肝動脈化療栓塞術對原發性肝癌患者T淋巴細胞亞群的影響

王立靜，苗同國，寧更獻，張建集，蔡麗芬

肝動脈化療栓塞術對原發性肝癌患者T淋巴細胞亞群的影響

王立靜，苗同國，寧更獻，張建集，蔡麗芬

目的探討肝動脈化療栓塞術（TACE）前后原發性肝癌（PHC）患者T細胞亞群的變化。方法采用流式細胞術（FCM）檢測PHC患者TACE術前1 d與術后1、2、3和4周外周血CD3、CD4、CD8 T細胞及CD4/CD8、CD4CD25/CD4的比值變化。結果PHC患者術前外周血T細胞亞群CD3、CD4、CD4/ CD8比值顯著低于健康對照組，CD8則明顯高于健康對照組（P＜0.05）；治療1周后外周血T細胞亞群指標較治療前明顯下降（P＜0.05），而4周后外周血T細胞亞群CD3、CD4、CD8及CD4/CD8比值較治療前顯著增高（P＜0.05）。PLC患者外周血中CD4CD25/CD4 T細胞的比例顯著高于健康對照組，與術前比較，術后1、2周外周血CD4CD25/CD4 T細胞的比例明顯升高，術后4周外周血CD4CD25/CD4 T細胞的比例顯著下降。結論TACE可以改善PHC患者的免疫狀況。

原發性肝癌；肝動脈化療栓塞術；T細胞亞群；細胞免疫功能

【Abstract】ObjectiveTo investigate the changes of T lymphocyte subsets in patients with primary hepatocellular carcinoma（HCC）after transcatheter arterial chemoembolization（TACE）.MethodsA total of 40 patients with pathologically-proved HCC（study group）were enrolled in this study.Other 40 healthy volunteers were randomly collected and used as control group.Peripheral blood CD3，CD4 and CD8 T cells as well as CD4/CD8，CD4CD25/CD4 ratio were determined one day before TACE and one，2，3 and 4 weeks after TACE were determined in all patients by using flow cytometry assay.The results were statistically analyzed.ResultsThe preoperative peripheral T lymphocyte subsets CD3，CD4 T cells and CD4/CD8 ratio in the study group were significantly lower than those in the control group，while CD8 T cells in the study group were significantly higher than that in the control group（P＜0.05）.One week after treatment，the indexes of peripheral T lymphocyte subsets in the study group were obviously decreased when compared with the preoperative data（P＜0.05），and 4 weeks after the treatment the peripheral T lymphocyte subsets，including CD3，CD4 and CD8 T cells as well as CD4/CD8 ratio，were significantly increased when compared with the preoperative data（P＜0.05）.The peripheral CD4CD25/CD4 ratio in the study group was much higher than that in the control group.In the study group，the peripheral CD4CD25/CD4 ratio determined at one and 2 weeks after the treatment was strikingly increased when compared with preoperative data；and four weeks after the treatment，the peripheral CD4CD25/CD4 ratio was dramatically decreased（P＜0.05）.Conclusion TACE can improve the immune status of HCC patients.（J Intervent Radiol，2015，24：165-168）

【Keywords】primaryhepatocellularcarcinoma；transcatheterarterialchemoembolization；T lymphocyte subsets；cellular immune function

原發性肝癌（primary hepatic carcinomas，PHC）是原發于肝臟的惡性上皮細胞腫瘤，主要包括肝細胞癌、肝內膽管癌以及肝細胞和肝內膽管混合癌，是臨床常見惡性腫瘤，病死率高，占我國惡性腫瘤死亡率第2位。PHC起病隱匿、發展快，一經發現多為中晚期，失去手術機會。肝動脈栓塞化療（TACE）適應證較廣，與傳統的手術切除相比具有創傷小，費用低的優勢，已成為中晚期肝癌的主要治療手段。其基本的治療原理是栓塞腫瘤供血動脈致腫瘤壞死。研究證實，肝癌的發生進展及預后與腫瘤局部微環境和全身免疫功能狀態密切相關，肝癌組織壞死后釋放的腫瘤抗原可誘導抗腫瘤特異性T淋巴細胞免疫反應［1-2］。

作為一種微創治療手段，TACE在臨床上的治療效果為醫患所接受。本研究通過檢測肝癌患者在TACE后不同治療時段外周血CD3、CD4、CD8、CD4/ CD8的變化及調節性T淋巴細胞CD4CD25在CD4 T細胞中的百分比，來觀察TACE對患者機體免疫功能的影響。

1　材料與方法

1.1一般資料

選取我院2011年1月—2013年1月經臨床或肝穿刺病理證實為肝癌的患者40例。其中男32例，女8例，平均年齡（52.8±15.2）歲。所有患者均有乙型肝炎病史，肝功能Child-Pugh分級A級8例，B級30例，C級2例，治療前均在接受核苷類藥物抗病毒治療。以年齡性別為匹配條件，隨機選擇40例正常體檢志愿者作為對照組。兩組研究對象久居當地，在飲食、嗜好、民族、氣候環境等方面基線一致。所有研究對象均無糖尿病、類風濕、甲狀腺功能亢進等自身免疫性疾病史，入組前后均未進行過免疫治療。

1.2方法

1.2.1治療方法全部患者均符合TACE治療適應證，并行TACE治療，采用Seldinger技術，經皮股動脈穿刺，導管選擇至腫瘤供血動脈行DSA造影。根據腫瘤血供情況進行栓塞。治療方案為5-氟尿嘧啶750～1 000 mg，順鉑40～80 mg，絲裂霉素20 mg，聯合超液化碘油5～15 ml進行栓塞。

1.2.2流式細胞計（FCM）檢測CD3、CD4、CD8、CD4CD25以及CD4/CD8、CD4CD25/CD4比值抽取健康志愿者和PLC患者術前1 d血樣進行檢測，作為比較基線；并分別于術后1、2、3和4周抽取PLC患者血樣。用淋巴細胞分離液密度梯度離心法分離外周血中有核細胞，外周血中有核細胞染色標記30 min，溶血10 min，300 g離心5 min，棄上清液，PBS洗2次，隨后上機檢測，并采用Cellquest軟件進行樣品測定分析。

1.3統計學分析

2　結果

2.1肝癌患者與健康對照組T細胞亞群水平對比

肝癌患者外周血中CD3、CD4、CD8、CD4/CD8的表達分別為50.16±6.31、27.12±3.36、27.36± 5.64、1.16±0.27，與健康對照組相比，均存在統計學差異（P＜0.05）。其中，肝癌患者CD4 T細胞較健康對照組明顯下降，而CD8 T細胞則呈明顯升高，CD4/CD8較健康對照組也呈明顯下降。見表1。

表1　肝癌患者與健康對照組T細胞亞群水平對比（±s）

表1　肝癌患者與健康對照組T細胞亞群水平對比（±s）

注：a表示與對照組比較，P＜0.05；b表示與對照組比較，P＞0.05

組別CD3CD4CD8CD4/CD8CD4CD25/CD4肝癌組50.16±6.31a27.12±3.36a27.36±5.64a1.16±0.27a9.15±3.63b健康對照組61.35±3.0732.54±5.5621.87±2.751.85±0.156.20±2.25

2.2TACE治療前后肝癌患者外周血T細胞亞群的變化

TACE治療1周后外周血T細胞亞群CD3、CD4及CD4/CD8較治療前明顯下降（P＜0.05），治療4周后外周血T細胞亞群CD3、CD4及CD4/CD8較治療1周后有明顯改善（P＜0.01），較治療前也有顯著改善（P＜0.05）。治療后2周CD3、CD4及CD4/CD8水平略低于治療前，治療3周后CD3、CD4及CD4/CD8稍高于治療前，但差異無統計學意義（P＞0.05）。見表2。

表2　TACE治療原發性肝癌前后外周血T細胞亞群及CD4CD25調節性T細胞的變化（±s）

表2　TACE治療原發性肝癌前后外周血T細胞亞群及CD4CD25調節性T細胞的變化（±s）

注：a表示與術前比較，P＜0.05；b表示治療后4周與治療后1周比較，P＜0.01

組別CD3CD4CD8CD4/CD8CD4CD25/CD4術前50.16±6.3127.12±3.3627.36±5.641.16±0.279.15±3.63術后1周46.55±3.94a22.65±2.35a28.48±6.210.85±0.16a11.65±5.12術后2周49.13±2.4325.43±3.1626.37±5.450.98±0.3210.26±6.64術后3周52.36±4.6426.46±2.5326.69±5.131.20±0.158.60±5.73術后4周54.35±3.43b30.50±4.12b25.83±3.901.36±0.22b7.21±3.42b

2.3TACE治療前后肝癌患者外周血CD4CD25調節性T細胞比例變化

肝癌患者TACE術前外周血中CD4CD25/CD4為（9.15±3.63），相對高于健康對照組，但差異無統計學意義（P＞0.05）；術后1、2周明顯升高，分別為（11.65±5.12）、（10.26±6.64），與治療前比較差異有統計學意義（P＜0.05）；術后3周基本接近治療前水平，為（8.60±5.73），與術前比較差異無統計學意義；術后4周CD4CD25 T細胞占CD4 T細胞的比例為（7.21±3.42），較治療前明顯降低（P＜0.05）。見表1、2。

3　討論

PHC是我國常見惡性腫瘤之一，具有較高的發病率和病死率。針對PHC的基礎和臨床研究一直是腫瘤學科研究的重點和熱點。加強對機體免疫狀態的監測，對于肝癌患者病情評估、臨床診療方案的制定、完善肝癌治療模式和提高療效具有重要作用［3］。機體免疫功能與腫瘤的發生、發展及轉歸關系密切，其中T細胞在機體抗腫瘤的免疫調節中起著舉足輕重的作用［4］。

CD3細胞代表成熟的T淋巴細胞，是細胞免疫中主要的活性細胞，可分為CD4和CD8 T細胞2個亞群。臨床上通過檢測CD4、CD8等T細胞數值以及CD4/CD8細胞比值來判斷機體免疫平衡的狀態。在正常情況下，淋巴細胞亞群中CD4細胞和CD8細胞處于一個相對穩定平衡狀態，維持機體免疫功能。但在癌癥患者，機體免疫力常遭到不同程度的破壞，呈現出CD4/CD8細胞比值下降［5］，抗腫瘤作用減弱，有利于腫瘤的發生、發展。本研究顯示與健康對照組相比肝癌患者存在細胞免疫功能紊亂，表現為外周血CD3、CD4、CD4/CD8水平明顯降低，CD8比例明顯升高，提示肝癌患者的細胞免疫功能處于明顯抑制狀態。TACE治療1周后CD3、CD4、CD4/CD8比值較術前降低，CD8高于術前，說明TACE治療在短時間內加重了患者原有的免疫抑制狀態。可能因為大部分肝癌患者已到了中晚期，腫瘤體積較大，介入栓塞范圍較大，對肝組織產生了的一定損害，且短期內應用大劑量化療藥物進一步加重了原有的免疫抑制狀態。TACE治療2、3、4周后，在未給予免疫增強劑情況下，患者免疫功能恢復明顯好于治療1周后，較治療前也有明顯改善。這可能是由于TACE直接殺傷腫瘤細胞，減輕甚至清除腫瘤負荷，致使腫瘤細胞分泌的免疫抑制因子減少，使得腫瘤導致的免疫抑制得到緩解，促進了機體免疫功能的恢復。并為是否可再次行TACE治療提供了的證據。

CD4CD25Treg細胞是近年發現的非常最重要的免疫負調節細胞［6］。該類細胞高水平表達CD25分子，在免疫應答的負調節及維持自身免疫耐受中發揮著重要作用，可通過抑制CD4CD25、CD8CD25T細胞、NK細胞的增殖及IL-2的分泌功能，抑制CD8記憶性T細胞的反應力，降低抗原提呈效率［7-8］。另有研究提示，肝癌患者CD4+CD25+T細胞比例明顯高于正常人群，而淋巴細胞總數偏低，同樣提示肝癌患者存在不同程度的免疫抑制［9-10］。本組40例肝癌患者外周血中CD4CD25/CD4相對高于健康組，但差異無統計學意義，未能取得與其他研究相似的結果，樣本數量偏少也許是造成這一差別的原因。術后1、2周CD4CD25/CD4較前升高，呈現出明顯的免疫抑制狀態，術后4周免疫功能逐漸恢復，較治療前顯著降低。可見TACE治療對機體免疫功能呈現先抑后揚的態勢，提醒我們在為肝癌患者行TACE治療期間，動態檢測細胞免疫功能很有必要，有利于我們抓住最好的治療時機和TACE治療次數，最大的保持機體最佳的免疫狀態，增加機體耐受性，提高療效。

［1］Mizukoshi E，Nakamoto Y，Arai K，et al.Comparative analysis of various tumor-associated antigen-specific t-cell responses in patients with hepatocellular carcinoma［J］.Hepatology，2011，53: 1206-1216.

［2］Fu JL，Xu DP，Liu ZW，et al.Increased regulatory T cells correlate with CD8 T-cell impairment and poor survival in hepatocellular carcinoma patients［J］.Gastroenterology，2007，132: 2328-2339.

［3］O'Beirne JP，Harrison PM.The role of the immune system in the control of hepatocellularcarcinoma［J］.Eur J Gastroenterol Hepatol.2004，16:1257-1260.

［4］王志利，張躍偉，徐丹鳳.射頻消融治療肝癌后機體免疫功能變化的研究進展［J］.當代醫學，2012，18：24-25.

［5］Cho Y，Miyamoto M，Kato K，et al.CD4+and CD8+T cells cooperate to improve prognosis of patients with esophageal squamous cell carcinoma［J］.Cancer Res，2003，63:1555-1559.

［6］Chen X，Du Y，Huang ZM.CD4+CD25+Treg derived from hepatocellularcarcinomamiceinhibitstumorimmunity［J］. Immunol Lett，2012，148:83-89.

［7］Almeida AR，Ciernik IF，Sallusto F，et al.CD4+CD25+Treg regulate the contribution of CD8+T-cell subsets in repopulation of the lymphopenic environment［J］.Eur J Immunol，2010，40: 3478-3488.

［8］Mcnally A，Hill GR，Sparwasser T，et al.CD4+CD25+regulatory T cells control CD8+T-cell effector differentiation by modulating IL-2 homeostasis［J］.Proc Natl Acad Sci USA，2011，108:7529-7534.

［9］陳中，倪家連，劉魯岳，等.肝癌微環境中CD4+CD25+調節性T細胞與T細胞免疫的關系［J］.臨床肝膽病雜志，2008：38-40.

［10］Zhao F，Korangy F，Greten TF.Cellular immune suppressor mechanisms in patients with hepatocellular carcinoma［J］.Dig Dis，2012，30:477-482.

The influence of TACE on T lymphocyte subsets in patients with primary liver cancer

WANG Li-jing，MIAO Tong-guo，NING Geng-xian，ZHANG Jian-ji，CAI Li-fen.Intensive Care Unit，Fifth Hospital of Shijiazhuang，Shijiazhuang，Hebei Province 050000，China

MIAO Tong-guo，E-mail：oncology@139.com

R735.7

B

1008-794X（2015）-02-0165-04

2014-08-12）

（本文編輯：俞瑞綱）

10.3969/j.issn.1008-794X.2015.02.019

050000河北石家莊市第五醫院重癥醫學科（王立靜、張建集、蔡麗芬），介入科（苗同國），肝病科（寧更獻）

苗同國E-mail：oncology@139.com