2009-2012年登封市小腸結腸炎耶爾森菌分布調查

李洪民 ，趙嘉詠， 張勝勇，黃麗莉， 王德祥， 趙長民，夏勝利

2009-2012年登封市小腸結腸炎耶爾森菌分布調查

李洪民1，趙嘉詠2， 張勝勇1，黃麗莉2， 王德祥1， 趙長民3，夏勝利2

目的 調查登封地區家畜家禽小腸結腸炎耶爾森菌感染狀況。方法 采集家畜家禽新鮮糞便分離小腸結腸炎耶爾森菌，對分離菌株進行生化鑒定、血清分型、生物分型及毒力基因檢測。結果 從1 285份糞便標本中共檢出105株，檢出率8.17%。其中狗17株(17.35%)；豬35株(13.62%)；檢出O∶3血清型12株(13.48%)， O∶5血清型12株(13.48%)，O∶8血清型14株(15.73%)；Ail+、ystA+、yadA+、virF+的菌株占12.36%，ystB+ 的菌株占42.70%。結論 登封市家禽家畜普遍攜帶小腸結腸炎耶爾森菌，主要動物宿主為豬和狗，是小腸結腸炎耶爾森菌人獸共患感染性腹瀉病的重要傳染源。

小腸結腸炎耶爾森菌；血清分型；生物分型；毒力基因

小腸結腸炎耶爾森菌(Yersiniaenterocolitica)是一類人獸共患性病原菌，廣泛分布于自然界中，尤其是各種動物宿主[1-3](家畜、家禽、嚙齒動物等)。該菌還是重要的食源性致病菌，很多國家和地區已將該菌列為常規的進、出口食品檢測項目。我國在20世紀80年代中期發生2次大的流行，有500人相繼感染該菌[4-5]。因此在我市家畜家禽中進行該菌的病原生物學監測，有著重要的意義。

1 材料與方法

1.1 2009-2012年，在我市各鄉鎮共采集家畜家禽糞便標本1 285份。其中，采集雞糞516份、豬糞256份、羊糞177份、牛糞146份、狗糞98份、兔糞46份、鴨糞17份、其他動物糞便28份。

1.2 菌株分離 將我市所采集的標本于4 ℃冷增菌培養，分別于7 d、14 d、21 d轉種耶爾森菌選擇性培養基,置于25 ℃培養24～36 h,挑取疑似菌落3～5個，分別轉種克氏雙糖(KIA)斜面和動力/靛基質/尿素半固體培養基，置于25 ℃培養24 h。選擇K/A、不產氣、H2S-、尿素酶+、25 ℃培養動力+、37℃培養動力-、靛基質+/-、鏡檢為革蘭陰性桿菌或球桿菌菌落,使用API 20E生化板條進行系統生化鑒定。

1.3 生物分型 參照參考文獻[6]的生物分型方法進行。

1.4 血清分型 通過玻片凝集試驗對鑒定結果為小腸結腸炎耶爾森菌的菌株進行血清學分型，并設鹽水對照。

1.5 PCR 用多重PCR檢測技術對小腸結腸炎耶爾森菌粘附侵襲點基因(ail)、耐熱性腸毒素基因(ystA)、生物1A型攜帶的腸毒素基因(ystB)、粘附素(yadA)、yop調節子轉錄活化作用因子(virF)等進行檢測。PCR產物用1.5%瓊脂糖凝膠電泳分離(170V，30 min),參照參考文獻[1]。

2 結 果

2.1 宿主分布 1 285份糞便標本檢出小腸結腸炎耶爾森菌105株，總檢出率8.17%。各種家禽家畜糞便細菌檢出情況分別為：豬35株，檢出率13.62%；雞33株，檢出率6.40%；狗17株，檢出率17.35%；牛10株，檢出率6.85%；羊6株，檢出率3.39%；兔2株，檢出率4.35%。其他動物2株，檢出率7.14%。

2.2 血清型分布 89株檢出菌中，O∶3血清型12株(13.48%)，O∶5血清型12株(13.48%)，O∶8血清型14株(15.73%)，未定型51株(57.30%)。各宿主動物攜帶菌血清型詳見表1。

表1 2009-2012年小腸結腸炎耶爾森菌血清學分型及生物學分型

注：弗氏耶爾森菌、克氏耶爾森菌有16株。

Note:YersiniafrederikseniiandYersiniakristenseniihave 16 strains.

2.3 生物型分布 2009—2012年各種家畜家禽的糞便檢出菌中，生物學分型以1A型為主，有74株，占83.15%(詳見表1)。

2.4 毒力基因 攜帶ail+、ystA+、ystB-、yadA+、virF+基因的菌株有11株(12.36%)，ail-、ystA-、ystB+、yadA-、virF-基因的菌株有38株(42.70%)，ail-、ystA-、ystB-、yadA-、virF-基因的菌株有40株(44.94%)。

3 討 論

3.1 小腸結腸炎耶爾森菌是一種在世界各地均有發現并危害嚴重的食源性致病菌，無論在發達國家還是發展中國家都有非常高的流行性[7]，已被列入多個國家出入境檢疫的常規項目。小腸結腸炎耶爾森菌廣泛分布于自然界中，尤其是各種家畜家禽。在我市采集的1 285份糞便標本中，豬、狗、雞、牛、兔、羊等多種家畜家禽中均有檢出小腸結腸炎耶爾森菌。這一結果與文獻資料基本相符[7]。各種動物宿主的檢出率各不相同，狗的檢出率最高(17.35%)，其次是豬(13.62%)。狗和豬為小腸結腸炎耶爾森菌主要宿主，這一結果與相關文獻[2，8]相符。在此基礎上我們對豬做了進一步的研究，分別采集屠宰場生豬咽拭子以及屠宰場生豬肛內容物作為研究樣本，該研究結果另文報道。

3.2 小腸結腸炎耶爾森菌是一種食源性傳染菌，主要通過糞-口途徑相互傳播。我市家畜家禽養殖農戶多，而且以養豬戶最多。監測結果顯示豬的小腸結腸炎耶爾森菌帶菌率相對較高。因此在我市人群生活環境中存在小腸結腸炎耶爾森菌“傳染源-傳播途徑-易感人群”傳播鏈，具有引起暴發流行的潛在危險。

3.3 小腸結腸炎耶爾森菌的血清型眾多，國內已報道了58個[8-9]。目前的研究認為僅有少數幾種血清型為致病性菌株，其中O∶3血清型為最常見的一種[10-11]。我們的研究結果顯示O∶3、O∶5血清型各占13.48%， O∶8血清型占15.73%，顯示致病性小腸結腸炎耶爾森菌在我市區仍有較高的攜帶率，提示我們應該加強監測，預防小腸結腸炎耶爾森菌病在動物間和人間造成感染和暴發流行。

3.4 毒力基因檢測顯示，我市家畜家禽小腸結腸炎耶爾森菌攜帶致病毒力基因的占12.36%，具有感染人群的潛在危險。攜帶ystB非致病性毒力基因的占42.70%。相關文獻報道攜帶ystB非致病毒力基因菌株引起流行的事件。因此，我們在今后的防控工作中應重視該環節，加大對養殖農戶的相關衛生知識宣傳，做好個人防護工作。

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Investigation on distribution ofYersiniaenterocoliticain Dengfeng from 2009 to 2012

LI Hong-min1,ZHAO Jia-yong2,ZHANG Sheng-yong1, HUANG Li-li2,WANG De-xiang1,ZHAO Chang-min3,XIA Sheng-li2

(1.DengfengCenterforDiseaseControlandPrevention,Dengfeng452470,China; 2.HenanProvincialCenterforDiseaseControlandPrevention,Zhengzhou450016,China; 3.ZhengzhouEnvironmentalProtectionMonitoringCenter,Zhengzhou450016,China)

To investigate the infection ofYersiniaenterocoliticain Dengfeng City, the strains were isolated from livestock and poultry. The strains were detected with biochemiological methods, serological methods, and virulence genes were detected with PCR. A total of 105 strains ofYersiniaenterocoliticawere classified from 1 285 stool samples, the total isolation rate was 8.17%. Among the total isolated strains, 17 strains were classified from dogs with a rate of 17.35% and 35 strains from pigs with 13.62%. Twelve strains were O∶3 serotype (13.48%), 12 strains were O∶5(13.48%), and 14 strains were O∶8(15.73%).Ail+,ystA+,yadA+ andvirF+ accounted for 12.36%, andystB+ accounted for 42.70%. In conclusion, the pigs and dogs were important animal hosts, which may play the major role in humans' infection.

Yersiniaenterocolitica; serotype; biological type; toxicity gene

Xia Sheng-li, Email:xiasl@hncdc.com.cn

10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2015.03.020

“十二五重大專項”細菌性傳染病病原譜流行規律及變異研究(2013ZX10004203-002-002)

夏勝利， Email:xiasl@hncdc.com.cn

1.登封市衛生防疫站,登封 452470； 2.河南省疾病預防控制中心,鄭州 450016； 3.鄭州市環境保護監測中心站,鄭州 450007

R378

B

1002-2694(2015)03-0281-03

Supported by the 12thFive-Year Major National Science and Technology Projects of China (No. 2013ZX10004203-002-002)

2014-07-07；

2014-12-02