丹參酮ⅡA納米囊的釋放度研究

黃雪瑩范文濤吳銀愛王利勝*

（1 廣州中醫藥大學中藥學院，廣東 廣州 510006；2 廣州市醫藥職業學校，廣東 廣州 510430）

丹參酮ⅡA納米囊的釋放度研究

黃雪瑩1，2范文濤1吳銀愛1王利勝1*

（1 廣州中醫藥大學中藥學院，廣東 廣州 510006；2 廣州市醫藥職業學校，廣東 廣州 510430）

目的 研究丹參酮ⅡA納米囊在人工腸液中釋放度，為研究其體內吸收奠定基礎。方法 利用透析袋，采用小杯法，轉速100r/min，以人工腸液為溶出介質，HPLC法測定丹參酮ⅡA濃度，計算累積溶出百分率，用DDSolver軟件對溶出曲線進行多種數學模型擬合，計算溶出參數。結果 在人工腸液中丹參酮ⅡA納米囊的平均滯留時間Td均長于原料藥丹參酮ⅡA。原料藥與丹參酮ⅡA納米囊的體外釋放差異較為顯著（P＜0.05），有可比性。結論 丹參酮ⅡA納米囊具有延遲丹參酮ⅡA釋放的作用。

丹參酮ⅡA納米囊；透析袋法；人工腸液

藥物制劑的在體內的釋藥規律直接影響藥物顯效快慢、作用時間長短、藥效高低和毒性大小等，為預測丹參酮ⅡA（TanⅡA）納米囊（NC）體內釋藥情況提供參考［1］。本實驗利用透析袋法，采取優選處方及工藝制備丹參酮ⅡA納米囊［2］和原料藥，運用《中國藥典》第三法：小杯法，以人工腸液為溶出介質，比較原料藥與納米囊釋放度差異，研究納米囊體外釋放規律，為研究其體內吸收奠定基礎。

1　儀器與試藥

1.1儀器：Waters高效液相色譜儀（2487紫外檢測器，515泵，美國Waters公司）；N3000色譜工作站（浙江大學）；AUW-120D精密分析天平，日本島津公司；S-8G智能溶出試驗儀，天津因賽科技發展有限公司；透析袋（截留分子量3500），上海金穗生物科技有限公司。

1.2試藥：丹參酮ⅡA，純度98%，南京澤朗醫藥有限公司；殼聚糖，廣州市齊云生物技術有限公司；十二烷基硫酸鈉，廣東光華科技股份有限公司；甲醇（色譜純），美國迪馬科技公司。

2　方法與結果

2.1丹參酮ⅡA含量測定

2.1.1色譜條件與系統適應性：色譜柱：Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-水（85∶15）（v/v）；流速：l mL/min；檢測波長：270 nm；柱溫：室溫；進樣量：20 μL。丹參酮ⅡA保留時間為11.5 min，理論塔板數不小于4000，見圖1。

表1　參酮ⅡA、丹參酮ⅡA納米囊累積釋藥分數的擬合結果

圖1　丹參酮ⅡA的HPLC圖（a丹參酮ⅡA標準品；b丹參酮ⅡA納米囊；c空白納米囊）

2.1.2標準品配制和標準曲線繪制：精密稱取丹參酮ⅡA5mg，置于10 mL容量瓶，用甲醇溶解并定容，即得0.5mg/mL丹參酮ⅡA溶液。精密量取丹參酮ⅡA溶液0.01、0.03、0.05、0.1、1 mL，分別置于10 mL棕色容量瓶中，用甲醇定容，制成一系列濃度分別為0.5、1.5、2.5、5、50 μg/mL的標準溶液。按上述色譜條件，依次進樣，以峰面積對濃度進行回歸的標準曲線Y=50584149.61X+6156.21916，r=0.9998。線性范圍為：0.5～50 μg/mL。

2.1.3供試品溶液的制備：精密稱取納米囊，加入5 mL甲醇，探頭超聲，得丹參酮ⅡA提取液，定容至10mL，0.22μm濾膜過濾，取續濾液，即得。

2.1.4精密度和穩定性試驗：取50 μg/mL丹參酮 ⅡA標準液按2.1.1項下色譜條件測定峰面積，連續測定5次，求取濃度，計算RSD為1.04%。取50 μg/mL丹參酮ⅡA標準液按2.1.1項下色譜條件測定峰面積，分別在0、3、6、9、12 h進樣，求取濃度，計算RSD為2.09%。

2.1.5回收率試驗：取處理后的同一批丹參酮ⅡA納米囊供試品溶液3份，各加入0.1、0.3、0.5 mL體積的丹參酮ⅡA標準品溶液，混合均勻后，用0.22 μm的微孔濾膜過濾后，按2.1.1項下色譜條件測定峰面積，連續測定3次，計算回收率，測定三個濃度的回收率均在98%～102%，回收率符合要求。

2.1.6方法專屬性實驗：分別取丹參酮ⅡA對照品甲醇溶液、丹參酮ⅡA納米囊供試品溶液，按2.1.1項下色譜條件測定。由色譜圖可見，丹參酮ⅡA樣品主峰與對照品具有一致的保留時間，處方中輔料不干擾丹參酮ⅡA的測定，方法專屬性良好。

2.2體外釋放

2.2.1溶出介質的配制及藥物在其中的飽和溶解度、透析袋處理：參照《中國藥典》2010版第二部附錄中人工腸液配制：取磷酸二氫鉀6.8 g，加水500 mL使溶解，用0.1 mol/L氫氧化鈉溶液調節pH值至6.8，取胰酶10 g，加水量使溶解，將兩液混合后，加水稀釋至1000 mL即得。人工腸液中丹參酮ⅡA飽和溶解度為1.38 μg/mL。

透析袋處理：將透析袋剪成8 cm左右的小段，在2 L、2%碳酸氫鈉和1 mmol/L乙二胺四乙酸二鈉（EDTA）的溶液中將透析袋煮沸10 min。用蒸餾水徹底清洗透析袋后，將透析袋放在pH=8的1mmol/L乙二胺四乙酸二鈉的溶液中煮沸10 min。待溶液冷卻后，透析袋直接浸泡在EDTA溶液中4 ℃保存。透析袋使用前用去離子水沖洗3次，徹底清洗透析袋［3］。

2.2.2丹參酮ⅡA和丹參酮ⅡA納米囊的溶出度測定：采用《中國藥典》2010版二部附錄XC第三法小杯法測定，精密稱取丹參酮ⅡA和丹參酮ⅡA納米囊（以丹參酮ⅡA計），加經脫氣處理后的適量溶出介質體積溶解，轉入經蒸餾水浸泡處理過的透析袋中，將透析袋兩端扎緊，綁與槳上，置于經脫氣處理后的溶出介質200 mL的溶出瓶中，轉速100 r/min，溫度（37±0.5） ℃，依法操作。原料藥分別在5 min、15 min、30 min、45 min、1 h、2 h、3 h和5 h取樣5 mL，0.45 μm濾膜過濾，每次取樣后補加同體積同溫度的溶出介質，HPLC測定峰面積，計算各指標成分的累積溶出百分率。丹參酮ⅡA納米囊分別在5 min、15 min、30 min、45 min、1 h、2 h、3 h、5 h、7 h、9 h、11 h、24 h、36 h、48 h和60 h取樣5 mL，0.45 μm濾膜過濾，每次取樣后補加同體積同溫度的溶出介質，HPLC測定峰面積，計算各指標成分的累積溶出百分率。

2.2.3溶出曲線數學方程擬合和溶出參數計算：運用零級動力學方程、一級動力學方程、Higuchi模型等，用DDSolver［4］擬合，結果見表1。

從擬合結果可以看出，丹參酮ⅡA溶出曲線更符合威布爾分布模型，因此選擇威布爾分布模型進行丹參酮ⅡA溶出參數的計算溶出參數Td（溶出63.2%所需時間）。丹參酮ⅡA及其納米囊的Td分別為3.3 h和14.7 h。

由擬合結果可知在人工腸液中丹參酮ⅡA納米囊的平均滯留時間Td長于原料藥丹參酮ⅡA。原料藥與丹參酮ⅡA納米囊的體外釋放差異較為顯著（P＜0.05），有可比性。結果表明丹參酮ⅡA納米囊具有延遲丹參酮ⅡA釋放的作用。

3　討 論

3.1為了模擬生理環境，本實驗采取了透析袋法。文獻［5］中有丹參酮ⅡA在大鼠腸的吸收機制研究，且丹參酮ⅡA為脂溶性有效成分，膽汁、食物、磷脂、蛋白等腸內容物以及腸道血液循環都可明顯影響其溶解與吸收。本文采用在人工腸液中研究其釋放度。

3.2影響納米囊體外釋放原因很多，如透析袋的限速過程、載體吸附、納米囊表面藥物等，本實驗分別對原料藥、納米囊進行體外釋放研究，旨在比較二者的差異。

3.3本實驗采用透析袋法研究丹參酮ⅡA納米囊的體外釋藥，以累積釋藥百分數進行不同模型擬合，丹參酮ⅡA納米囊溶出曲線更符合威布爾分布模型，丹參酮ⅡA納米囊的Td明顯長于原料藥，表明其具有良好的緩釋作用。

［1］李新中.齊墩果酸聚氰基丙烯酸正丁酯納米囊的制備及其肝靶向性研究［D］.長沙：中南大學，2007.

［2］吳俊洪，羅惠都.丹參酮ⅡA納米囊的制備及其性能評價［J］.中藥新藥與臨床藥理，2013，24（1）：101-103.

［3］莊曉峰，張宏福.不同透析袋對仿生消化法評定豬飼料原料干物質和磷體外消化率的影響［J］.動物營養學報，2012，24（8）：1527-1533.

［4］Zhang Y，Huo M.DDSolver：an add-in program for modeling and comparison of drug dissolution profiles［J］.AAPS J，2010，12（3）：263-271.

［5］閆紅波，吳清.丹參酮類成分及丹參脂溶性提取物在大鼠小腸內的吸收機制比較研究［J］.中國中藥雜志，2010，35（21）：2917-2922.

Research on Release Rate of Tanshinone ⅡA Nanocapsule

HUANG Xue-ying1，2， FAN Wen-tao1， WU Yin-ai1， WANG Li-sheng1
（1 School of Chinese Materia Medical， Guangzhou University of Chinese Medicine， Guangzhou 510006， China；2 Guangzhou Pharmaceutical Occupation School， Guangzhou 510430， China）

Objective Studying of tanshinone ⅡA nanocapsule release rate in the artificial intestinal fluid that lays a foundation to study the in vivo absorption. Methods Using the dialysis bag， using the third method of dissolution rate test in the speed of 100r/min， using the artificial intestinal fluid for the dissolution medium to research on release rate of tanshinone ⅡA nanocapsule. The concentration of tanshinone ⅡA in dissolution medium was determined by HPLC. Calculated the cumulative TanⅡA percentage， and then fitted the dissolution curve with the DDSolver Software for a variety of mathematical model and the dissolution parameters. Results In the release rate test， the average residence times of tanshinone ⅡA nanocapsule are longer than the crude drug. The T-test result shows that P＜0.05， which means that they have significant differences between crude drug and tansinone ⅡA nanocapsule release rate. Conclusion Tanshinone ⅡA nanocapsule has a slow-release effect.

Tanshinone ⅡA nanocapsule； The method of dialysis bag； Release rate

R9

B

1671-8194（2015）012-0002-02