimental endpoint，the fasting serum glucose，insulin，triglyceride，total cholesterol and liver glycogen levelsweremeasured.Results：The comparison among theabrownins of fermented Puer tea groups and model group revealed that：Levels of the fasting serum glucose，insulin，triglyceride and total cholesterol were decreased and liver glycogen levels increased significantly in theabrownins groups.Conclusion：fermented Puer tea extracts－theabrownins can be used as treatment for themicemodel of type 2 diabetesmellitus.Theabrownins can improved glucose and lipid metabolism，and this effectmay be associated with increasing insulin sensitivity.

2015.09.03）

3 討論

國家科技支撐計劃課題子課題（2007BAD58B04－4）；云南省教育廳科學(xué)研究基金項目（2012C009）。

徐湘婷 （1979－），女，云南建水人，碩士，主要從事藥物毒理學(xué)及藥理學(xué)的研究。

楊繼紅（1961－），女，博士，教授，主要從事藥學(xué)研究。E－mail：382414872＠qq.com

R－332

A

1007－8517（2015）20－0009－02

普洱茶茶色素，是指從普洱茶中提取的一類水溶性酚性色素，包括茶黃素 （TF）、茶紅素 （TR）、茶褐素（TB）。茶褐素13］系指一類能溶于水而不溶于乙酸乙酯和正丁醇的褐色色素，除含有多酚類的氧化聚合產(chǎn)物外，還含有氨基酸、含氮物質(zhì)、糖類、沒食子酸 （GA）、咖啡因等結(jié)合物。據(jù)羅龍新等［｀14］研究，在渥堆過程中，其總的趨勢是茶黃素和茶紅素顯著下降，茶褐素大量積累。紅碎茶中（TF＋TR）／TB∶1.52，而普洱茶中（TF＋TR）／TB＝0.03，在普洱茶發(fā)酵過程中，TB的含量一直增加，TB是普洱茶中十分獨特的成分。并且對普洱茶的品質(zhì)形成有十分重要的作用，TB結(jié)構(gòu)復(fù)雜，分離純化的難度很大，其組成至今還不太明確。茶褐素的成分和作用及其變化規(guī)律需要進(jìn)一步探討。本實驗結(jié)果表明，普洱熟茶TB有降低糖尿病小鼠空腹血糖作用及空腹胰島素水平的作用，有劑量效應(yīng)關(guān)系，促使血糖進(jìn)入肝細(xì)胞，使葡萄糖合成肝糖原增加，肝糖輸出減少，葡萄糖氧化分解加快，從而達(dá)到調(diào)節(jié)糖代謝，降低空腹血糖。IR是2型糖尿病的發(fā)病基礎(chǔ)，血脂代謝異常可通過干擾胰島素的作用而導(dǎo)致IR，本研究提示普洱熟茶TB在降低血糖的同時，能夠降低血清TG及TC，改善脂質(zhì)代謝，有效緩解血脂代謝紊亂對胰腺造成的負(fù)擔(dān)。TB和模型組相比，胰島素分泌水平降低，血糖仍可保持較低水平，這可能與其改善了IR，增加了胰島素的敏感性相關(guān)。普洱熟茶TB降血糖的具體機制及結(jié)構(gòu)分析還有待進(jìn)一步研究。

（1.School of Pharmaceutical Science＆Yunnan Key Laboratory of Pharmacology for Natural Products，Kunming Medical University，Kunming，650500，China 2.College of Longrun Pu－erh Tea，Yunnan Agricultural University，Kunming，650201，China）