肺結核合并糖尿病患者外周血中性粒細胞、單核細胞及血清IL-23、IL-22水平變化

李玉美，羅勇強，林東子，曾今誠

(1 東莞市第六人民醫院，廣東東莞 523008;2 廣東醫學院)

近年來糖尿病(DM)發病率持續上升，尤其是伴隨患者營養代謝障礙、機體免疫力低下等，極易繼發各種感染，特別是結核感染。肺結核合并糖尿病患者(PPTDM)根據臨床起病形式分為先患肺結核后患糖尿病(PTB-DM)和先患糖尿病后患肺結核(DM-PTB)兩種，預后不佳［1］。前期研究［2］發現，PPTDM起病形式不同血清細胞因子(如IL-17A和IL-23)水平存在差異，然而PPTDM血清細胞因子水平與外周血白細胞水平變化的關系少見報道。2013年6月～2014年1月，我們以PPTDM患者為研究對象，檢測患者外周血中性粒細胞和單核細胞、血清IL-23和IL-22水平，探討其在PPTDM發生、發展中的意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集新發肺結核患者30例(結核組)，男15例、女15 例，年齡(40.4 ±2.7)歲。PPTDM患者30例(PPTDM組)，男18例、女12例，年齡(40.7 ±2.5)歲;PTB-DM、DM-PTB 各 15 例。DM患者30例(DM組)，男15例、女15例，年齡(43.8±2.9)歲。肺結核診斷參考中華人民共和國肺結核診斷標準(WS 288-2008)，DM診斷參考1999年世界衛生組織頒布的DM診斷標準。以上病例均無其他免疫相關性或免疫性疾病或冠心病，且4個月內未使用過激素及免疫抑制劑。同時選取同期東莞市第六人民醫院體檢科健康志愿者30例為對照組，男15例、女15例，年齡(40.3±2.1)歲。四組性別、年齡具有可比性。

1.2 外周血中性粒細胞、單核細胞及血清IL-23、IL-22檢測 四組分別采用肝素抗凝管空腹采血2 mL，1500 r/min，離心5 min，收集上清 -80 ℃冰箱保存備用。外周血中性粒細胞和單核細胞檢測采用Sysmex XT-1800i全自動血球分析儀，以外周血中性粒細胞和單核細胞絕對值表示。血清IL-22和IL-23檢測采用IL-22和IL-23 ELISA試劑盒(達科為生物技術有限公司)，操作步驟嚴格按照說明書進行，檢測儀器為芬蘭MK3-酶標儀。

1.3 統計學方法 采用Graphpad prism5.0統計軟件。計量資料以表示，多組間比較采用方差分析，外周血中性粒細胞、單核細胞及血清IL-23、IL-22的關系采用Pearson相關分析法。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 四組外周血中性粒細胞、單核細胞絕對值比較PPTDM組、結核組、DM組、對照組中性粒細胞絕對值分別為(4.693 ±0.246)×109、(4.113 ±0.226)× 109、(3.671 ±0.198)× 109、(3.493 ±0.111)×109cells/L，結核組、PPTDM 組與對照組比較，P 均 ＜0.05。PPTDM 組、結核組、DM 組、對照組單核細胞絕對值分別為(0.440±0.024)×109、(0.369 ±0.021)× 109、(0.365 ±0.020)× 109、(0.336±0.017)×109cells/L，PPTDM 組與對照組及DM組比較，P均＜0.05。PPTDM組中PTB-DM者與DM-PTB者中性粒細胞絕對值分別為(5.247±0.339)×109、(4.140 ±0.303)×109cells/L，兩組比較，P＜0.05。PPTDM 組中 PTB-DM 者與 DM-PTB者單核細胞絕對值分別為(0.463±0.025)×109、(0.411 ±0.024)×109，兩組比較，P ＞0.05。

2.2 四組血清IL-23和IL-22水平比較 見表1。PPTDM組中，PTB-DM者與DM-PTB血清IL-23水平分別為(14.40 ±1.71)、(24.17 ±3.83)pg/mL，血清 IL-22 水平分別為(64.62 ±8.59)、(44.21 ±2.68)pg/mL，二者比較，P 均 ＜0.05。

表1 四組血清IL-23和IL-22水平比較(pg/mL，)

表1 四組血清IL-23和IL-22水平比較(pg/mL，)

注:與 PPTDM 組相比，*P ＜0.01，△P ＜0.05;與結核組相比，○P ＜0.01。

組別 n IL-23 IL-22 PPTDM組30 19.29 ±2.25 54.40 ±4.81 DM 組 30 35.65 ±2.42＊○ 72.36 ±5.12△○結核組 30 26.36 ±2.32 45.36 ±5.88對照組 30 40.11±2.36＊○ 68.32±3.08△○

2.3 外周血中性粒細胞、單核細胞及血清IL-23、IL-22的相關性 PPTDM患者血清IL-23與IL-22呈負相關(r=-0.351，P ＜0.05);PPTDM 患者外周血中性粒細胞、單核細胞絕對值與血清IL-22呈正相關(r分別為0.455、0.512，P 均 ＜0.01);PPTDM患者外周血中性粒細胞、單核細胞絕對值與血清IL-23無明顯相關性(P均＞0.05)。

3 討論

目前，有關PPTDM發病機制的闡述還不夠深入，多數研究認為PPTDM發病與物質代謝、機體免疫紊亂、瘦素分泌及藥物代謝等密切相關，尤其機體免疫功能低下致機體易感性增加，是引起PPTDM發病率增高的重要因素，在這個過程中細胞因子的表達失衡可能發揮重要作用［3］。研究［2］發現，PPTDM患者外周血血清 IL-17和IL-23水平均存在異常，提示PPTDM患者機體免疫功能可能發生紊亂。已知結核感染能加重DM患者糖代謝紊亂，從而促使血液含糖量增高，改變血液微環境，導致機體免疫功能紊亂［3］。本研究發現，PPTDM患者外周血單核細胞和中性粒細胞絕對值均高于肺結核患者、DM患者及健康志愿者，尤其顯著高于健康志愿者，提示PPTDM患者確實存在外周血白細胞功能的異常變化。值得注意的是，在不同起病形式PPTDM患者中，PTB-DM者中性粒細胞絕對值顯著高于DM-PTB者，然而，兩者間單核細胞絕對值無明顯統計學差異，提示中性粒細胞絕對值變化可能對區分不同起病形式PPTDM患者具有參考價值。

研究［2，4，5］發現，PPTDM 組外周血血清 IL-23 水平顯著低于DM組和對照組，尤其在PTB-DM者下降更為明顯。IL-23主要由活化的DC細胞、巨噬細胞分泌產生［6］。PPTDM患者外周血單核細胞顯著增高，而PPTDM患者外周血血清IL-23水平顯著降低，提示IL-23在啟動PPTDM患者機體免疫功能的機制與肺結核患者不同。此外，研究發現PPTDM患者外周血血清IL-22水平也存在異常表達，尤其是在DM-PTB患者中顯著降低。在外周血中IL-22的主要來源為活化后的Th1細胞及NK細胞，提示外周血中性粒細胞絕對值增高可能影響了外周血IL-22水平，或外周血IL-22水平增高影響了外周血中性粒細胞增殖［7］。相關性分析結果顯示，PPTDM患者外周血中性粒細胞絕對值與外周血IL-22水平呈正相關，外周血單核細胞絕對值與外周血IL-23及IL-22水平均無明顯相關性，說明IL-22較IL-23在PPTDM患者機體免疫功能紊亂中起更重要的作用。PPTDM患者外周血IL-23與IL-22水平呈負相關，提示IL-23與IL-22均參與了該免疫調節過程。最近Nikoopour等［8］認為IL-22的產生主要由芳香烴受體(AhR)和IL-23介導的通路引起。本研究進一步提示，在PPTDM發病過程中，尤其是PTB-DM患者，IL-22的產生可能與IL-23介導的通路無明顯相關性，但是否與AhR介導的通路有關還有待進一步研究。

綜上所述，PPTDM患者確實存在機體免疫機制紊亂(細胞因子失調)，且在一定程度上不同于肺結核患者和DM患者，PPTDM患者外周血白細胞絕對值檢測及細胞因子檢測在區別不同起病形式的PPTDM中有一定參考價值。

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［2］葉寧華，羅勇強，林東子，等.白細胞介素17A和白細胞介素23在肺結核合并糖尿病患者外周血中的表達及意義［J］.實驗與檢驗醫學，2014，32(6):664-666.

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