猴耳環水提物對哮喘模型豚鼠外周血細胞的影響

譚滴清等

摘要：為了研究猴耳環水提物對卵清蛋白（OVA）所致的哮喘模型豚鼠外周血細胞的影響，將50只豚鼠隨機分為陰性對照組、陽性對照組、猴耳環水提物高、中、低劑量組，每組10只。試驗第一天給陰性對照組和陽性對照組、猴耳環水提物高、中、低劑量組分別腹腔注射生理鹽水和10%OVA致敏，第14天和第15天用OVA霧化激發誘發哮喘模型。試驗結束后心臟采血，生化分析儀檢測觀察各組豚鼠外周血細胞數量的變化。結果表明，陽性組嗜堿性粒細胞數及中性粒細胞數均低于陰性組，差異顯著（P<0.05），其余各組與陰性組比較均差異不顯著；各組的淋巴細胞數和單核細胞數分別與陰性組比差異不顯著（P>0.05）。適量的猴耳環水提物對白細胞總數含量變化有積極的作用。

關鍵詞：猴耳環水提物；外周血細胞；影響

中圖分類號：R285.5 文獻標識碼：A 文章編號：1007-273X（2015）08-0010-02

猴耳環水提物為棕黑色膏狀體，在廣東民間較為常用，其抗菌、抗炎作用在臨床用藥實踐中已得到證實，但目前研究對其作用機理尚未明確。據于猴耳環的眾多功效，本研究擬通過建立哮喘豚鼠模型，觀察猴耳環水提物對OVA致哮喘模型豚鼠外周血細胞的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

普通級豚鼠50只，雄性，體重250～350 g，由廣州中醫藥大學實驗動物中心提供；生產許可證編號：SCXK（粵）2008-0020；使用許可證號：SYXK（粵）2008-0001。

1.2 藥品與試劑

中藥猴耳環水提物（批號：130903，含沒食子酸5.1%），由廣州萊泰制藥有限公司提供；地塞米松（批號：41211251），由天津金耀集團湖北天藥藥業股份有限公司生產；卵清蛋白，由美國Sigma公司生產；生化試劑盒，由上海科華生物工程股份有限公司提供。

1.3 儀器與設備

梅特勒AL204電子分析天平；臺式高速冷凍離心機（型號：MulitifugellR）；日立7060全自動血生化分析儀。

1.4 試驗設計

將50只雄性豚鼠依體重按隨機表分成5組：陰性對照組，陽性對照組、猴耳環水提物高劑量組、猴耳環水提物中劑量組、猴耳環水提物低劑量組，每組10只。試驗第一天用10%卵清蛋白生理鹽水溶液腹腔注射，每只1 mL。OVA致敏的第14天將致敏豚鼠放置于密閉塑料箱內，用霧化器噴入0.05%OVA，40 s/（次·只），連續4次；第15天，噴入1%OVA溶液超聲霧化激發2次，第一次2 min/（次·只），4 h后5 min/（次·只）。各組分別于致敏后第七天給藥。陰性對照組給予生理鹽水；陽性對照組給予地塞米松，劑量為0.1 mg/100 g；猴耳環水提物高劑量組采用原液的1/2濃度給藥，劑量為1 ml/kg；猴耳環水提物中劑量組采用原液的1/4濃度給藥，劑量為1 ml/kg；猴耳環水提物低劑量組采用原液的1/8濃度給藥，劑量為1 ml/kg；連續給藥7 d。試驗結束后，心臟采血，3 000 r/min離心10 min，分離血清，采用全自動生化分析儀進行檢測。

1.5 數據處理

數據采用SPSS19.9軟件分析，用平均數±標準差來表示。

2 結果與分析

豚鼠受OVA致敏激發后，并給予猴耳環水提物和地塞米松治療，于停藥后24h檢查外周血細胞數量，其結果見表1。由表1可知，陽性對照組和猴環耳水提物中劑量組紅細胞數低于陰性組，差異顯著（P<0.05）；猴環耳水提物高劑量組和低劑量組的紅細胞數低于陰性對照組，差異不顯著（P>0.05）；猴環耳水提物中劑量組血紅蛋白數與陰性對照組比較，差異顯著（P<0.05），其余各組與陰性對照差異不顯著；各組豚鼠血小板計數與陰性比較均差異不顯著；陽性對照組和猴耳環水提物中劑量組白細胞計數低于陰性對照組，差異顯著P<0.05）；猴耳環水提物高劑量組嗜酸性粒細胞數低于陰性對照組，差異顯著（P<0.05）；陽性對照組嗜堿性粒細胞數低于陰性對照組，差異顯著（P<0.05），其余各組與陰性對照組相比差異不顯著；陽性對照組中性粒細胞數低于陰性組，差異顯著（P<0.05），其余各組與陰性對照組比，差異不顯著；各組豚鼠淋巴細胞數和單核細胞數分別與陰性對照組比較均差異不顯著（P>0.05）。

3 討論

血細胞是存在于血液中的細胞，含紅細胞、白細胞、血小板等，通過觀察統計各血細胞的數量變化可以在一定程度上反應藥物的毒副作用及對身體的影響[1]。外周血炎癥免疫細胞在哮喘發生發展中起著重要的作用，白細胞具有免疫防御功能，它是通過吞噬有害物質以及淋巴細胞產生抗體來調節機體，其中嗜堿性粒細胞和嗜酸性粒細胞是哮喘變應性炎癥中釋放炎癥的效應細胞；嗜酸性粒細胞在哮喘病理生理學上作為原發效應細胞，與中性粒細胞一樣可進行呼吸暴發產生活性氧代謝產物，后者能損傷氣管上皮細胞膜，引起上皮脫落，黏膜水腫，還可誘導肥大細胞脫顆粒，炎性介質釋放[2]。單核細胞在哮喘炎癥中起主要早期效應細胞作用，具有遞呈抗炎信息和促進分泌多種細胞因子和炎性介質前體；中性粒細胞在哮喘的發生與發展過程中呈增加趨勢，有研究表明其可提示變應性炎癥與多形核白細胞有關系；血小板表面具有的親和力的IgE受體亦可能是哮喘的效應細胞之一[3]。

以嗜酸性粒細胞浸潤為主的慢性氣道炎癥性疾病哮喘可導致微血管滲漏增加，血蛋白滲出增多。本試驗結果顯示，陽性對照組與猴耳環水提物中劑量組紅細胞數較陰性對照組有所減少，猴耳環水提物中劑量組血紅蛋白低于陰性對照組血紅蛋白數，說明陽性對照組、猴耳環水提物中劑量組對微血管滲漏的修復作用不顯著，而猴耳環水提物高劑量組與陽性對照組嗜酸性粒細胞含量均顯示顯著低于低劑量組，表示糖皮質激素和猴耳環水提物高劑量組可能有抑制嗜酸性粒細胞的趨化，這與文獻[4]報道的一致，從而減少血液炎癥細胞。陽性對照組和猴耳環水提物中劑量組白細胞計數低于陰性對照組，表示猴耳環中劑量和地塞米松具有減少白細胞總數的作用，即可減少哮喘免疫炎性細胞的數量；陽性對照組嗜堿性粒細胞數和中性粒細胞數均低于陰性對照組，說明地塞米松在治療哮喘中可通過抑制嗜堿性粒細胞和中性粒細胞的增多起作用。而目前治療哮喘最有效的抗炎藥物糖皮質激素的主要作用機制是阻止炎癥細胞，特別是嗜酸性粒細胞的趨化和激活、抑制細胞因子的生成、干擾花生四烯酸代謝，抑制白三烯和前列腺素的合成和釋放降低氣管高反應性，減輕微血管的滲漏，減輕氣管水腫，使呼吸道通暢，修復氣管炎性損傷的上皮的作用。但長期或大量使用可能引起一系列的副作用[5]。基于低毒副作用的中藥猴耳環眾多功效，本試驗探討哮喘豚鼠外周血細胞結果顯示；猴耳環水提物可能含有某種免疫活性物質，具有降血清嗜酸性粒細胞的作用，也顯示猴耳環水提物對哮喘的作用機制不同于糖皮質激素對哮喘的作用機制。

參考文獻：

[1] 張 徐.固本平喘湯治療支氣管哮喘44例[J].河南中醫，2004，24（11）：51.

[2] 中華醫學會呼吸病學分會哮喘學組.支氣管哮喘防治指南（支氣管哮喘的定義、診斷、治療和管理方案）[J].神州醫學，2012，25（3）：171.

[3] 蔡柏薔，李龍云.協和呼吸病學[M].北京：中國協和醫科大學出版社，2011.

[4] BENTLEY A M，HAMID Q，ROBINSON D S，et al.Prednisolone treatment in asthma：reduction in the numbers of eosinophils，T cells，tryptase-only positive mast cells，and modulation of IL-4，IL-5，and interferon-gamma cytokine gene expression within the bronchial mucosa[J].AM J Respir Crit Care Med，1996，153：551-556.

[5] 郭耀威，李沛波.猴耳環提取物抗炎作用的實驗研究[J].中國醫藥雜志，2007（12）：23-24.