間接免疫熒光法與免疫印跡法聯合檢測抗核抗體的重要性

李寶萍　張 梅　郭 楠　李慧萍

（北京中醫藥大學東直門醫院檢驗科，北京 100700）

間接免疫熒光法與免疫印跡法聯合檢測抗核抗體的重要性

李寶萍張 梅郭 楠李慧萍

（北京中醫藥大學東直門醫院檢驗科，北京 100700）

目的探討以間接免疫熒光法（IIF）篩查的抗核抗體（antinuclear antibody，ANA）結果與免疫印跡法檢測抗核抗體譜（ANAs）結果進行比對，分析二者的相關性。方法分別用間接免疫熒光法檢測核型和免疫印跡法檢測抗核抗體譜類型的兩種檢測方法。回顧1144例樣本進行分析。結果ANA熒光核型不同，免疫印跡法抗體類型有差別，但規律不明顯，并且間接免疫熒光法（IIF）陽性率高于免疫印跡法。結論 IIF-ANA與LIA-ANA有一定的相關性，但也有差異，二者同時檢測能降低漏檢率。對自身免疫性疾病的診斷、病情監測及預后判斷有重要意義。

抗核抗體；間接免疫熒光法；免疫印跡法

抗核抗體（ANA）是以真核細胞的核成分為靶抗原的器官非特異性自身抗體的總稱，屬自身抗體中的一組抗體。間接免疫熒光法在臨床上是一個重要的篩查試驗［1］。陽性結果有助于進一步的特異性抗體檢測和（或）確認試驗。并且提示自身免疫性疾病（AID）的可能性。免疫印跡法特異性抗核抗體譜檢測對AID的診斷和鑒別診斷、病情評估與治療監測等都具有重要的臨床應用價值。本文通過用間接免疫熒光法檢測核型和免疫印跡法檢測抗核抗體譜類型的兩種檢測方法，回顧1144例樣本進行分析，現將具體結果報道如下。

1　資料與方法

1.1基本資料：收集2014年11月至2015年4月在北京中醫藥大學東直門醫院門診和住院患者的樣本共計1144例，男289例，女855例，患者年齡18～86歲。采集患者清晨空腹靜脈血，離心分離血清后同時采用IIF法檢測ANA和免疫印跡法（LIA）檢測ANA譜15項。

1.2方法。試劑：德國歐蒙公司提供的抗核抗體間接免疫熒光法檢測試劑盒和抗核抗體歐蒙印跡法檢測試劑盒（抗核抗體譜15項）Eurolinescan自動判別軟件，EUROBlotMaster分析儀熒光顯微鏡。IIF檢測ANA核型：采用德國歐蒙公司提供的含有HEp-2細胞和猴肝抗原的生物載片，以抗體滴度≥1∶100為陽性。核型分為：核顆粒型，均質型，著絲點型，胞質顆粒型，核仁型，核點型，混合型等。結果判定按說明書。LIA檢測ANAs：采用LIA檢測ANAs特異性抗體，其中包括抗dsDNA，抗Sm、抗PM-Scl、抗線粒體-M2（AMA-M2）抗體抗SS-A、抗Scl-70、抗著絲點蛋白B（CENP B）、nRNP/Sm、抗增殖細胞核抗原（PCNA）、抗Ro-52、抗核小體（Nukleosome）、抗組蛋白（Histone）、抗SS-B、抗核糖體P蛋白（rRNP）、抗Jo-1共15種。使用德國歐蒙公司生產的全自動免疫分析儀進行試驗。實驗結束后將膜條置于結果判定模板中的塑料膜上，并與標志對齊，干透后用臺式掃描儀（EUROIMMUN AG）掃描，并采用EUROLineScan軟件評價結果。

2　結　果

2.1ANA核型與ANA譜結果匯總分析：1144例檢測結果中ANA核型陽性355例（31.03%），LIA陽性254例（22.20%），兩種方法存在明顯的差異（P＜0.05）。IIF與LIA單項或兩項陽性443例，與IIF陽性率和LIA陽性率相比存在明顯的差異（P＜0.05）。355例IIF陽性病例中182例LIA法未檢出ANA，789例IIF陰性病例中有88例LIA陽性，見表1。

表1　IIF法與LIA法檢測ANA結果分析

2.2各核型分布結果為：核顆粒型37.0%、均質型20.8%、核仁型6.4%、著絲點型9.2%、胞質顆粒型19.7%，核點型2.3%，混合型4.6%，見表2。

2.3ANA核型與ANA譜結果相關性分析：對IIF與LIA同時陽性的173例結果對比分析，見表3。

3　討　論

IIF法檢測的ANA是針對整個細胞核、細胞質、細胞骨架、細胞周期等成分的總抗體，靈敏度相對較高。但是該方法對AID特異性相對較低，而免疫印跡法檢測膜條上的抗原種類非常有限，只能檢測有限的抗體（15種）其特異性強，但靈敏度低。回顧我科2014年11月至2015年4月共檢測的1144例樣本中，間接免疫熒光法陽性率為31.03%，而免疫印跡法陽性率為22.20%。二者之間有顯著性差異，與胡朝軍等人的研究不相符，可能與我院患者以老年人為主有關。

表3　IIF、ANAs二者同時陽性標本的ANA核型與ANA譜結果對比分析

表2　ANA核型分布

根據表3顯示，一種熒光核型能夠顯示多種特異性抗核抗體陽性，反之亦然。不同的ANA核型相對應的特異性抗核抗體不一致，同靶抗原存在位置相關，同文獻［2］報道基本一致。IIF與LIA檢測結果并不完全一致，355例IIF陽性病例中屬于LIA陰性患者共有182例與相關文獻［3］的研究不同，針對此類IIF陽性而LIA陰性的情況可能是方法不同造成，我院患者大多數為老年人，自身抗體相對增多，而IIF法玻片上包含的抗核抗原種類相對比較多，而LIA法條帶上只包被15種特異性抗核抗原，引起IIF陽性而LIA陰性的主要因素［4］。本次研究顯示熒光核型大多數為核顆粒型，之后屬于均質型以及胞質顆粒型，和文獻基本一致［5］。

綜上所述，IIF-ANA與LIA-ANA有一定的相關性，但也有差異，二者同時檢測能降低漏檢率。提高檢測的陽性率。為臨床對自身免疫性疾病的診斷、病情監測及預后判斷有重要幫助。

［1］胡朝軍，李俊，張道強，等.間接免疫熒光法篩查抗核抗體與特異度抗體檢測的相互關系［J］.中華臨床免疫和變態反應雜志，2011，5（3）:179-185.

［2］郭大文，張英輝，單娜，等.抗核抗體核型與條帶免疫抗體譜相關性分析［J］.中華實用診斷與治療雜志，2012，26（6）:560-562.

［3］鄭金菊，牟曉峰.抗核抗體核型檢測與特異性抗核抗體譜檢測的對比分析［J］.國際檢驗醫學雜志，2014，35（20）:2813-2815.

［4］朱蓉，孫明忠，居會祥，等.2771例抗核抗體譜檢測結果分析［J］.檢驗醫學與臨床，2013，2（10）:13-16.

［5］張鐵漢，趙永新，鄭輝，等.免疫印跡法與間接免疫熒光法檢測抗核抗體對照分析［J］.中國熱帶醫學，2008，8（4）:568-570.

R446.6

B

1671-8194（2015）22-0151-02