干擾素誘導蛋白10在結核性腦膜炎診斷中的應用

楊紅 楊建蓉 陳碧桃 李明琴

（甘孜藏族自治州人民醫院傳染病院，四川 康定626000）

結核性腦膜炎（Tuberculous Meningitis，TBM）是肺外結核中最常見的臨床類型之一，死亡率和致殘率較高。近年來，利用結核桿菌特有抗原在體外刺激外周血細胞以檢測T細胞應答可作為結核分支桿菌（Mycobacterium tuberculosis，MTB）感染的診斷方法迅速發展，在國外已廣泛應用［1～3］。另外有文獻報道，干擾素誘導蛋白10 （interferon－inducible protein 10，IP－10）可作為一項新的指標用于結核性胸膜炎等的臨床診斷［4，5］。本研究通過ELISA法測定腦脊液中IP－10的濃度，并與IFN－γ的檢測結果相比較，探討其在結核性腦膜炎診斷中的應用價值。

1 資料與方法

1.1 研究對象 病例為2009年8月～2013年6月甘孜州人民醫院傳染病院收治的腦膜炎患者64例，其中結核性腦膜炎患者32例（結腦組），男19例，女13例，年齡21歲～64歲，平均年齡41.6歲，均符合結核性腦膜炎診斷標準［6］，患者均經抗結核治療有好轉或痊愈。非結核性腦膜炎患者32例（非結腦組）：其中化膿性腦膜炎15例，男9例，女6例，年齡21～62歲，平均年齡39.2歲，患者均經抗生素治療均痊愈出院；病毒性腦膜炎17例，男10例，女7例，年齡23～67歲，平均年齡43.5歲，患者經抗病毒藥物治療后均痊愈出院。所有診斷建立在病史、腦脊液檢查（細胞學、生化、微生物學）、頭顱CT及治療效果的基礎上。

1.2 方法 治療前采集腦脊液樣品，2500r／min離心5min，留取上清液5ml，－70℃凍存待測。采用ELISA法檢測受試者IP－10和IFN－γ濃度，測定過程嚴格按照產品說明書進行操作。試劑盒均為美國Cloud－Clone Corp公司產品。

1.3 統計學分析 數據以均數±標準差（±s）表示，由SPSS 17.0軟件分析處理。應用t檢驗進行統計學分析，P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 腦膜炎患者IP－10、IFN－γ水平的比較 結核性腦膜炎組中IP－10和IFN－γ的水平分別為（1164.06±450.23）pg／ml和（469.10±208.57）pg／ml，均顯著高于非結核性腦膜炎組IP－10和IFN－γ的水平（237.02±161.37）pg／ml和 （90.77±61.40）pg／ml（P＜0.001），見表1。

表1 兩組患者腦脊液中IP－10和IFN－γ含量測定結果Table 1 Levels of IP－10and IFN－γin cerebrospinal fluid

2.2 IP－10、IFN－γ診斷結核性腦膜炎的 ROC曲線分析 以敏感性為縱坐標、1－特異性為橫坐標繪制IP－10和IFN－γ的ROC曲線（見圖1）。SPSS 17.0計算IP－10的曲線下面積P＜0.001、95%CI＝0.839～1.000，IFN－γ的曲線下面積P＜0.001、95%CI＝0.925～1.000，IP－10與IFN－γ 的 ROC 曲 線 下 面 積 分別 為0.932和0.968，提示IP－10與IFN－γ對結核性腦膜炎的診斷效能相近，且兩者可信區間均不包括0.5，表明都對結核性腦膜炎有一定診斷價值。從ROC曲線得出IP－10和IFN－γ的診斷臨界值分別為605.63pg／ml和177.48pg／ml；取臨界值時，兩者診斷結核性腦膜炎的敏感性分別為87.5%和93.8%，特異性分別為96.9%和90.6%。

3 討論

結核性腦膜炎是結核病死亡的最主要原因之一。現在對于結核性腦膜炎的診斷仍依賴于腦脊液常規、生化結果結合典型的亞急性起病，有頭痛、嘔吐、發熱、腦膜刺激征陽性等臨床表現，缺乏高敏感性、高特異性的早期診斷檢測方法。歐美各國將早期分泌抗原靶－6（ESAT－6）和培養濾液蛋白10（CEP－10）兩個蛋白作為特異性刺激抗原體外檢測IFN－γ釋放水平診斷結核疾病已在臨床上得到廣泛應用［7］。

IP－10屬于趨化因子中CXC亞家族，又稱為CXCL10，可趨化單核細胞、T細胞和NK細胞等多種特異表達CXCR3受體的炎性細胞進入炎癥部位，進而介導Th1型炎癥疾病［8］。IP－10與冠心病、免疫性肝病等Th1型炎癥疾病關系密切。在抗結核免疫中，Th1型免疫應答占優勢，有研究表明肺結核患者血漿中IP－10的水平顯著高于健康對照［9］。

圖1 結核性腦膜炎IP－10和IFN－γ的ROC曲線Fig.1 The ROC curves of IP－10and IFN－γ

本試驗中結核性腦膜炎患者的IP－10含量為（1164.06±450.23）pg／ml，高于非結核性腦膜炎組（237.02±161.37）pg／ml，差 異 具有 顯 著性 （P＜0.001）；IP－10的 ROC曲線下面積95%可信區間為（0.839～1.000）；以IP－10≥605.63pg／ml為臨界值，其診斷結核性腦膜炎的敏感性為87.5%、特異性為96.9%，表明IP－10可作為結核性腦膜炎的診斷指標。IP－10與IFN－γ相比較，ROC曲線下面積分別為0.932和0.968，提示兩者對結核性腦膜炎的診斷效能相近。Okamoto［4］研究報道IP－10的檢測結核桿菌的效能與IFN－γ相近，與本研究結果一致。IP－10因子位于IFN－γ下游，由IFN－γ誘導表達，且升高幅度較IFN－γ更加明顯，Ruhwald等［10］研究表明，肺結核患者的血漿中IP－10的水平顯著高于IFN－γ。因此，對于IFN－γ升高不明顯未達診斷臨界值的病例，IP－10可能會具有更大的診斷作用［11］。

4 結論

本研究顯示，IP－10在結核性腦膜炎患者中的水平顯著高于非結核性腦膜炎，可作為兩者鑒別診斷的指標，且具有較高的敏感性和特異性。ROC曲線分析，提示IP－10的診斷效能與IFN－γ相近；但對于免疫反應較弱的患者，IP－10可能有更高的診斷價值。

［1］Ravn P，Munk M E，Andersen A B，etal.Prospective evalua－tion of a whole－blood test using Mycobacterium tuberculosis－specific antigens ESAT－6and CFP－10for diagnosis of active tuberculosis［J］.Clin Diagn Lab Immunol，2005，12（4）：491－496.

［2］Madariaga M G，Jalali Z，Swindells S.Clinical utility of interferon gamma assay in the diagnosis of tuberculosis［J］.J Am Board Fam Med，2007，20（6）：540－547.

［3］Lalvani A.Diagnosing tuberculosis infection in the 21st century：new tools to tackle an old enemy［J］.Chest，2007，131（6）：1898－1906.

［4］Okamoto M，Kawabe T，Iwasaki Y，etal.Evaluation of interferon－gamma inducing cytokines and interferon－gamma inducible chemokines in tuberculous pleural effusions ［J］.J Lab Clin Med，2005，145（2）：88－93.

［5］Supriya P，Chandrasekaran P，Das S D.Diagnostic utility of interferon－gamma－induced protein of 10kDa （IP－10）in tuberculous pleurisy［J］.Diagn Microbiol Infect Dis，2008，62（2）：186－192.

［6］Dignan F L，Evans S O，Ethell M E，etal.A nearly CT－diagnosis－based treatment strategy for invasive fungal infection in allogeneic transplant recipients using caspofung in first line：an ef－fective strategy with low mortality［J］.Bone Marrow Transplant，2009，44（1）：51－56.

［7］錢福初，何建方，沈軼群，等.γ－干擾素體外釋放試驗在結核性腦膜炎診斷中的應用［J］.中國衛生檢驗雜志，2012，22（5）：1037－1038，1041.

［8］Villatoro－Hernandez J，Loera－Arias M J，Gamez－Escobedo A，et al.Secretion of biologically active interferon－gamma inducible protein－10（IP－10）by Lactococcus lactis［J］.Microb Cell Fact，2008，7：22.

［9］Azzurri A，Sow O Y，Amedei A，etal.IFN－gamma－inducible protein 10and pentraxin 3plasma levels are tools for monitoring inflammation and disease activity in Mycobacterium tuberculosis infection［J］.Microbes Infect，2005，7：11－18.

［10］Ruhwald M，Bodmer T，Maier C，etal.Evaluating the potential of IP－10and MCP－2as biomarkers for the diagnosis of tuberculosis［J］.Eur Respir J，2008，32（6）：1607－1615.

［11］Whittaker E，Gordon A，Kampmann B.Is IP－10abetter biomarker for active and latent tuberculosis in children than IFN gamma［J］.PLoS One，2008，3（12）：3901.