烏龍養血膠囊中芍藥苷的含量測定

馬玉珠+王菊平

【摘 要】 目的：建立烏龍養血膠囊中芍藥苷的含量測定方法，并對原標準砷進行修訂。方法：采用高效液相方法，在色譜柱為Diamonsil Columns C18，甲醇-水-冰醋酸（25∶ 75∶ 0-2）為流動相，檢測波長為230nm的條件下檢測芍藥苷的含量。結果：芍藥苷在50～250μg范圍內呈良好的線性關系，Y=35883X-249249，r=0-9992。RSD為1-19%（n=6）。結論：本法靈敏、準確、簡便易行、重現性好，可作烏龍養血膠囊質量控制的指標之一。

【關鍵詞】 芍藥苷；高效液相；烏龍養血膠囊

【中圖分類號】R284-1 【文獻標志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2015）18-0007-03

The Content determination of Paeoniflorin in Wulong Yangxue capsule

MA Yuzhu WANG Juping

Songlu pharmaceutical Co.Ltd. of Hulunbuir， Hulunbei 162650，China

Abstract：Objective To establish the method for assay of Wulong Yangxue capsule.Methods The sample was analyzed by High performance liquid chromatography HPLC and with Diamonsil Columns C18 column. The amount of paeoniflorin of radix paeoniae rubra was detected with methanol-water-glacial acetic acid （25∶ 75∶ 0-2） as mobile phase and detected wavelength of 230nm.ResultsPaeoniflorin in the range of 250-50μg good linear relationship ， Y=35883X -249249， the correlation coefficient r=0-9992.RSD was 1-19% （n=6）.Conclusion The method was sensitive， accurate ， simple and reproducible， as one of the indicators of the quality control of Wulong Yangxue capsule.

Keywords：Paeoniflorin； HPLC； Wulong Yangxue capsule；

烏龍養血膠囊由人參、冬蟲夏草、靈芝、琥珀、熊膽、鹿茸、黃芪、葛根、紅花、絞股藍、川芎、玫瑰花、海藻、當歸、丹參、赤芍、刺五加、枸杞子、地龍、山楂、天麻、何首烏等組成，具有補氣養血的功效。臨床用于氣血虧虛所致的身倦乏力、胸悶、多夢、神疲等癥。藥理研究發現，烏龍養血膠囊具有改善腦血循環、降低血脂、調節機體免疫功能；對神經內分泌系統具有明顯的雙向調節作用，可改善大腦皮層和植物神經系統的功能[1]。

研究采用高效液相方法測定烏龍養血膠囊中的芍藥苷的含量，并對執行過程中發現的砷鹽檢查項存在的問題進行修訂，進一步完善烏龍養血膠囊的質量標準。

1 儀器與材料

1-1 儀器 島津高效液相色譜儀（LC-10ATvp輸液系統、SPD-10Avp檢測器、lcsolusion lite 色譜工作站）；UV-2401PC SHIMADZU紫外分析儀；METTLER-240電子分析天平（上海梅特勒）；AS超聲儀（天津奧特賽斯思儀器有限公司）。

1-2 材料 芍藥苷對照品（批號：110736-200630，中國藥品生物制品檢定所）；烏龍養血膠囊（呼倫貝爾松鹿制藥有限公司）；D101型大孔吸附樹脂（批號：990320，天津農藥廠）；流動相甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2-1 色譜條件 色譜柱：Diamonsil Columns C18（250 mm×4-6 mm，5μm）；柱溫：35℃；流速：1-0ml/min；流動相：甲醇-水-冰醋酸（25∶ 75∶ 0-2）；檢測波長：230 nm；進樣量：20 μl。理論塔板數按芍藥苷峰計應不低于2000。

2-2 標準溶液的制備 精密稱取干燥24 h后的芍藥苷對照品適量，加甲醇制成每0-1mg/ml的溶液，即得。

2-3 樣品溶液的制備 精密稱取烏龍養血膠囊內容物3 g，研細，置具塞三角燒瓶中，加甲醇50 ml，稱重，放置1 h，超聲提取30 min，放冷，稱重，加甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液10 ml，置水浴上蒸干，殘渣加水3～5ml使溶解，加入D101型大孔吸附樹脂柱上，用50%甲醇50 ml洗脫，收集洗脫液，置水浴上蒸干，殘渣加甲醇溶解，定量轉移至10ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2-4 陰性溶液的制備 按照烏龍養血膠囊處方，按照“2-3”項制備缺少赤芍的陰性溶液。

2-5 線性關系的考察[2] 精密稱取芍藥苷對照品6-64 mg，加甲醇溶液定容至25ml，分別吸取1-0、2-0、3-0、4-0、5-0 ml用甲醇溶液稀釋至5ml，搖勻，分別取20 μl注入高效液相色譜儀。以對照品溶液濃度（mg/ml）為橫坐標，以峰面積積分值為縱坐標，計算回歸方程，Y=33775805X -249249，r=0-9996，表明芍藥苷進樣量在50～250μg范圍內呈良好的線性關系。見表1。

表1 線性關系的考察結果

2-6 干擾試驗 將芍藥苷對照品溶液、供試品溶液、赤芍陰性對照溶液分別注入液相色譜儀中，進行色譜掃描，結果顯示其他藥味不干擾芍藥苷的檢測。見圖1。

2-7 精密度試驗 取芍藥苷對照品溶液20μl，重復進樣5次，測定芍藥苷的面積積分值。由表2可知，芍藥苷面積積分值的相對標準偏差RSD為1-19%（n=5）<2%，說明儀器的精密度良好。

表2 精密度試驗結果

2-8 穩定性試驗 取烏龍養血膠囊（批號：130905）的樣品溶液，分別于0、2、6、8、12h注入高效液相色譜儀，進樣量20μl。由表3可知，峰面積RSD為0-91%，表明樣品溶液在12h內具有良好穩定性。

表3 穩定性試驗結果

2-9 重復性試驗 取批號為130905的烏龍養血膠囊樣品，精密稱量，按照“2-3”項平行處理6份作為供試品溶液，注入液相色譜儀，進樣量為20 μl。由表4可知，烏龍養血膠囊中芍藥苷的含量為0-888 mg/g，對標準偏差RSD為0-72%（n=6），RSD<2%，重復性試驗結果顯示方法穩定可靠。

表4 重復性試驗結果

2-10 回收率試驗 精密稱取已知含量的烏龍養血膠囊6份（批號：130905，含量為0-888mg/g）約1-5g，精密稱定，置具塞三角燒瓶中，精密加甲醇20ml，分別精密加入對照品溶液（濃度為71-5μg/ml）20 ml，按照“2-3”項制備供試品溶液。分別進樣20μl，測定。計算出加樣回收率，平均為97-54%，RSD為0-57%。見表5。

2-11 樣品測定 按本文擬定方法測定其中芍藥苷的含量，結果見表6。

表5 回收率測定結果

表6 樣品含量測定結果（n=6）

3 砷鹽的檢查

烏龍養血膠囊質量標準中砷鹽的檢查為“氫氧化鈣熾灼灰化”，該方法灰化不完全，有機成份干撓嚴重，影響砷斑顏色判定。現采用硫酸、硝酸氧化并熾灼灰化，所以采用此方法得到較好的分析，避免了有機成分灰化不完全而干擾檢測。具體方法如下：取供試品0-4g，緩緩熾灼至完全炭化，放冷，加硫酸1ml，使恰濕潤，用低溫加熱至硫酸除盡后，加硝酸1ml蒸干，至氧化氮蒸氣除盡后，放冷，在500～600℃熾灼使完全灰化。取遺留的殘渣，加鹽酸5ml與水21ml，依法檢查，含砷量不得過百萬分之五。

4 討論

烏龍養血膠囊的處方總量266g，其中赤芍為11g，而赤芍藥材標準要求含量芍藥苷（C23H28O11）不低于1-8%[3]。因此，烏龍養血膠囊中芍藥苷的理論含量為0-744mg/g。考慮生產工藝復雜，且受藥材來源、生產貯存等因素的影響，暫定本品含赤芍以芍藥苷（C23H28O11）計，每1g不得少于0-7mg。研究采用高效液相法測定烏龍養血膠囊藥品赤芍中芍藥苷的含量，經方法學考察，該方法準確、靈敏、簡便、快速，可作烏龍養血膠囊質量控制的指標之一。參考文獻

[1] WS-5951（B-0951）-2002.烏龍養血膠囊[S].

[2] 張春華，嚴云良.醫藥數理統計[M].北京：科學出版社，2001.

[3] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[S].北京：中國醫藥科技出版社，2010：147-148.

（收稿日期：2015-06-09）