高效液相色譜法測定參膚軟膏中鹽酸小檗堿含量

林雪霞

（邢臺醫學高等專科學校校辦室，河北邢臺054000）

高效液相色譜法測定參膚軟膏中鹽酸小檗堿含量

林雪霞

（邢臺醫學高等專科學校校辦室，河北邢臺054000）

目的建立測定參膚軟膏中鹽酸小檗堿含量的高效液相色譜（HPLC）法。方法色譜柱為Kromasil C18柱（250mm×4.6mm，5μm），流動相為0.1%磷酸（每100mL加入十二烷基磺酸鈉0.02 g）-乙腈（59∶41），流速為1.0mL/min，檢測波長320 nm，柱溫室溫，進樣量20μL。結果鹽酸小檗堿與其他組分分離良好，進樣量在1.184～5.920μg范圍內與峰面積線性關系良好（r=0.999 4，n=5）；平均加樣回收率為99.83%，RSD為0.30%（n=6）。結論該法簡單、專屬性強、重復性好，可用于參膚軟膏中鹽酸小檗堿的含量測定。

參膚軟膏；高效液相色譜法；鹽酸小檗堿；含量測定

參膚軟膏由苦參、地膚子、黃柏、黃精等中藥加工制成，作為外用制劑，具有清潔、保護皮膚，祛濕收斂，清熱，解毒，殺蟲止癢和較強的殺滅真菌的作用。方中黃柏具有清熱燥濕、瀉火解毒、退虛熱及消腫祛腐的作用［1］，其主要有效成分小檗堿具有抗菌、抗炎、抗病毒、抗潰瘍及免疫抑制作用［2-4］。方中鹽酸小檗堿的含量與制劑的功效有密切的關系，故以高效液相色譜（HPLC）法測定其含量，為評價參膚軟膏質量提供參考。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀（日本島津公司）：LC-20AT型二元高壓梯度泵，SPD-M20A型紫外檢測器，LC-solution工作軟件；電子恒溫水浴鍋（北京科偉永興儀器有限公司）；R200D型電子分析天平（德國Sartorius公司）。鹽酸小檗堿對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為110713-200910）；參膚軟膏（河北國金藥業有限責任公司，批號為20130801，20130802，20130803）；乙腈為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件和系統適用性試驗［5-7］

色譜柱：Kromasil C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動相：0.1%磷酸（每100 mL加入十二烷基磺酸鈉0.02 g）-乙腈（59∶41）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：320 nm；柱溫：室溫；進樣量：20μL。分離度大于1.5，拖尾因子符合要求，理論板數按鹽酸小檗堿峰計不低于3 000。

2.2 溶液的制備

稱取鹽酸小檗堿對照品7.40mg，精密稱定，置25mL容量瓶中，加流動相溶解，并定容至25 mL，搖勻，配制成質量濃度為0.296 0 g/L的對照品溶液。稱取參膚軟膏樣品0.10 g，精密稱定，置圓底燒瓶中，加入1%鹽酸甲醇25mL，密塞，精密稱定質量，于水浴上加熱回流30min，取出，放冷，再精密稱定質量，用1%鹽酸甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，續濾液過0.45μm微孔濾膜濾，得供試品溶液。

2.3 方法學考察

干擾試驗：按處方及制備工藝制備不含黃柏藥材的陰性樣品，按供試品溶液制備陰性對照品溶液。按擬訂色譜條件，精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液各20μL，分別注入液相色譜儀中測定。結果供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應位置上有相同保留時間的色譜峰，而陰性對照品溶液則無此峰，表明處方中其他藥材不干擾鹽酸小檗堿的含量。色譜圖見圖1。

線性關系考察：精密吸取對照品溶液1，2，3，4，5mL，分別置5 mL容量瓶中，用流動相定容至刻度，搖勻，質量濃度分別為0.059 2，0.118 4，0.177 6，0.236 8，0.296 0 g/L，精密吸取各質量濃度對照品溶液20μL，按擬訂色譜條件測定，以質量濃度為橫坐標（X）、峰面積為縱坐標（Y）繪制標準曲線，得回歸方程Y= 7.067X×107+1.009×105，r=0.9994（n=5）。結果表明，鹽酸小檗堿進樣量在1.184～5.920μg范圍內與峰面積線性良好。

精密度試驗：精密吸取同一對照品溶液，按擬訂色譜條件連續進樣5次，記錄峰面積。結果的RSD=0.55%（n=5），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：精密吸取同一供試品溶液20μL，分別于0，1，2，4，8 h時測定。結果的RSD為0.10%（n=5），說明供試品溶液在8 h內穩定。

重復性試驗：精密稱取同一樣品（批號為20130801），依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件測定鹽酸小檗堿含量。結果的RSD為0.49%（n=5），表明方法重復性好。

加樣回收試驗：精密稱定，稱取已知含量同一批樣品（批號為20130803，質量濃度為39.48mg/g）約0.05 g，精密稱定，共6份，分別置圓底燒瓶中。另取對照品溶液（0.296 0mg/mL），精密量取4，5，6mL各2份，分別加入上述圓底燒瓶中，依法測定，計算回收率。結果見表1。

表1 鹽酸小檗堿加樣回收試驗結果（n=6）

2.4 樣品含量測定

取3批樣品依法制備成試品溶液，按擬訂色譜條件測定。結果批號為20130801，20130802，20130803樣品中鹽酸小擘堿平均含量分別為39.69，41.03，40.05mg/g。

3 討論

黃柏為方中要藥，其活性成分鹽酸小檗堿具有多種藥理活性，與本方功能主治一致，因此以鹽酸小檗堿的含量測定作為本組方的質量指標是合理的。鹽酸小檗堿的含量測定方法較多，曾參考文獻［8-13］選擇0.1%磷酸（每100 mL流動相溶液加0.1 g十二烷基磺酸鈉）-乙腈（50∶50）進行試驗，結果鹽酸小檗堿色譜峰與相鄰峰未達到最佳分離，通過調節流動相，0.1%磷酸（每100 mL磷酸溶液加0.02 g十二烷基磺酸鈉）-乙腈（59∶41），鹽酸小檗堿與其他組分得到較好的分離，且峰形對稱。

以1%鹽酸甲醇溶液和甲醇為溶劑，以不同的加入量進行試驗，再以不同的提取方法（超聲波提取和回流提取）制備供試品溶液，結果表明1%鹽酸甲醇溶液25mL回流提取的含量最高，故選擇此方法提取。提取時間分別考察提取15，30，45，60 min，結果15 min不能完全提取，30 min和45 min的結果基本相同，而60 min時比45 min略低，故選擇提取30 min。HPLC法樣品處理簡單，回收率高，重復性好，可以用于測定方中鹽酸小檗堿的含量。

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［3］Wang XH，Jiang SM，Sun QW.Effects of berberine on human rheu-matoid arthritis fibroblast-like synoviocytes［J］.Exp Biol Med，2011，236（7）：859-866.

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［8］吳雪丹，丁寶月，傅應華.HPLC法測定復方苦參洗劑中鹽酸小檗堿和黃芩苷［J］.中成藥，2012，34（5）：868-871.

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［10］趙曉妍，周鳳盈，李蘭水.鹽酸小檗堿片兩種含量測定方法的比較［J］.中國藥師，2011，14（11）：1 704-1 705.

［11］趙嚴麗，陳淑娟.高效液相色譜法測定消渴平膠囊中鹽酸小檗堿含量［J］.中國藥業，2014，23（1）：10-11.

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Content Determination of Berberine Hydrochloride in Shenfu Ointments by HPLC

Lin Xuexia
（Office of the Principal，Xingtai College of Medicine，Xingtai，Hebei，China 054000）

Objective To establish a content determination method of berberine hydrochloride in Shenfu Ointments.Methods HPLC analysis was carried out on a Kromsal C18chromatographic column（250 mm×4.6 mm，5μm），the mobile phase was acetonitrile-0.1%phosphoric acid（59∶41）（adding 0.02 g sodium dode-cylsulphate into 100 mL solution）with the flow rate of 1.0 mL/min and the detection wavelength was 320 nm；the temperature of column was room temperature，and the injection volume was 20μL. Results The linear range was 1.184-5.920μg with good correlation with the peak area（r=0.999 4，n=5）.The average recovery was 99.83%and RSD was 0.30%（n=6）.Conclusion The established method is accurate，specific and reproducible，and suitable for the determination of berberine hydrochloride in Shenfu ointments.

Shenfu Ointments；HPLC；berberine hydrochloride；content determination

R284.1；R286.0

A

1006-4931（2015）22-0124-02

2015-01-27；

2015-07-07）