不同炮制方法對天麻素及天麻苷元含量的影響

畢榮璐，倪兆武，李德勛，仇全雷，劉祥義△

（1.西南林業大學，云南昆明650224；2.昭通市食品藥品檢驗所，云南昭通657000；3.彝良小草壩野生天麻開發有限公司，云南彝良657600）

天麻（Gastrodia elata BL.）屬蘭科多年生草本植物的地下干燥塊莖[1]，主產于陜西、云南、貴州等地，其主要成分為天麻素、天麻苷元等酚類化合物及甾醇、核苷、有機酸、多糖等[2]，其中天麻素和天麻苷元為天麻中主要的藥用活性成分[3]。天麻素具有鎮靜、抗癲癇、鎮痛、安眠等作用[4]。天麻苷元與天麻素一樣亦具有鎮痛效果[5]。目前天麻最佳炮制的方法的考察多基于測定天麻素的含量[6-14]。本試驗將新鮮天麻樣品切片后稱重混勻，分別以直接曬干、煮制、蒸制、烘烤、冷凍干燥等不同處理方法對天麻切片進行處理，用HPLC 測定天麻素和天麻苷元的含量，旨在觀察天麻素和天麻苷元的動態平衡或二者之和總量不變的理論數據，同時為天麻的產后加工提供更科學有效的方法。

1 實驗設備與材料

1.1 主要設備

LC-2010AHT 高效液相色譜儀，日本島津公司；XPE-105 電子天平，梅特勒-托利多國際股份有限公司；DZF-6030B 型鼓風干燥箱，上海恒科公司；Biosafer-10B 臺式凍干機，賽飛（中國）有限公司；微型植物組織粉碎機，北京中興偉業儀器公司生產；美的微波爐，佛山市順德區美的微波電器制造有限公司；HH-S 恒溫水浴箱，鄭州長城科技公司。

1.2 材料

1.2.1 原料

烏天麻（新鮮）采自云南省昭通市彝良縣小草壩海子公社，采樣時間2014 年2 月18 日。

1.2.2 試劑

天麻素對照品（批號：ZL20110720A），南京澤朗醫藥科技有限公司；天麻苷元對照品（批號：ZL131022AN），南京澤朗醫藥科技有限公司；乙腈（色譜純），天津市科密歐化學試劑有限公司；水為娃哈哈純凈水，其余試劑均為市售分析純。

2 實驗內容與方法

2.1 色譜條件

按照2010 年版《中國藥典》天麻素含量測定方法測定[1]。色譜柱：色譜柱：MD-ODS C18柱（250mm×4.6mm，5μm），流動相：乙腈-0.05%磷酸溶液（3：97），檢測波長：220nm，流速：1.0mL/min，柱溫：40℃，進樣量：20μL.

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液的制備

取天麻素對照品0.150 0mg（純度：98.42%），加流動相定溶于100mL 量瓶中，配制成每mL 含147.63μg（147.63μg/mL）的標準品溶液，即得。

取天麻苷元對照品0.200mg（純度：98.35%），加流動相定溶于100mL 容量瓶中，配制成每mL 含196.70μg（196.70μg/mL）的標準品溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液制備

參照2010 版藥典方法對樣品進行處理[1]。取各試驗組天麻切片樣品（60℃真空干燥），粉碎，所有樣品過60 目篩，精密稱定2.0g，精密加入50%乙醇50mL，稱定重量，加熱回流3h，放冷再稱定重量，用提取溶劑補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液20mL 濃縮至近干，加入20%乙腈水溶液溶解，定溶于50mL 容量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，既得供試品溶液。

2.3 標準曲線的繪制

精密量取對照品天麻素和天麻苷元儲備液適量，加乙腈-水（3∶97）溶液制成每1mL 含天麻素118.10，88.58，59.05，29.53，9.84μg 的溶液和每1mL含天麻苷元196.71，98.35，49.18，19.67，9.84μg 的溶液，進樣量均為20μL，按含量測定方法測定峰面積，并以峰面積的積分值為縱坐標，對照品進樣量為很坐標建立標準曲線，計算回歸方程分別為Y天麻素=28 217 324.344 0x+76 239.371 4，r=0.999 7和Y天麻苷元=59 919 005.988 2x+27 037.854 9，r=0.999 8，天麻素在0.196 8μg～2.362 0μg 范圍內有良好的線性關系，天麻苷元在0.196 8μg～3.934 2μg范圍內有良好的線性關系。

2.4 精密度試驗

分 別 取CS天麻素=147.63μg/mL、CS天麻苷元=196.70μg/mL 對照品溶液，每次進樣量為20μL，重復進樣6 次，RSD 為1.02%和1.47%，精密度良好。

綜上所述，對人感染H7N9禽流感病毒患者實施CPT可以改善肺臟氣體交換功能，改善機體缺氧狀態；俯臥位通氣可使患者肺水腫情況得到改善，最終改善ARDS患者的氧合；CPT和俯臥位通氣可明顯改善患者的肺部通氣與換氣功能，但對血流動力學未產生不利影響。由于本研究病例數少，胸肺物理治療以及俯臥位通氣對人感染H7N9禽流患者的肺功能的預防改善作用以及遠期效果還需進一步臨床研究證實。

2.5 穩定性試驗

取水蒸7.5min 組供試品溶液室溫放置，分別于0，2，4，8，12h 進樣20μL，測定天麻素、天麻苷元吸收峰面積，計算RSD 值為1.97%和1.44%，表明供試品溶液在室溫下放置12h 穩定。

2.6 重復性試驗

分別稱取60℃干燥24h 后水蒸7.5min 組天麻樣品5 份，每份2.0g 精密稱定。按供試品溶液制備方法制備5 份供試品溶液，測定天麻素、天麻苷元吸收峰面積，計算RSD 值為2.17%和1.98%，表明該方法提取測定天麻素天麻苷元可行。

2.7 回收率試驗

分別精密稱取60℃干燥24h 后水蒸7.5min 組天麻樣品6 份，每份2.0g 精密稱定，一份加入50mL 50%乙醇作為對照組，其余5 份各精密加入50%乙醇40mL 并加入10mL 已知濃度的88.58μg/mL 的天麻素對照品溶液和98.35μg/mL 天麻苷元對照品溶液，按供試品溶液制備方法制備供試品溶液，測定天麻素和天麻苷元含量，計算回收率為97.07%和94.13%，RSD 值為1.72%和1.88%.

2.8 天麻炮制方法

取同一穴天麻大小相近的新鮮天麻分別切片，均勻分成16 份。

2.8.1 自然曬干

取1 份新鮮天麻切片直接在陽光下曬2d，自然風干，待用。

取3 份新鮮天麻切片分別放入沸水中煮2.5，5.0，7.5min，再于60℃烘箱熱風干燥，待用。

2.8.3 水蒸

取3 份新鮮天麻切片分別在蒸鍋上蒸制5.0，7.5，10.0min，再于60℃烘箱熱風干燥，待用。

2.8.4 微波炮制

取3 份新鮮天麻切片分別放于800W 功率下的微波爐里加熱30，60，90s，再于60℃烘箱熱風干燥，待用。

2.8.5 熱風干燥

取3 份新鮮天麻切片放于鼓風干燥箱里分別于110，115，120℃加熱10min 后，再于60℃烘箱熱風干燥，待處理。

取2 份新鮮天麻切片分別放于60℃鼓風干燥箱里烘干和60℃真空干燥箱里烘干，待用。

2.8.6 真空冷凍干燥

取1 份新鮮天麻切片，4℃預凍2h 后放入冷凍干燥機中48h，然后真空抽干，成粉末，待用。

3 結果與討論

3.1 結果

不同炮制方法天麻的外觀形態比較和天麻素、天麻苷元含量的測定結果見表1 以及圖1-3。

圖2 天麻苷元對照品色譜圖

圖3 天麻樣品色譜圖（微波30s）

表1 不同炮制方法天麻的外觀形態比較和天麻素、天麻苷元含量的測定結果

從表1 可以看出，用微波處理天麻切片30s 后，天麻中天麻素的含量最高，為1.71%；120℃熱風干燥10min 組天麻素含量最低。真空冷凍干燥處理后的天麻，天麻苷元含量最高，為2.50%.綜合天麻素和天麻苷元2 個指標（以天麻素為主）以及處理后天麻的外觀形態，微波處理30s 這種炮制方法為最佳，不經任何處理直接曬干的天麻炮制方式最次。考慮到生產中的實際條件，水蒸5min 可為生產提供參考依據。

3.2 討論

從結果可以看出，在水蒸3 種處理方式中，天麻素和天麻苷元基本處于平衡狀態，隨著時間的增加，天麻素含量逐漸降低，天麻苷元含量逐漸升高，且天麻素與天麻苷元含量之和差異不大。在這一點上微波處理60s 和微波處理90s，熱風110℃處理10min 和熱風115℃處理10min，包括水煮2.5min 和水煮5min 這3 組數據都有所體現。但是120℃熱風干燥10min 處理以及水煮7.5min 以后，天麻素和天麻苷元的含量都明顯降低，這說明天麻素和天麻苷元含量處于平衡狀態是基于同一種炮制方式一定時間段。水煮7.5min 組天麻樣品中天麻素和天麻苷元含量較2.5min 和5min 組樣品中天麻素天麻苷元含量下降明顯，可能是由于水煮時間過長，其天麻有效成分被煮出而造成損失。

炮制是我國傳統中醫藥體系的重要組成部分，不規范的炮制方法將導致中藥飲片質量的不穩定，嚴重影響中藥治療的效果[9]。本實驗研究結果表明，炮制方法對于天麻素和天麻苷元的含量有重要的影響。天麻中天麻素含量不穩定，同一地點采樣地點同一種炮制方法不同天麻個體測出的天麻素含量都不一樣，尤其以不同炮制方法對天麻素含量影響較大。本試驗為了避免前者對天麻素及其天麻苷元含量的影響，采樣時只取了同一地點，大小相近天麻切片均分為16 組，保證了每組天麻成分是一致的，這樣在探討不同炮制方法對天麻素及其天麻苷元含量的影響時結果就具有了較高的可信度。

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