黃體酮保胎治療對不明原因復發性流產患者外周血輔助性T淋巴細胞17/調節性T淋巴細胞免疫失衡的影響研究

李維宏，牟曉玲

·論著·

黃體酮保胎治療對不明原因復發性流產患者外周血輔助性T淋巴細胞17/調節性T淋巴細胞免疫失衡的影響研究

李維宏，牟曉玲

目的評價不明原因復發性流產(URSA)患者黃體酮保胎治療前后外周血輔助性T淋巴細胞17 (Th17)/調節性T淋巴細胞(Treg)變化及其與妊娠結局的關系。方法選取2013年1月—2014年1月重慶醫科大學附屬第一醫院婦產科門診診治的URSA患者30例為URSA組，給予黃體酮20 mg/d肌肉注射治療，孕56 d行B超檢查確定有無胎心，根據妊娠結局分為保胎成功組22例和保胎失敗組8例。同時選擇同時期本院婦產科門診手術室收治的妊娠12周以內要求人工流產的正常早孕婦女15例作為對照組。采用流式細胞術檢測外周血單個核細胞(PBMC)中Th17和Treg數量;采用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)法檢測外周血清中白介素(IL)－4、IL－10、IL－17水平;采用反轉錄聚合酶鏈式反應(RT－PCR)法檢測PBMC中Th17、Treg轉錄因子維甲酸相關孤兒受體γt(RORγt)、叉頭翼狀螺旋轉錄因子3(FoxP3)mRNA表達水平。結果治療前，保胎成功組、保胎失敗組患者PBMC中Th17/CD4+細胞及Th17/Treg高于對照組，Treg/CD4+細胞低于對照組(P＜0．05);治療后，保胎失敗組患者PBMC中Th17/CD4

+細胞及Th17/Treg高于保胎成功組，Treg/CD4+細胞低于保胎成功組(P＜0．05)。治療前，保胎成功組、保胎失敗組患者外周血清中IL－4、IL－10水平低于對照組，IL－17水平及IL－17/IL－4、IL－17/IL－10高于對照組(P＜0．05);治療后，保胎失敗組患者外周血清中IL－4、IL－10水平低于保胎成功組，IL－17水平及IL－17/IL－4、IL－17/IL－10高于保胎成功組(P＜0．05)。治療前，保胎成功組、保胎失敗組患者PBMC中RORγtmRNA表達水平高于對照組，FoxP3 mRNA表達水平低于對照組(P＜0．05);治療后，保胎失敗組患者PBMC中RORγtmRNA表達水平高于保胎成功組，FoxP3 mRNA表達水平低于保胎成功組(P＜0．05)。結論URSA與Th17/Treg免疫平衡異常密切相關，黃體酮保胎治療可通過下調Th17/Treg及相應細胞因子水平，改善URSA患者的Th17/Treg免疫失衡而改善妊娠結局。

流產，習慣性;孕酮;T淋巴細胞，調節性;T淋巴細胞，輔助誘導

李維宏，牟曉玲．黃體酮保胎治療對不明原因復發性流產患者外周血輔助性T淋巴細胞17/調節性T淋巴細胞免疫失衡的影響研究［J］．中國全科醫學，2015，18(36):4444－4449．［www．chinagp．net］

LiWH，Mou XL．Effectof progesterone treatmenton Th17/Treg imbalance of peripheral blood in patientswith unexplained recurrent spontaneous abortion［J］．Chinese General Practice，2015，18(36)4444－4449．

不明原因復發性流產(unexplained recurrent spontaneous abortion，URSA)是一類常見的妊娠疾病，發病率高，與患者體內母胎免疫耐受異常密切相關。孕激素是維持妊娠最基本的激素，在妊娠的建立和維持中發揮重要的作用［1］。黃體酮是一類天然的孕激素，可以補充黃體功能，減少妊娠子宮的興奮性，調節母胎免疫環境［2］，是臨床保胎治療的主要手段。但臨床上URSA采用黃體酮保胎治療仍有部分保胎治療失敗，且原因不明［3－4］。研究發現，輔助性T淋巴細胞17(Th17)和調節性T淋巴細胞(Treg)在妊娠中發揮重要的免疫調節作用，與妊娠結局密切相關［5］。但Th17/Treg改變與保胎治療后妊娠結局的關系如何，其能否成為預測妊娠結局成功與否的標志物，目前尚未見相關報道。本研究旨在評價URSA患者黃體酮保胎治療前后及不同妊娠結局時外周血Th17/Treg的差異，評估Th17/Treg改變對預測臨床保胎治療妊娠結局的價值，為URSA的治療和預后評價提供新的理論依據和研究基礎。

1資料與方法

1．1臨床資料選取2013年1月—2014年1月重慶醫科大學附屬第一醫院婦產科門診診治的URSA患者30例為URSA組，年齡25～35歲。納入標準:(1)連續發生2次或2次以上早期自然流產，末次流產發生于1年以內;(2)夫婦雙方染色體檢查正常;(3)女方生殖道無畸形;(4)陰道、宮頸分泌物檢查排除生殖道感染;(5)Torch檢查陰性;(6)生殖內分泌激素測定正常;(7)抗磷脂抗體等自身免疫抗體陰性;(8)男方精液常規檢查正常;(9)未行免疫治療;(10)近3個月未使用激素類藥物。同時選擇同時期本院婦產科門診手術室收治的妊娠12周以內要求人工流產的正常早孕婦女15例作為對照組?；颊呔橥狻?/p>

1．2主要儀器和試劑黃體酮注射液購自天津金耀氨基酸有限公司(規格20 mg/ml，批號:120304);小鼠抗人PE－Cy7－CD4、異硫氰酸熒光素(FITC)－IL－17A、FITC－CD25、PE－叉頭翼狀螺旋轉錄因子3 (FoxP3)+單克隆抗體及相應的熒光標記同型對照抗體，流式固定液和破膜劑均購自eBioscience公司;淋巴細胞分離液購自達科為生物技術有限公司;人白介素(IL)－4、IL－10、IL－17酶聯免疫吸附試驗(ELISA)試劑盒購自R＆D公司;佛波酯、伊諾霉素和布雷菲德菌素A購自Sigma公司;TRNzol總RNA抽提試劑購自天根

本研究創新點:

不明原因復發性流產(URSA)是一類常見的妊娠病理狀態，嚴重影響患者的身心健康和家庭幸福。確定發病機制、找到治療的具體靶點是URSA的研究方向。黃體酮是傳統的保胎用藥，具有補充黃體功能、放松子宮、保護妊娠的作用，但并不是所有患者黃體酮治療有效。研究發現，輔助性T淋巴細胞17(Th17)、調節性T淋巴細胞(Treg)是一對重要的免疫細胞，在母胎免疫耐受中發揮重要的作用，Th17對妊娠不利，Treg可以保護妊娠，但Th17/Treg與妊娠結局有無相關性，黃體酮治療對Th17/Treg是否有影響，Th17/Treg是否可以預測保胎治療妊娠結局尚未見相關報道。本研究評價URSA患者黃體酮保胎治療前后及不同妊娠結局時外周血Th17/Treg的差異，發現Th17/Treg改變對臨床保胎治療妊娠結局的預測有重要價值，為進一步明確URSA的發病機制、URSA保胎治療的預后評價提供了新的研究基礎和理論依據。生化科技(北京)有限公司;PrimeScript反轉錄試劑盒購自Takara公司;引物均由上海英駿生物技術有限公司合成;酶標儀購自BIO－RAD公司(550型)，流式細胞儀購自Beckman公司(FACS Calibur and Cell Quest Pro型)。

1．3保胎治療及分組URSA患者發現停經32 d，尿人絨毛膜促性腺激素(HCG)(+)之日起，給予黃體酮20 mg/d肌肉注射治療，至孕56 d行B超檢查確定有無胎心。根據妊娠結局分為保胎成功組(B超檢查確定宮內活胎)和保胎失敗組(B超檢查發現無胎心)。記錄URSA患者基本情況及黃體酮保胎治療妊娠結局。

1．4標本收集URSA患者黃體酮保胎治療前后無菌采集肘靜脈血11 ml。1管8 m l，肝素抗凝，采用淋巴細胞分離液分離外周血單個核細胞(PBMC)，采用磷酸鹽緩沖液(PBS)調整細胞濃度后進行流式細胞術檢測。對照組患者不給藥，僅抽取術前的血液標本行相同處理后待測;另1管3 m l，全血不抗凝，6 000 r/min離心10 min(離心半徑為6 cm)，收集血清，－20℃保存待測血清細胞因子水平。

1．5流式細胞術檢測PBMC中Th17和Treg數量調整PBMC懸液濃度至1×107/m l，200μl/管。檢測Th17時需先加入終濃度為0．05 ng/L的佛波酯、1μmol/L的伊諾霉素和10 ng/L的布雷菲德菌素A，37℃、5%CO2培養箱孵育5 h。PBS洗滌后加入PE－Cy7－CD4單克隆抗體，4℃避光孵育30 min，洗滌、固定和破膜后再加入FITC－IL－17A單克隆抗體，4℃避光孵育20 min。檢測Treg時需先加入PE－Cy7－CD4、FITC－CD25單克隆抗體，4℃避光孵育30 min，洗滌、固定并破膜后加入PE－FoxP3+單克隆抗體，4℃避光孵育20 min。采用相應熒光標記的同型對照IgG1染色細胞作為陰性對照，以上處理好的細胞均用PBS反復洗滌3次后重懸為500 μl/管，樣品置流式細胞儀檢測CD4+IL－17A+細胞和CD4+CD25+FoxP3+細胞占CD4+細胞的比例。

1．6 ELISA法檢測血清IL－4、IL－10、IL－17水平參照ELISA試劑盒說明書，采用人IL－4、IL－10、IL－17 ELISA試劑盒檢測各組血清中IL－4、IL－10、IL－17水平，所有樣品設4個復孔。

1．7反轉錄聚合酶鏈式反應(RT－PCR)檢測Th17、Treg轉錄因子維甲酸相關孤兒受體γt(RORγt)、FoxP3 mRNA表達水平取各組PBMC懸液5×106/管，1 500 r/min離心5 min(離心半徑為6 cm)，棄上清液后加入1 m l TRNzol總RNA抽提試劑，參照TRNzol試劑說明書，提取PBMC中總RNA;瓊脂糖凝膠電泳及檢測RNA完整性及純度;按PrimeScript反轉錄試劑盒說明書反轉錄合成cDNA;PCR反應條件: 94℃預變性5 min;94℃30 s，59℃30 s，72℃30 s，共30個循環;72℃延伸10 min。引物序列如下: RORγt上游引物:5'－GGC TCC CTG GAT GAA TAG AAT G－3'，下游引物:5'－AGG CAG AGG CAG AAA ATG TAA AG－3'，產物大小190 bp;FoxP3上游引物: 5'－ATG CGA CCC CCT TTC ACC TAC－3'，下游引物: 5'－TGG CGG ATG GCG TTC TTC－3'，產物大小155 bp;β－actin上游引物:5'－CCC TGT ATG CCT CTG GTC－3'，下游引物:5'－GTC TTT ACG GAT GTC AAC G－3'，產物大小540 bp。PCR產物用1．5%瓊脂糖凝膠電泳，Quantity One圖像采集系統及分析軟件對電泳條帶進行分析處理，RORγt、FoxP3 mRNA相對表達水平用其條帶校正灰度值與β－actin校正灰度值之比表示。

1．8統計學方法采用SPSS19．0統計學軟件進行數據處理，計量資料以(±s)表示，兩組間比較采用t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用q檢驗。以P＜0．05為差異有統計學意義。

2結果

2．1兩組一般資料比較及URSA患者黃體酮保胎治療妊娠結局URSA組與對照組患者年齡、體質指數比較，差異均無統計學意義(P＞0．05，見表1)。URSA患者既往平均流產數為(3．7±1．2)次，經黃體酮保胎治療后，22例孕56 d時B超檢查發現有胎心，納入保胎成功組;8例B超檢查未發現胎心，納入保胎失敗組。

表1對照組與URSA組患者年齡、體質指數比較(x±s)Table 1 Comparison of age and bodymass index between control group and URSA group

2．2對照組與不同妊娠結局URSA組患者PBMC中Th17/CD4+細胞、Treg/CD4+細胞及Th17/Treg比較治療前，對照組、保胎成功組、保胎失敗組患者PBMC中Th17/CD4+細胞、Treg/CD4+細胞及Th17/Treg比較，差異均有統計學意義(P＜0．05);其中，保胎成功組、保胎失敗組患者PBMC中Th17/CD4+細胞及Th17/Treg高于對照組，Treg/CD4+細胞低于對照組，差異均有統計學意義(P＜0．05)。治療后，保胎失敗組患者PBMC中Th17/CD4+細胞及Th17/Treg高于保胎成功組，Treg /CD4+細胞低于保胎成功組，差異均有統計學意義(P＜0．05)。保胎成功組患者治療后PBMC中Th17/CD+4細胞及Th17/Treg低于治療前，Treg/CD4+細胞高于治療前，差異均有統計學意義(P＜0．05);保胎失敗組患者治療后PBMC中Th17/CD4+細胞、Treg/CD4+細胞、Th17/Treg與治療前比較，差異均無統計學意義(P＞0．05，見表2)。

2．3對照組與不同妊娠結局URSA組患者外周血清中IL－4、IL－10、IL－17水平及IL－17/IL－4、IL－17 /IL－10比較治療前，對照組、保胎成功組、保胎失敗組患者外周血清中IL－4、IL－10、IL－17水平及IL－17/IL－4、IL－17/IL－10比較，差異均有統計學意義(P＜0．05);其中，保胎成功組、保胎失敗組患者外周血清中IL－4、IL－10水平低于對照組，IL－17水平及IL－17/IL－4、IL－17/IL－10高于對照組，差異均有統計學意義(P＜0．05)。治療后，保胎失敗組患者外周血清中IL－4、IL－10水平低于保胎成功組，IL－17水平及IL－17/IL－4、IL－17/IL－10高于保胎成功組，差異均有統計學意義(P＜0．05)。保胎成功組患者治療后外周血清中IL－4、IL－10水平高于治療前，IL－17水平及IL－17/IL－4、IL－17/IL－10低于治療前，差異均有統計學意義(P＜0．05);保胎失敗組患者治療后外周血清中IL－4、IL－10、IL－17水平及IL－17/IL－4、IL－17/IL－10與治療前比較，差異均無統計學意義(P＞0．05，見表3)。

2．4對照組與不同妊娠結局URSA組患者PBMC中Th17/Treg轉錄因子RORγt、FoxP3 mRNA表達水平比較治療前，對照組、保胎成功組、保胎失敗組患者PBMC中Th17/Treg轉錄因子RORγt、FoxP3 mRNA表達水平比較，差異均有統計學意義(P＜0．05);其中，保胎成功組、保胎失敗組患者PBMC中Th17/Treg轉錄因子RORγtmRNA表達水平高于對照組，FoxP3 mRNA表達水平低于對照組，差異均有統計學意義(P＜0．05)。治療后，保胎失敗組患者PBMC中Th17/Treg轉錄因子RORγtmRNA表達水平高于保胎成功組，FoxP3 mRNA表達水平低于保胎成功組，差異均有統計學意義(P＜0．05)。保胎成功組患者治療后PBMC中Th17/Treg轉錄因子RORγt mRNA表達水平低于治療前，FoxP3 mRNA表達水平高于治療前，差異均有統計學意義(P＜0．05);保胎失敗組患者治療后PBMC中Th17/Treg轉錄因子RORγt、FoxP3 mRNA表達水平與治療前比較，差異均無統計學意義(P＞0．05，見表4、圖1)。

表2對照組與不同妊娠結局URSA組患者PBMC中Th17/CD4+細胞、Treg/CD4+細胞及Th17/Treg比較(x±s)Table2 Comparison of Th17/CD4+cells，Treg/CD4+cells and Th17/Treg in PBMC between control group and URSA groups with different pregnancy outcomes

表3對照組與不同妊娠結局URSA組患者外周血清中IL－4、IL－10、IL－17水平及IL－17/IL－4、IL－17/IL－10比較(x±s)Table 3 Comparison of IL－4，IL－10，IL－17 levels and IL－17/IL－4，IL－17/IL－10 in the serum between control group and URSA groups with different pregnancy outcomes

表4對照組與不同妊娠結局URSA組患者PBMC中Th17、Treg轉錄因子RORγt、FoxP3 mRNA表達水平比較(x±s)Table 4 Comparison of expression of Th17 and Treg transcription factor RORγt and FoxP3 mRNA in PBMC between control group and URSA groups with different pregnancy outcomes

圖1 RT－PCR法檢測Th17、Treg轉錄因子RORγt、FoxP3 mRNA表達水平Figure 1 Expression of Th17 and Treg transcripation factor RORγt and FoxP3 mRNA by RT－PCR

3討論

正常生理妊娠類似于同種半異體移植，作為同種半異體移植物的胚胎能在母體內存活并發育，胎兒所攜帶的父系抗原刺激母體免疫系統，產生免疫應答，如果母體對胚胎的免疫耐受出現異常，則誘發母體對胚胎的排斥反應，如果這種排斥反應持續存在，就會發生URSA。

Treg是一類特異性表達轉錄因子FoxP3，具有免疫負性調節功能的CD4+細胞，可通過細胞間接觸抑制及分泌抑制性細胞因子等途徑發揮抗炎和維持自身免疫耐受的作用［6］。Treg所介導的免疫抑制在母體免疫耐受中起關鍵作用，Treg在數量和功能上的缺陷有可能導致URSA，對母體免疫耐受的維持有重要意義［7］。Th17是一種具有IL－23依賴性分泌IL－17的Th細胞亞群，具有很強的促炎作用，其被認為與免疫性疾病密切相關［8－9］，與Treg存在復雜的相互關系［10］。RORγt是IL－17細胞因子轉錄所必需的，是Th17分化必不可少的轉錄因子。轉錄因子RORγt和FoxP3決定了Th17和 Treg分化方向。研究發現，URSA的發生與患者Th17/Treg免疫失衡密切相關，URSA患者外周血和子宮蛻膜組織的Th17水平明顯升高而Treg水平明顯降低［11］，提示Th17/Treg免疫平衡在妊娠中發揮重要的作用，是誘導母體免疫耐受、保護妊娠的重要環節［10］。

黃體酮是一類天然的孕激素，具有保胎作用，在臨床廣泛應用［12－13］。Maeda等［14］報道，黃體酮可以使URSA患者外周血PBMC中Th1型細胞因子分泌降低，Th2型細胞因子分泌增加，發揮妊娠保護作用，但黃體酮保胎治療是否會引起Th17/Treg的改變和Th17/Treg改變是否與黃體酮保胎治療妊娠結局密切相關目前尚未見相關報道。

本研究結果顯示，治療前，保胎成功組、保胎失敗組患者PBMC中Th17/CD4+細胞、Th17/Treg、外周血清中IL－17水平及IL－17/IL－4、IL－17/IL－10高于對照組，PBMC中Treg/CD4+細胞、外周血清中IL－4、IL－10水平低于對照組;治療后，保胎失敗組患者PBMC中Th17/CD4+細胞及Th17/Treg、外周血清中IL－17水平及IL－17/IL－4、IL－17/IL－10高于保胎成功組，PBMC中Treg/CD4+細胞、外周血清中IL－4、IL－10水平低于保胎成功組。URSA患者Th17及相關細胞因子較對照組患者明顯增加，Treg及相關細胞因子水平較對照組患者明顯降低，黃體酮保胎治療后URSA患者外周血清中Th17/Treg改變與妊娠結局密切相關。上述結果與Singh等［11］和La Rocca等［15］的文獻報道相符，提示URSA患者外周血清中存在Th17/Treg免疫失衡，主要表現在Th17水平升高，Treg水平降低，Th17/Treg上調。

本研究結果進一步證實，黃體酮保胎成功組患者Th17及IL－17水平較治療前明顯下降，Treg及IL－4、IL－10水平較治療前明顯升高，Th17/Treg明顯下調，并伴隨FoxP3 mRNA表達水平的增加和RORγtmRNA水平的降低;另一方面，黃體酮保胎失敗組患者Th17/Treg及相應細胞因子與治療前無差異，Treg轉錄因子FoxP3 mRNA表達水平和Th17轉錄因子RORγtmRNA表達水平也顯示與治療前無差異。上述實驗結果再次證實了Th17、Treg參與了URSA的發生，同時進一步表明，黃體酮保胎治療可以引起URSA患者Th17/Treg的改變，主要表現為降低Th17水平和相應的細胞因子IL－17水平，并升高Treg水平和相關細胞因子IL－4、IL－10水平，從而降低Th17/Treg，恢復URSA患者的Th17/Treg免疫平衡。

本研究同時提示，治療后，保胎失敗組患者Th17 /Treg、IL－17/IL－4、IL－17 3種指標高于保胎成功組，且治療后與治療前比較無差異，提示保胎治療后URSA患者的Th17/Treg免疫平衡與保胎治療妊娠結局密切相關，只有明顯降低Th17水平，升高Treg水平，恢復URSA患者外周血中異常升高的Th17/Treg，才能有效降低患者的流產率，改善妊娠結局。降低Th17/Treg可能是未來保胎治療的方向，其內在機制值得進一步探討。

綜上所述，外周血清Treg水平降低，會使母體對胚胎的免疫耐受降低，同時Th17水平增加，使母體對胚胎的免疫排斥增強導致妊娠失敗。黃體酮可以通過下調Th17/Treg，使具有流產傾向妊娠婦女體內母胎免疫耐受增強，降低流產率。Th17/Treg對妊娠結局具有一定的預測價值，但黃體酮是如何參與Th17/Treg的調控在本研究未展開探討，一些信號轉導通路有待進一步研究。

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(本文編輯:陳素芳)

·世界全科醫學工作瞭望·

標準·方案·指南——美國心臟病學會(AHA)川崎病診斷指南

主要臨床表現

發熱持續5 d以上并伴有下列5項主要特點中的至少4項者:(1)四肢的變化:在急性期，手足的紅斑和水腫，在康復期，指尖的膜狀脫屑; (2)多形性皮疹;(3)不伴有滲出液的雙側無痛性球結膜充血;(4)口唇和口腔的變化:口唇潮紅和皸裂，草莓舌，口腔和咽部黏膜彌漫性發紅;(5)頸部淋巴結腫脹(直徑≥1．5 cm)，通常為單側。

注:發熱伴上述主要臨床表現不足4項者，若二維超聲心動圖或冠狀動脈造影發現冠狀動脈疾病，可診斷為川崎病。應當排除其他疾病，需注意，某些患兒雖然未滿足上述診斷標準，也可發展為冠狀動脈瘤。許多專家認為，在臨床表現典型的情況下，有經驗的醫生能在發熱到5 d之前，即做出川崎病的診斷。

(摘自《嶺南心血管病雜志》)

Effect of Progesterone Treatment on Th17/Treg Imbalance of Peripheral Blood in PatientsW ith Unexplained Recurrent Spontaneous Abortion

LIWei－hong，MOU Xiao－ling．Department of Gynaecology and Obstetrics，the First Affiliated Hospital of Chongqing Medical University，Chongqing 400016，China

ObjectiveTo evaluate the changes of Th17/Treg in peripheral blood of unexplained recurrent spontaneous abortion(URSA)patients treated by progesterone and its relationship with pregnancy outcomes．Methods At total of 30 URSA patientswho

treatment in Obstetrics and Ggynecology Outpatient Clinic of the First Affiliated Hospital of Chongqing Medical University from January 2013 to January 2014 and 15 normal early pregnancy patients who accepted induced abortion at the same period as controlgroup were included in the study．On URSA patients，progesterone of20mg/d was administrated and B－ultrasound was taken to determine the fetal heart at56 day of pregnancy，According the pregnancy outcomes，URSA patients were classified into successful treatmentgroup(n=22)and failure treatmentgroup(n=8)．The numbersof Th17 and Treg cells inmononuclear cells in peripheral blood(PBMC)were detected by flow cytometry;the levels of serum IL－4，IL－10，IL－17levelwere observed by ELISA;the expressions of transcription factor RORγt and FoxP3 mRNA were detected by RT－PCR．Results The ratios of Th17/CD4+cells and Th17/Treg in URSA patients before progesterone treatmentwere significantly higher and the ratio of Treg/CD4+cellswas significantly lower than the control group(P＜0．05)．The ratios of Th17/CD4+cells and Th17/Treg in failure treatment group after treatmentwere significantly higher than successful treatment group，while Treg/CD+4cells was significantly lower than the successful treatment group(P＜0．05)．Serum IL－4 and IL－10 levels were obviously lower and IL－17 level，the ratios of IL－17/IL－4 and IL－17/IL－10 were significantly higher in URSA patients before progesterone treatment than the control group．After treatment，the levels of IL－4 and IL－10 in failure treatment group were significantly lower than the successful treatment group(P＜0．05)and IL－17 level，the ratios of IL－17/IL－4 and IL－17 /IL－10 were significantly higher than the successful treatment group(P＜0．05)．In URSA patients，expression of RORγt mRNA was significantly higher and FoxP3mRNA level expression was significantly lower than the control group before treatment，while after treatment，expression of RORγtmRNA was higher and FoxP3 mRNA level expression was lower in failure group than in successful group(P＜0．05)．Conclusion URSA is closely related to the Th17/Treg balance．Progesterone treatment can ameliorate Th17/Treg imbalance and improve pregnancy outcome by downregulating the ratio of Th17/Treg cell number and the corresponding cytokine level．

Abortion，habitual;Progesterone;T－lymphocytes，regulatory;T－lymphocytes，helper－inducer

R 714．21

A

10．3969/j．issn．1007－9572．2015．36．009

2015－02－17;

2015－11－05)

重慶市衛生局醫學科研項目(2012－2－029)

400016重慶市，重慶醫科大學附屬第一醫院婦產科

李維宏，400016重慶市，重慶醫科大學附屬第一醫院婦產科;E－mail:liweihong_1211@yahoo．com