普拉克索片在健康人體的藥動學研究及安全性評價

張云軒 陳笑艷 施孝金 盧家紅 鐘大放 鐘明康

(1復旦大學附屬華山醫院藥劑科 上海 200040;2復旦大學附屬華東醫院藥劑科 上海 200040;3上海藥物代謝研究中心 上海 201203;4復旦大學附屬華山醫院神經內科 上海 200040)

普拉克索片在健康人體的藥動學研究及安全性評價

張云軒1,2陳笑艷3施孝金1△盧家紅4鐘大放3鐘明康1

(1復旦大學附屬華山醫院藥劑科 上海 200040;2復旦大學附屬華東醫院藥劑科 上海 200040;3上海藥物代謝研究中心 上海 201203;4復旦大學附屬華山醫院神經內科 上海 200040)

目的 研究健康受試者口服0.125 mg和0.25 mg普拉克索片的藥動學過程,并評價該制劑的安全性,為注冊治療不寧腿綜合征(restless leg syndrome,RLS)提供藥動學依據。方法 采用隨機、開放、雙向交叉試驗設計,12名健康受試者(男女各半)分兩個階段分別進行單次口服普拉克索片0.125 mg和0.25 mg的藥動學試驗,兩次給藥間隔13天,每次給藥前及給藥后采集血樣,采用液相色譜-串聯質譜聯用法(LC-MS/MS)測定健康受試者給藥后血漿中普拉克索的濃度。采用WinNonlin (R) 6.0版軟件計算普拉克索片的藥動學參數(AUC0-t、AUC0-∞﹑ρmax﹑tmax﹑t1/2﹑CL/F等)。整個試驗過程進行全面安全性評估。結果 單次口服普拉克索片0.125 mg和0.25 mg后,ρmax分別為(237±83) μg/L和(493±155) μg/L,tmax分別為(1.71±1.64) h和(1.21±1.01) h,t1/2分別為(6.12±2.21) h和(7.27±2.17) h,AUC0-∞分別為(1 791±765) μg·h·L-1和(4 419±1 932) μg·h·L-1,不同性別的藥動學參數差異無統計學意義(P>0.05).試驗過程無嚴重不良事件發生。結論 單次口服0.125 mg或 0.25 mg普拉克索吸收很快,吸收程度隨劑量增加而增加,藥動學過程不受性別影響.本研究制劑安全性較好,可按試驗劑量給藥治療RLS。

普拉克索; 藥動學; 安全性; 液相色譜-串聯質譜聯用法(LC-MS/MS); 不寧腿綜合征(RLS)

普拉克索是一種非麥角類多巴胺激動劑[1],最初的適應證是治療特發性帕金森病的體征和癥狀,現在研究發現還可有效治療不寧腿綜合征(restless leg syndrome,RLS),歐洲、北美已注冊用于RLS的治療[2],但有報道低血壓,嗜睡,性欲亢進和病態賭博等不良事件[3]。日本在健康男性中做了普拉克索單次給藥0.1、0.2和0.3 mg的藥動學和安全性研究[4],發現0.3 mg以內劑量單次給藥時安全耐受性好。芬蘭進行的一項為期3周的隨機、雙盲、安慰劑對照試驗則證實0.125 mg和0.25 mg為臨床治療RLS癥狀的有效劑量[5]。因此本試驗選擇0.125 mg和0.25 mg作為研究劑量組,并以液相色譜-串聯質譜聯用法(LC-MS/MS)方法測定12名健康中國受試者(男女各半)口服普拉克索片的血藥濃度[6],研究藥動學過程,并進行安全性評價,為本藥物在中國注冊和臨床治療RLS提供藥動學依據,并提高普拉克索在中國人群中藥動學的認識。

資 料 和 方 法

受試者選擇 選擇12名健康志愿者,男女各半,平均年齡(25±5)歲,身高(1.675±0.062) m,體重(60.8±6.1) kg,經體檢證明肝、腎功能正常,心電圖正常,均符合受試者入選要求。試驗前12人均簽署知情同意書,試驗方案經復旦大學附屬華山醫院倫理委員會批準。

試驗藥物與試劑 普拉克索片(批號:806807,規格:0.125 mg,);普拉克索片(批號:807017,規格:0.25 mg,)。普拉克索對照品(批號:1018351/0006,純度:93.6%),以上藥物均為上海勃林格殷格翰藥業有限公司產品。內標石杉堿甲對照品(批號:100243-200401,純度:100%,中國藥品生物制品檢定所)。乙醚、二氯甲烷和氫氧化鈉(AR純),甲醇、乙腈、醋酸銨和甲酸(HPLC級),水( 法國 Millipore 純水器制備),人空白血漿 (復旦大學附屬華山醫院血庫提供)。

儀器 Agilent 1100高效液相色譜(美國Agilent 公司),TSQ Quantum Ultra 型三重四極桿串聯質譜儀(美國Thermo Finnigan 公司),配備電噴霧離子源,Xcalibur 2.0.7 軟件(美國Thermo Finnigan 公司),色譜柱為Venusil ASB-C18柱( 4.6 mm×150 mm,5 μm,天津艾杰爾公司),預柱為C18柱( 4.0 mm×3.0 mm,5 μm,美國Phenomenex公司)。

分組及血漿樣品采集 12名中國健康受試者以1∶1隨機分為2組,采用開放、雙向交叉設計,試驗分2個階段進行。受試者入組后,于次日清晨空腹口服試驗藥物0.125 mg 或 0.25 mg,于給藥前1h及給藥后0.25、0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0、6.0、8.0、12.0、16.0、24.0、36.0、48.0 h分別抽取靜脈血5 mL,置于肝素化離心管中,離心(12 000×g,10 min)分離血漿,于-20 ℃保存待測。受試者經13天清洗期,于清晨再次空腹口服試驗藥物0.25 mg或0.125 mg,血漿樣本的獲取時間和方法同第1階段。

普拉克索的LC-MS/MS測定方法 精密吸取500 μL血漿樣品,加入25 μL 內標工作液(20 μg/L)、50 μL甲醇-水溶液( 50∶50,v/v)和0.1 mol/L的NaOH溶液100 μL,混勻。加3.5 mL萃取劑(乙醚:二氯甲烷( 3∶2,v/v),渦流混合1.5 min,往復振蕩15 min (240次/min),12 000×g高速離心5 min,移取全部上層有機相,40 ℃空氣吹干,流動相:乙腈-10 mmoL/L醋酸銨-甲酸(60∶40∶0.1,v/v/v)復溶,取20 μL進行LC-MS/MS分析。流速0.5 mL/min;柱溫25 ℃。

采用電噴霧離子源正離子模式,質譜掃描方式為選擇反應監測,分別測定普拉克索正離子m/z212-,m/z111+,126+,153+,石杉堿甲正離子m/z243-,m/z210+,前者為準分子離子峰,后者為峰度較強的碎片離子,作為定量監測的產物離子。

本法測定血漿中普拉克索的線性范圍為5.92～740 μg/L,定量下限(LLOQ)為5.92 μg/L。高、中、低濃度的普拉克索和內標的提取回收率均>90%,絕對基質效應在90%～110%。用6個不同人空白血漿考察方法的基質效應,相對標準偏差(RSD)<12%。方法測定準確度為98%～103%,日內、日間RSD均<10%。另用來自同一受試者的生物樣品在同一批中測定,每次測定時建立新的標準曲線,并隨時測定高、中、低3個濃度的質控樣品,考察普拉克索血漿樣品室溫放置2 h 的穩定性、經液-液萃取后在室溫放置 24 h 的穩定性、血漿樣品經歷3次冷凍-解凍循環的穩定性和血漿樣品-20 ℃ 放置58 天的穩定性等。結果顯示方法的特異性、準確性、靈敏度、穩定性等技術指標均滿足SFDA頒布的《化學藥物臨床藥動學研究技術指導原則》中關于臨床藥物代謝藥動學研究體內藥物分析的方法學的技術要求和本試驗研究藥物的測定需求。

藥動學研究 本試驗采用WinNonlin (R) 6.0版軟件計算普拉克索片的藥動學參數。

安全性評價 整個試驗過程由神經內科醫師進行臨床監護,并進行全面的安全性評估,包括生命體征,心電圖檢查,實驗室檢查和不良事件等。

結 果

藥動學研究 12名健康受試者單次口服普拉克索0.125 mg和0.25 mg后的平均血漿濃度-時間曲線見圖1,計算所得藥代動力學參數見表1。

表1 單劑量雙向交叉試驗中口服普拉克索片0.125 mg和0.25 mg后普拉克索片的藥動學參數Tab 1 Pharmacokinetic parameters in a 2-period single dose crossover study of tablets containing 0.125 mg and 0.25 mg pramipexole

圖1 單劑量雙向交叉試驗中12名健康受試者口服0.125 mg或0.25 mg普拉克索片后的平均血藥濃度-時間曲線Fig 1 Mean plasma concentration-time curves of a 2-period single dose crossover study of tablets containing 0.125 mg and 0.25 mg pramipexole to 12 healthy volunteers

藥代動力學分析結果顯示,單次口服普拉克索可以很快達到一定的血藥濃度,且ρmax和AUC隨劑量增加而增加,顯示進入體循環的藥量隨著給藥劑量的增加而增加。男女受試者的各主要藥動學參數之間的差異均無統計學意義(P>0.05)。

安全性分析 本試驗過程無嚴重不良事件發生,0.125 mg組內1例出現血壓下降、頭暈及冷汗、1例女性受試者出現雙側乳房脹痛、1例出現I度房室傳導阻滯。0.25 mg組內1例發生血壓下降、頭暈及冷汗。其中與普拉克索有關的不良事件的程度均為輕度。所有不良事件均可自行緩解,并在研究結束之前消失。試驗期間監測受試者的生命體征,均未發現有臨床意義的異常變化。實驗室檢查心電圖、肝腎功能等均未見明顯異常。

討 論

RLS是一種獨特的感覺運動異常癥,其特征為四肢深處的不適感,迫使人不斷運動以減輕休息時加劇的感覺異常,主要發生在傍晚和夜間,受累人群的生活和睡眠質量都會受到影響,是影響中年和老年人常見的疾病。考慮到RLS同時累及感覺和運動,包括脊髓運動的調節,很可能與大腦皮質層下的多巴胺系統相關。加拿大的一項對10個RLS患者的隨機、雙盲、安慰劑對照交叉試驗[7]發現,左旋多巴和溴隱亭只能控制部分癥狀,而普拉克索作為一種非麥角類多巴胺激動劑,能選擇性激動多巴胺D2受體,對D3受體親和力高,使患者感覺運動異常有所減輕,比同類型的羅匹尼羅更有效[8]。但既往研究顯示,可能發生以下不良作用:低血壓、嗜睡、性欲亢進和病態賭博等[3]。

本試驗選擇0.125 mg和0.25 mg作為研究劑量組,與臨床實踐中常用的治療RLS癥狀的有效劑量相一致。藥動學參數分析顯示,空腹給藥后受試者的普拉克索的AUC0-t均達到AUC0-∞的90%以上,說明本試驗測得的血藥濃度-時間曲線能較好描述所研究制劑的藥動學特征。試驗中單次給藥0.125 mg和0.25 mg普拉克索片在口服以后吸收迅速而完全,且進入體內的藥量隨劑量增加而遞增,0.25 mg組AUC和ρmax較0.125 mg劑量組分別升高了147%和108%,與國外研究結果一致[9]。另對男性和女性受試者藥動學參數的分析顯示,不同性別的普拉克索藥動學參數的差異無統計學意義(P>0.05),說明普拉克索的代謝不受性別影響。

試驗期間受試者的生命體征均未發現有臨床意義的異常變化,實驗室檢查心電圖、肝腎功能等均未見明顯異常,給藥后部分受試者出現血壓下降、頭暈及冷汗等預期不良事件,均為一過性并可自行緩解。0.125 mg組的1例房室傳導阻滯和1例乳房脹痛事件經研究者判斷為與試驗藥物相關,發生房室傳導阻滯的受試者在試驗過程中心電圖顯示PQ間期在0.21～0.24 s,為輕度異常值,且該名受試者在整個試驗過程中未出現任何不適;而在既往應用普拉克索時,極少有自發報告乳房脹痛事件。所有不良事件均在研究結束之前消失,試驗過程無嚴重不良事件發生,0.125 mg和0.25 mg普拉克索片劑的安全性較好,可用于臨床RLS的治療。

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Pharmacokinetics study and safety assessment of pramipexole tablets in healthy Chinese subjects

ZHANG Yun-xuan1,2, CHEN Xiao-yan3, SHI Xiao-jin1△, LU Jia-hong4, ZHONG Da-fang3, ZHONG Ming-kang1

(1DepartmentofPharmacy,HuashanHospital,FudanUniversity,Shanghai200040,China;2DepartmentofPharmacy,HuadongHospital,FudanUniversity,Shanghai200040,China;3CenterforDrugMetabolismandPharmacokineticsResearch,Shanghai201203,China;4DepartmentofNeurology,HuashanHospital,FudanUniversity,Shanghai200040,China)

Objective To investigate the pharmacokinetic properties and safety of a single dose of 0.125 mg and 0.25 mg of pramipexole tablets in healthy Chinese subjects for the registration of treating restless leg syndrome (RLS). Methods One single-dose,open-label,randomized and crossover study of oral pramipexole tablets was conducted in 12 healthy subjects (6 males,6 females) aged from 20 to 30 years,who were orally administrated pramipexole tablet 0.125 mg in fasted state.After a washout period of 13 days,the subjects were orally administrated another dose of 0.25 mg.Plasma samples were collected before and after each of 12 healthy subjects was given a tablet.Concentrations of pramipexole were determined by LC-MS/MS.Pharmacokinetic parameters (AUC0-t,AUC0-∞,ρmax,tmax,t1/2,CL/F,etal) of 0.125 mg and 0.25 mg dose groups were calculated with WinNonlin (R) Version 6.0.Safety assessment was performed throughout the experiment. Results The main pharmacokinetic parameters of 0.125 mg and 0.25 mg dose groups were as follows respectively:ρmax,(237±83) μg/L and (493±155) μg/L;tmax,(1.71±1.64) h and (1.21±1.01) h;t1/2,(6.12±2.21) h and (7.27±2.17) h;AUC0-∞,(1 791±765) μg·h·L-1and (4 419±1 932) μg·h·L-1.There was no significant difference in pharmacokinetic parameters between different gender (P>0.05). Conclusions Tablets containing 0.125 mg and 0.25 mg pramipexole are absorbed quickly,and the extent of absorption increases with the dose.The pharmacokinetic properties are not influenced by gender.It is safe to use the agent.The experiment doses for treating RLS can be recommended.

pramipexole; pharmacokinetics; safety; LC-MS/MS; restless leg syndrome (RLS)

R 969.1

A

10.3969/j.issn.1672-8467.2015.02.016

2014-09-01;編輯:王蔚)

△Corresponding author E-mail:xiaojin_shi@hotmail.com