茶多酚對酒精性肝損傷大鼠的抗炎抗氧化保護(hù)作用

馮亮，汪燕，潘小玲

（1.南方醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院藥劑科，廣東廣州510500；2.南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院藥劑科，廣東廣州510500）

茶多酚對酒精性肝損傷大鼠的抗炎抗氧化保護(hù)作用

馮亮1，汪燕1，潘小玲2

（1.南方醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院藥劑科，廣東廣州510500；2.南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院藥劑科，廣東廣州510500）

目的觀察茶多酚對酒精性肝損傷大鼠肝臟的抗炎與抗氧化作用。方法將36只SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為對照組、模型組及治療組，各12只。對照組大鼠每日用生理鹽水按8 g/kg灌胃，模型組大鼠給予同劑量酒精灌胃，治療組大鼠在灌胃同時按0.25 g/kg劑量灌胃給予茶多酚。經(jīng)過8周后，檢測大鼠血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天冬門氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶（GST）活性及肝臟中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）含量，以及肝臟中炎癥相關(guān)因子白細(xì)胞介素（IL）-6、IL-1β、單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）表達(dá)。結(jié)果長期酒精灌胃喂養(yǎng)可明顯使大鼠誘發(fā)酒精性肝損傷，服用茶多酚后可明顯降低酒精性肝損傷大鼠增高的血清中ALT等活性，并能減少肝組織中MDA含量，升高SOD與GSH-Px的活性，并降低IL-6和IL-1β等的表達(dá)。結(jié)論茶多酚對大鼠酒精性肝損傷具有抗炎和抗氧化的保護(hù)作用。

茶多酚；酒精性肝損傷；抗炎；抗氧化

酒精性肝損傷往往與活性氧和脂質(zhì)過氧化損傷作用、脂質(zhì)代謝受阻、細(xì)胞因子的相關(guān)損害作用、炎性反應(yīng)等密切相關(guān)［1］。茶多酚是從天然茶葉中分離提取出來的多酚類化合物的復(fù)合體，具有抗菌、抗病毒作用，以及保護(hù)心血管系統(tǒng)、抗衰老、抗過敏等，在抗氧化及免疫應(yīng)答和肝臟保護(hù)中作用更顯著［2］。本研究中主要從氧化應(yīng)激和炎性反應(yīng)兩方面，通過分光光度計、酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）法及熒光定量PCR（QRT-PCR）的方法，體外探究茶多酚對慢性大鼠肝損傷模型中大鼠肝臟氧化應(yīng)激和炎性反應(yīng)的影響，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 動物、材料與試劑

36只SPF級健康雄性SD大鼠（體重170～220 g），由南方醫(yī)科大學(xué)動物中心提供，動物合格證號SCXK（粵）2012-0004。茶多酚（純度98%，江西綠康天然產(chǎn)物有限公司，批號為F111D21），紅星牌56%（體積分?jǐn)?shù)）白酒（北京釀酒總廠）；丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）測定試劑盒（上海紀(jì)寧實業(yè)有限公司）；天冬門氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）測定試劑盒（深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司）；谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶（GST）測試盒、超氧化物歧化酶（SOD）測試盒、丙二醛（MDA）測試盒、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）測試盒（南京建成生物工程研究所）。

1.2 方法

模型構(gòu)建：將清潔級SD大鼠36只隨機(jī)分成對照組、模型組和治療組，各12只。對照組大鼠用等量生理鹽水每日早上按8 g/kg灌胃，模型組大鼠給予同劑量酒精灌胃，治療組大鼠在灌胃同時按0.25 g/kg劑量灌胃給予茶多酚。

指標(biāo)檢測：通過試劑盒檢測大鼠血清ALT，AST，GST活性及肝臟組織中SOD，MDA，GSH-Px含量。

RT-PCR方法：肝臟中RNA采用Trizol（invitrogen）抽提，按試劑盒說明書進(jìn)行，測定RNA純度和濃度隨后進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，再用反轉(zhuǎn)錄試劑盒（takara）反轉(zhuǎn)錄成cDNA，最后使用定量PCR反應(yīng)檢測肝臟中炎性相關(guān)因子IL-6，IL-1β，MCP-1，TNF-α表達(dá)。引物合成情況，IL-6上游引物5′-TCTCGAGCCCACCAGGAAC-3′，下游引物5′-AGGGAAGGCAGTGGCTGTC-3′；IL-1β上游引物5′-GAGCCCGTCCTCTGTGACTCG-3′，下游引物5′-GGCCCAAGGCCACAGGGA-3′；MCP-1上游引物5′-TCAGCCAGATGCAGTTAACGC-3′，下游引物5′-TCTGGACCCATTCCTTCTTGG-3′；TNF-α上游引物5′-TGTTCATCCATTCTCTACCC-3′，下游引物5′-CACTGTCCCAGCATCTG-3′；GAPDH上游引物5′-TCAAGAAGGTGGTGAAGCAG-3′，下游引物5′-AGGTGGAAGAATGGGAGTTG-3′。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 12.0統(tǒng)計軟件分析，各組間比較采用兩樣本均數(shù)t檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般情況

36只SD大鼠共死亡5只，死亡率為13.89%，其中模型組3只，治療組2只。死亡大鼠解剖見肺出血、氣管分泌物增多，分析原因主要由于白酒灌胃誤嗆入肺導(dǎo)致。其他存活大鼠經(jīng)過8周酒精灌胃后，對照組大鼠活動能力良好，體重增加，相比模型組大鼠大多出現(xiàn)精神萎靡、食欲減退等癥狀，治療組大鼠相比生存狀況較良好。

2.2 對肝功能的影響

給予酒精喂養(yǎng)8周后，相比對照組，模型組血清ALT，AST，GST活性明顯升高（P＜0.01），而在茶多酚治療組中，血清中升高的ALT等活性均降低，見表1。

表1 茶多酚對模型大鼠血清ALT，AST，GST活性的影響（±s）

表1 茶多酚對模型大鼠血清ALT，AST，GST活性的影響（±s）

注：與對照組比較，*P＜0.05，△P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05。

組別對照組（n=12）模型組（n=9）治療組（n=10）ALT（U/L）39.2±8.4 58.3±8.3*44.0±7.5#AST（U/L）123.5±30.6 190.3±36.5△153.8±32.4#GST（U/mL）10.2±2.1 19.7±3.3△14.6±2.9#

2.3 對抗氧化功能的影響

模型組相比對照組，大鼠肝勻漿組織中MDA水平升高，SOD與GSH-Px活性下降，而治療組中通過茶多酚治療大鼠肝勻漿中水平較高的MDA水平則降低，GSH-Px和SOD活性則上升，見表2。

表2 茶多酚對模型大鼠肝組織中MDA，SOD與GSH-Px水平的影響（±s）

表2 茶多酚對模型大鼠肝組織中MDA，SOD與GSH-Px水平的影響（±s）

注：與對照組比較，*P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，▲P＜0.01。

組別對照組（n=12）模型組（n=9）治療組（n=10）MDA（μmol/g）8.9±1.2 13.2±2.8*9.1±1.9▲SOD（kU/g）117.5±13.5 78.4±12.3*101.8±11.7▲GSH-Px（kU/g）70.6±10.4 49.8±6.7*58.6±8.4#

2.4 對肝臟炎性因子的影響

模型組相比對照組，大鼠肝臟組織中肝臟炎癥細(xì)胞因子白細(xì)胞介素（IL）-6，IL-1β，單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1），腫瘤壞死因子-α（TNF-α）明顯升高，而治療組中通過茶多酚治療大鼠上述炎癥因子mRNA表達(dá)均被降低，見表3和圖1。

表3 各組大鼠肝臟炎性因子mRNA水平比較（±s）

表3 各組大鼠肝臟炎性因子mRNA水平比較（±s）

注：與模型組比較，#P＜0.05，*P＜0.01。

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3 討論

近年來有研究報道，通過模仿多數(shù)酒精性肝炎患者的飲酒方式而建立了一種慢性酒精灌胃小鼠的模型（稱為Gao-Binge model），這些被模仿的患者本身有多年慢性飲酒背景，該模型可導(dǎo)致小鼠脂肪變性肝臟損傷和炎性反應(yīng)［3-4］，現(xiàn)今國內(nèi)外許多實驗室主要使用稍加修正的這種動物模型。

圖1 mRNA表達(dá)水平

酒精性肝病發(fā)病機(jī)制包括，乙醇及其衍生物進(jìn)行代謝反應(yīng)的產(chǎn)物毒性作用、代謝過程中誘導(dǎo)的炎性反應(yīng)及氧自由基形成、抗氧化物質(zhì)的耗竭、腸源性內(nèi)毒素等多種因素共同作用的結(jié)果［5-7］。酒精的代謝產(chǎn)物之一乙醛對肝組織細(xì)胞有明顯的毒性作用，會持續(xù)損傷肝細(xì)胞器的結(jié)構(gòu)功能，削弱超氧化物歧化酶等的抗氧化功能，抑制生物合成谷胱甘肽，同時大量產(chǎn)生丙二醛等氧化物［8］；同時可激活免疫應(yīng)答，并誘導(dǎo)產(chǎn)生IL-6及IL-1β等炎性細(xì)胞因子，并參與肝臟細(xì)胞的壞死和凋亡［9］。

近年來，我國許多學(xué)者嘗試通過中藥治療酒精性肝病并取得了較好療效［10-11］。茶多酚又稱茶鞣質(zhì)，是從茶葉中提取的有效成分，是含多酚類化合物的混合物，且具有抗腫瘤、抗氧化等藥理作用，有關(guān)茶多酚的研究目前已成為藥學(xué)領(lǐng)域的研究熱點。本研究結(jié)果顯示，茶多酚可顯著降低大鼠血清ALT，AST，GST活性，改善肝功能，同時還可升高SOD與GSH-Px活性并降低MDA含量，說明茶多酚在一定程度上可增強(qiáng)大鼠機(jī)體肝細(xì)胞清除自由基能力，降低肝臟自由基對細(xì)胞的損害，不過對人類肝細(xì)胞損傷是否有同樣的抗氧化作用，仍需在臨床試驗中進(jìn)一步加以證實。此外，茶多酚還可降低TNF-α含量，從而減輕多種炎性因子介導(dǎo)的免疫激活效應(yīng)，抑制炎癥發(fā)生；同時可降低IL-6表達(dá)，抑制分泌肝細(xì)胞膠原以抑制酒精性肝損傷。不過，至于茶多酚通過何種作用機(jī)制抑制炎性細(xì)胞因子的表達(dá)需要更深入地研究。

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Anti-Inflammatory and Anti-Oxidative Protection Effect of Tea Polyphenols on Alcoholic Liver Injury Rats

Feng Liang1，Wang Yan1，Pan Xiaoling2
（1.Department of Pharmacy，The Third Affiliated Hospital of Southern Medical University，Guangzhou，Guangdong，China 510500；2.Department of
Pharmacy，Nanfang Hospital of Southern Medical University，Guangzhou，Guangdong，China 510500）

Objective To observe the anti-inflammatory and anti-oxidative protection effect of tea polyphenols on the alcoholic liver injury rats.Methods 36 SD rats feed adaptive after 1 week，then randomly divided into the normal control group，model group and treatment group，12 cases in each group.Rats in normal group infused with normal saline once a day with a dose of 8 g/kg body weight，the model group infused with the same dose of alcohol，the treatment infused with the alcohol and tea polyphenols with a dose of 0.25 g/kg body weight.After 8 weeks，the ALT，AST and GST levels in serum and SOD，MDA and GSH-Px levels in liver tissue and the expression of IL-6，IL-1β，MCP-1 and TNF-αof rats were detected.Results Long-term gastric feeding method by alcohol can obviously make alcohol induced liver injury in rats.After treating with tea polyphenols，the higher serum ALT，AST and GST activity obviously down-regulated in alcoholic liver injury rats，and the MDA level was reduced，the SOD activity increased，the expression of IL-6，IL-1β，TNF-αand MCP-1 were decreased.Conclusion Tea polyphenols has anti-inflammatory and anti-oxidant protection on alcoholic liver injury rats.

tea polyphenols；alcoholic liver injury；anti-inflammatory；anti-oxidant

R285.5；R282.71

A

1006-4931（2015）22-0037-03

馮亮（1986-）男，大學(xué)本科，藥師，研究方向為藥學(xué)臨床試驗研究，（電話）020-62784815。

2015-07-28；

2015-08-22）