念珠菌體外藥敏試驗K-B法與E-test法的對照研究

李廷軍 邱婷婷

（山東省濟南市第二人民醫院，山東 濟南 250001）

念珠菌體外藥敏試驗K-B法與E-test法的對照研究

李廷軍 邱婷婷

（山東省濟南市第二人民醫院，山東 濟南 250001）

目的 探討分別采用K-B法與E-test法檢測我院念珠菌體外藥物敏感性，為臨床合理用藥提供參考。方法 隨機選擇我院2010年～2014年間的110例念珠菌眼炎患者，收集110例眼分泌物標本，接種培養念珠菌菌株110株，分別采用K-B法與E-test法檢測念珠菌對于伊曲康唑、氟康唑的敏感率，比較檢測結果的差異性。結果 采用K-B法對伊曲康唑敏感菌株的檢出率為88.2%，對氟康唑敏感菌株的檢出率為97.3%；采用E-test法對伊曲康唑敏感菌株的檢出率為86.4%，對氟康唑敏感菌株的檢出率為98.2%，二者的差異經統計學比較分析無明顯差異（P＞0.05）。結論 采用K-B法與E-test法檢測念珠菌體外藥敏試驗的結果具較高的符合率，均為較為理想的念珠菌體外藥敏試驗方法，可根據醫院具體情況加以選擇。

念珠菌；體外藥敏試驗；K-B法；E-test法

念珠菌是臨床最為常見的條件致病真菌，正常時可寄居于人體皮膚、口腔、陰道等處，當某些情況導致機體免疫功能低下，或正常寄居部位微環境失調時，就容易導致念珠菌病，常見的有皮膚黏膜淺層或全身系統性感染，除皮膚念珠菌病之外，還可引起念珠菌性口腔炎、念珠菌性腦膜炎、念珠菌性菌血癥、念珠菌性眼炎等［1］。隨著臨床抗真菌藥物的大范圍應用，念珠菌的耐藥性與日俱增［2］，為保障療效，有必要選擇合理的方法對念珠菌進行體外藥敏試驗。

1　材料與方法

1.1菌株來源：選擇2010年～2014年間我院收集的110株念珠菌分離菌株，標本取自110例念珠菌眼炎患者，其中男性62例，女性48例，患者年齡17～63歲，平均年齡（38.5±11.2）歲。感染白色念珠菌76例（占69.1%），近平滑念珠菌23例（占20.9%），光滑念珠菌7例（占6.4%），其他念珠菌4例（占3.6%）。

1.2所用材料：無菌棉拭子，瓊脂培養基，E-test抗伊曲康唑藥敏條（0.002～256 μg/mL，E-test抗氟康唑藥敏條（0.002～256 μg/mL），伊曲康唑、氟康唑，藥敏紙片等。

1.3菌種鑒定：將沾有分泌物的無菌棉拭子接種于沙氏培養基于30 ℃培養1～3 d，經鏡檢證實者從瓊脂培養基上挑取純化后菌落均勻懸浮于0.85%氯化鈉溶液中，分別制成0.5和2麥氏濁度菌懸液，吸取250 μL的2麥氏濁度菌懸液加入培養液混勻，接種于鑒定板孔于35 ℃培養1～2 d，嚴格按照操作說明進行判斷。

1.4K-B法藥敏試驗：吸取一定量0.5麥氏濁度菌懸液加生理鹽水1∶1稀釋，用無菌棉拭子沾取稀釋后菌懸液從3個方向均勻接種于瓊脂培養基，室溫環境靜置15 min，用無菌鑷子夾取藥敏紙片貼在瓊脂表面，室溫環境靜置15 min后移入37 ℃恒溫箱培養1～2 d。測量抑菌圈直徑，按照相應標準讀取藥敏結果。

1.5E-test法藥敏試驗：無菌棉拭子沾取0.5麥氏濁度菌懸液從3個方向均勻接種于瓊脂培養基，室溫環境靜置15 min，用無菌鑷子夾取藥敏試紙條緊貼于瓊脂培養基表面，室溫環境靜置15 min后移入37 ℃恒溫箱培養1～2 d。測量抑菌圈直徑，按照相應標準讀取藥敏結果。

1.6判斷標準：K-B法念珠菌對伊曲康唑敏感是指抑菌直徑≥15 mm，對氟康唑敏感是指抑菌直徑≥20 mm。 K-B法念珠菌對藥物敏感是指≤0.125 μg/mL。

1.7統計學方法：所有數據均以SPSS17.0統計學軟件進行分析，將檢測結果的比較采取χ2檢驗，P＜0.05表明差異有統計學意義。

2　結 果

采用K-B法對伊曲康唑敏感菌株的檢出率為88.2%（97/110），對氟康唑敏感菌株的檢出率為97.3%（107/110）；采用E-test法對伊曲康唑敏感菌株的檢出率為86.4%（95/110），對氟康唑敏感菌株的檢出率為98.2%（108/110），二者的差異經統計學比較分析無明顯差異（P＞0.05），見表1。

3　討 論

近年來，隨著抗生素、激素、免疫抑制劑的大量應用以及器官移植術的廣泛開展，念珠菌病的發病率逐年升高［3］。念珠菌眼炎是由正常狀態下人體的共生念珠菌在一定條件下導致的，往往出現在免疫機制受損、糖尿病患者、念珠菌血癥、獲得性免疫缺陷綜合征等患者之中。以往念珠菌性眼炎在眼科感染性疾病之中所占比例較低，屬于臨床少見病，但隨著免疫抑制劑、靜脈高營養、長期抗生素應用、長期留置導管等的廣泛使用，念珠菌造成眼部感染的病例數也呈顯著增長趨勢。念珠菌眼炎的最主要發病機制是念珠菌隨血流進入脈絡膜，隨后大量繁殖，最終累及玻璃體及視網膜，主要臨床表現為患眼疼痛、視力明顯下降、眼前有漂浮物感，病變部位不同，病情的嚴重程度不一。對于多數病例而言，治療不及時可能導致嚴重的眼內炎癥甚至引起失明。因此對于念珠菌性眼炎患者，應采取積極的抗真菌藥物治療，包括口服、靜脈輸注以及眼內局部給藥。而隨著抗真菌藥的廣泛應用，耐藥念珠菌也不斷增加。為防止唑類抗真菌藥交叉耐藥，指導臨床合理用藥，保障治療效果，對于念珠菌抗真菌藥物敏感性的檢測十分有必要。E-test法和K-B法是常用的念珠菌體外藥敏試驗方法，其中E-test法可直接測定藥物抑菌濃度，準確性高，讀取藥敏結果直觀便捷，但是所用材料訂貨周期較長，成本昂貴，一般性的醫院難以用于臨床常規檢查，K-B法具有操作簡單、成本低廉等優點［4-5］。

表1　K-B法和Etest法藥敏檢測結果比較（株）

本文研究表明，采用K-B法對伊曲康唑敏感菌株的檢出率為88.2%（97/110），對氟康唑敏感菌株的檢出率為97.3%（107/110）；采用E-test法對伊曲康唑敏感菌株的檢出率為86.4%（95/110），對氟康唑敏感菌株的檢出率為98.2%（108/110），二者經統計學比較分析無明顯差異（P＞0.05），也證明K-B法與E-test法檢測結果具有較高的符合率，操作簡便可靠，成本低效率高，適合一般醫院作為臨床常規檢測手段。

［1］ Miranda TT，Vianna CR，Rodrigues L，et al.Differential Proteinase Patterns among Candida albicans Strains Isolated from Root Canal and Lingual Dorsum: Possible Roles in Periapical Disease［J］.J Endod，2015，41（6）:841-845.

［2］ 苗琦，張石群，曹永兵，等.反轉錄轉座子TCA4與白念珠菌耐藥性的研究［J］.中國真菌學雜志，2012，7（5）:261-264.

［3］ Fichadia H，Layman L.Candida parapsilosis Tenosynovitis in an Immunocompetent Patient: Case Report and Review of Literature［J］.J Hand Surg，2015，40（5）:993-996.

［4］ 顧一心，何利華，陶曉霞，等.空腸彎曲菌瓊脂稀釋法和E-test法抗生素敏感性檢測結果差異分析［J］.中國人獸共患病學報，2013，29（4）:335-338，348.

［5］ 張昭寰，郭丹鳳，王敬敬，等.改良K-B法用于副溶血性弧菌耐藥性檢測［J］.微生物學雜志，2014，34（1）:78-83.

R446.5；R519.3

B

1671-8194（2015）24-0145-02