HPV-16在宮頸癌和宮頸上皮內瘤變組織中的表達

秦　莉　王桂芳

（上海市金山區亭林醫院，上海 201505）

HPV-16在宮頸癌和宮頸上皮內瘤變組織中的表達

秦莉王桂芳

（上海市金山區亭林醫院，上海 201505）

目的 研究宮頸癌以及宮頸上皮內瘤變組織中HPV-16的表達及其臨床意義。方法 隨機選擇2011年7月至2013年6月期間，我院婦科門診收治的HPV高危病例200例，以基因捕獲技術（HC2）對人乳頭病毒（HPV-DNA）進行檢測，并分析HPV感染及表達與宮頸病變之間的關系。結果 本組共檢出HPV感染61例，其中HPV-16型28例，HPV-18型2例，31例其他。經病理證實宮頸鱗癌19例，CINⅠ級20例，Ⅱ級19例，Ⅲ級3例。CC組的HPV-16顯著高于正常組及CINⅠ、CINⅡ，HPV-18的陽性率顯著高于CIN組及正常組，P＜0.05。CC及CIN易感性與HPV-16/18陽性率存在顯示相關性（P＜0.05），而正常組與HPV-16/18陽性率無相關性（P＞0.05）。結論 宮頸組織中HPV-16過度表達與宮頸上皮內瘤變以及宮頸鱗癌的發展密切相關，檢測HPV-16有助于闡明宮頸癌的病因以及發病機制，早期篩查并預測宮頸上皮內瘤變的發展具有重要意義。

宮頸上皮內瘤變；宮頸癌；人乳頭病毒

宮頸上皮內瘤變（CIN）是與宮頸浸潤有密切關系的一組癌前期病變，主要反應了宮頸癌（CC）的連續發展過程，早期篩查和準確診斷CIN對于降低CC的發病率具有重要意義［1］。臨床研究證實，人乳頭病毒（HPV）感染，尤其是高危HPV感染與宮頸疾病的發生有著密切的關系，但不同人群所攜帶的HPV類型以及感染率不同，其與CC之間的相關性也不同，目前主要認為HIV-16/18與CC的關系最為密切［2］。為了解HIV-16感染及表達與CIN及CC之間的關系，本研究應用基因捕獲技術（HC2）檢測了200例高危病例的HPV-16感染與表達情況，并分析了其與宮頸病變之間的關系，以期為臨床早期篩查和預防CIN的發展提供參考。

1　資料與方法

1.1一般資料：2011年7月至2013年6月期間，我院婦科門診收治的高危型HPV病例200例，年齡在25～75歲，平均為（49.8±7.3）歲。CIN以及CC診斷均參照國家衛生部所發布的《子宮頸癌診斷》中關于CIN及ICC的診斷標準。所有病例均未接受過放化療、子宮、宮頸切除術或者服用激素類藥物進行治療。

1.2方法

1.2.1標本的采集和分裝：囑患者檢測前3 d勿進行陰道沖洗或者應用陰道內藥物，檢測前24 h內勿進行性生活，樣本均在非經期內采集檢查。常規置入陰道擴張器，采用女性專用的宮頸刷于患者的子宮頸口以及黏膜交界部位順時針輕輕轉5圈，然后保持10 s，以采集充足的陰道分泌物，然后取出將其置入專用的洗脫管中，并沿折痕處折斷宮頸刷柄，將洗脫管蓋旋緊，盡量避免取樣過程中樣本液流出導致標本量不足而無法檢測，并做好相應的標記，置于-20 ℃條件下保存待檢。

1.2.2檢測方法：應用基因捕獲技術（HC2）教學高危型HPV檢測，檢測步驟主要包括：①DNA提取：于標本中加入裂解液，以將雙鏈DNA病毒分解成為單鏈核苷酸；②雜交：將單鏈DNA與RNA探針相結合，從而形成RNA-DNA雜交體；③捕獲：將第1抗體（即特異性抗體）及RNA-DNA雜交復合物牢靠固定在微孔壁之上；④信號放大：將雜交體（RNA-DNA）與耦聯有堿性磷酸酶的第2抗體相結合；⑤信號檢測：堿性磷酸酶能夠酶底物發光，通過判讀光的強弱能夠判定堿性磷酸酶的具體含量，并可利用儀器分析可確定RNA-DNA的含量。陽性結果判斷：以檢測樣本相對更光單位（RIU）同標準陽性對照的比值超過1.0表示陽性。

1.3統計學分析：本研究數據以統計學軟件包SPSS18.0進行分析，以（x-± s）表示計量資料，比較并經t檢驗；以率（%）表示計數資料，并經χ2檢驗，以person相關性分析進行關聯分析，P＜0.05表示差異有統計學意義。

2　結 果

2.1各組HPV-16/18的陽性率分析：根據病情及病理類型將200例受試者分為正常組、CC組和CIN組。共檢出HPV感染61例，其中HPV-16型28例，HPV-18型2例，31例其他。經HC2檢測發現宮頸鱗癌19例，CINⅠ級20例，Ⅱ級19例，Ⅲ級3例。其中，19例宮頸癌中，12例為均為HPV-16型表達，占63.15%，2例為HPV-18型表達，占10.52%。研究結果顯示，CC的HPV-16顯著高于正常組及CINⅠ、CINⅡ，HPV-18的陽性率顯著高于CIN組及正常組，P＜0.05。CIN組內比較，CINⅠ最低，CINⅢ最高，三組之間比較差異顯著，P＜0.05。具體見表1。

表1　各組HPV陽性率比較［n（%）］

2.2HPV-16/18陽性率與CIN及CC易感性的相關性分析：經Person相關性分析顯示，CC及CIN易感性與HPV-16/18陽性率存在顯示相關性（P＜0.05），其中，CC及CINⅢ與HPV-16陽性率呈顯著正相關（P＜0.05），而正常組與HPV-16/18陽性率無相關性（P＞0.05）。

3　討 論

臨床研究認為高危型HPV感染是發生子宮頸癌的主要原因，HPV感染者中相當一部分將發展成為子宮頸病變［3］。因此，早期篩查高危型HPV感染對于早期篩查和判斷宮頸疾病風險具有重要意義，同時也是濃縮宮頸癌高位群體以及癌前病變最為有效的方式之一。目前，HPV的實驗室檢測方法主要包括PCR、核酸雜交以及HC2試驗。HC2實驗是美國Digene公司研發的HPV-DNA非放射性檢測技術，包括高危型以及低危型2種探針，該法操作簡便，工作效率較高，靈敏度及特異度均較高，應用熒光計進行讀數，檢測結果客觀且重復性好［2］。本研究應用96孔平板法高危探針對13種HPV-DNA進行檢測。

近年來，國內外大量研究顯示，高危型HPV-16及HPV18等亞型與宮頸癌的發生及發展有著密切關系［4-5］。本研究結果顯示，CC與CIN的高危型HPV-16陽性率顯著高于高危型HPV-18陽性率，認為HPV-16感染與宮頸病變密切相關。且CC的高危型HPV-16顯著高于正常組及CINⅠ、CINⅡ，HPV-18的陽性率顯著高于CIN組及正常組，P＜0.05；且CINⅠ陽性率（20%）顯著低于CINⅡ（47.36%），CINⅡ又顯著低于CINⅢ（100%），三組之間比較差異顯著，表明隨著病變級別的上升，HPV的陽性率呈顯著上升趨勢，同時也證實CIN逐步發展的重要危險因素為HPV持續感染。同時，經相關性分析顯示，CC及CIN易感性與HPV-16/18陽性率存在顯示相關性，進一步說明宮頸組織中HPV-16過度表達與宮頸上皮內瘤變以及宮頸鱗癌的發展密切相關。研究結果與相關研究報道一致。

綜上所述，應用高危型HPV基因捕獲技術（HC2）檢測HPV-16，并根據感染率及表達情況有利于預測宮頸病變的發展，從而為臨床早期篩查宮頸病變，選擇和治療合理有效的治療方案等提供可靠的理論依據。

［1］ 陳亞玲.宮頸上皮內瘤病變HPV與Ki-67表達的相關性研究［J］.中國民康醫學，2011，23（12）：1445.

［2］ 王攀，李招云，萬衛昌，等.兩種方法用于HPV基因檢測的比較［J］.浙江實用醫學，2011，16（4）：306-307.

［3］ 薛曼，俞文菊，朱凱，等.宮頸癌和宮頸上皮內瘤變組織中HPV16/18感染與ki-67、P16INK4a表達的關系［J］.浙江實用醫學，2009，14（2）：89.

［4］ 張立冬，裴靜，張慧敏，等.高危型HPV陽性患者宮頸支原體和衣原體感染與宮頸組織學改變的關系［J］.中華實驗和臨床病毒學雜志，2010，24（5）：346-348.

［5］ 張東紅，林美珊.人乳頭瘤病毒在國人宮頸病變中感染及型別分布特征的Meta分析［J］.中國全科醫學，2010，13（12）：1287-1290.

Evaluation of the Gene Expression of HPV-16 in Cervical Intraepithelial Neoplasia and Cervical Carcinoma

QIN Li， WANG Gui-fang
（Jinshan District Tinglin Hospital of Shanghai， Shanghai 201505， China）

Objective To study cervical intraepithelial neoplasia and cervical HPV-16 tissue expression and clinical significance. Methods 200 cases of high-risk HPV treated in the gynecology clinic in our hospital between July 2011and June 2013， gene capture technology （HC2）was performed to detect the human papilloma virus （HPV-DNA）， and analyzed HPV infection and expression of the relationship between cervical lesions. Results The detection of HPV infection in 16 cases， including 28 cases of HPV-16 type， HPV-18 type 2 cases， 31 cases of others. Pathologically confirmed 19 cases of cervical squamous cell carcinoma， CIN Ⅰ grade 20 cases， Ⅱ grade 19 cases， Ⅲ grade 3 cases. CC group of HPV-16 was significantly higher than the normal group and CINⅠ， CIN Ⅱ， HPV-18 positive rate was significantly higher than CIN group and the normal group， P＜0.05. CC and CIN susceptibility exist with HPV-16/18 positive rate shows correlation （P＜0.05）， while the normal group and no correlation HPV-16/18 positive rate （P＞0.05）. Conclusion HPV-16 cervical tissue overexpression of cervical intraepithelial neoplasia and cervical squamous cell carcinoma is closely related to the development， testing HPV-16 help to elucidate the etiology and pathogenesis of cervical cancer， early screening and predicting cervical intraepithelial neoplasia become of great significance.

Cervical intraepithelial neoplasia； Cervical cancer； Human papilloma virus

R737.33

B

1671-8194（2015）09-0035-02