枯草芽孢桿菌水分散粒劑防治辣椒疫病的效果及其對辣椒的促生作用

黃大野　姚經(jīng)武　朱志剛等

摘要：通過盆栽試驗，研究枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）水分散粒劑防治辣椒疫病的效果及其對辣椒的促生作用。結(jié)果表明，1012 CFU/g枯草芽孢桿菌水分散粒劑對辣椒疫病具有良好的防效并具有一定的促生作用。在濃度為4 000 μg/mL、2 000 μg/mL和1 000 μg/mL時，對辣椒疫病的防效分別為86.67%、53.33%和26.67%。在濃度為2 000 μg/mL時，辣椒的株高、根長和鮮重分別較對照提高53.16%、54.75%和61.48%。

關(guān)鍵詞：枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）；水分散粒劑；辣椒疫病；促生作用

中圖分類號：S436.611 文獻標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2015）19-4737-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.19.020

Abstract： Through pot experiment， controlling effect on pepper Phytophthora blight and plant growth-promoting effect were researched. The results showed that 1012 CFU/g Bacillus subtilis water dispersible granule had good controlling effect on pepper Phytophthora blight and plant growth-promoting effect. The prevention effect of 1012 CFU/g Bacillus subtilis water dispersible granule on pepper Phytophthora blight with the concentration of 4 000 μg/mL， 2 000 μg/mL and 1 000 μg/mL was 86.67%， 53.33%and 26.67%， respectively. The shoot length， root length， fresh weight increased 53.16%，54.75% and 61.48%， respectively.

Key words： Bacillus subtilis； water dispersible granulehas； pepper Phytophthora blight； growth-promoting effect

辣椒疫病是由卵菌綱辣椒疫霉菌（Phytophthora capsici）引起的一種辣椒毀滅性的土傳病害，是引起辣椒減產(chǎn)的主要原因[1-3]。盡管可以通過輪作和適當(dāng)?shù)呐潘谝欢ǔ潭壬峡刂撇『Φ陌l(fā)生，但目前生產(chǎn)上還是缺乏有效的防治方法。其卵孢子可以在干旱和低溫等極端環(huán)境下生存很多年，許多化學(xué)殺菌劑已經(jīng)用于防治辣椒疫病，但是大量的使用也產(chǎn)生了環(huán)境污染和抗藥性等一系列問題[4，5]。因此，急需探索安全有效的方法用于防治辣椒疫病。

生物防治是一種重要的防治土傳病害的替代方法[6]，一些生防細(xì)菌如Pseudomonas sp. 和Bacillus sp.已用于防治疫霉屬（Phytophthora）真菌引起的病害[7-9]。1012 CFU/g枯草芽孢桿菌水分散粒劑是由湖北省生物農(nóng)藥工程研究中心自主研發(fā)的枯草芽孢桿菌新劑型，前期的研究表明，其對半知菌尖孢鐮刀菌（Fusarium oxysporum）引起的西瓜枯萎病和立枯絲核菌（Rhizoctonia solani）引起的黃瓜立枯病具有良好的防治效果[10，11]。本試驗旨在研究其對卵菌綱病害辣椒疫病的防治效果，為進一步在生產(chǎn)上的推廣和使用奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

病原菌：立枯絲核菌，由湖北省生物農(nóng)藥工程研究中心分離保存。

供試藥劑：1012 CFU/g枯草芽孢桿菌水分散粒劑，由湖北省生物農(nóng)藥工程研究中心研制；枯草芽孢桿菌可濕性粉劑Serenade，由美國AgraQuest公司提供；50%烯酰嗎啉可濕性粉劑，由廣東省東莞市瑞德豐生物科技有限公司生產(chǎn)。

供試作物：辣椒，品種為中椒106。

1.2 方法

1.2.1 枯草芽孢桿菌水分散粒劑防治辣椒疫病 辣椒種子用1%次氯酸鈉浸泡30 s消毒，取出后用無菌水反復(fù)沖洗4次，隨后將辣椒種子放于墊有紗布的培養(yǎng)皿中，28 ℃催芽48 h。將催芽后種子播于穴盤中，溫室常規(guī)管理，培養(yǎng)至4～5葉期備用。

將辣椒疫霉菌從斜面活化轉(zhuǎn)到燕麥培養(yǎng)基進行活化，隨后轉(zhuǎn)入燕麥平板28 ℃光暗交替培養(yǎng)10 d，隨后刷取孢子，放入4 ℃冰箱30 min后轉(zhuǎn)入25 ℃溫箱保存，需要時在顯微鏡下利用血球計數(shù)板計數(shù)，將游動孢子數(shù)調(diào)節(jié)為5×105備用。

將培養(yǎng)4～5葉期的辣椒苗分別用4 000、2 000和1 000 μg/mL枯草芽孢桿菌水分散粒劑灌根，對照藥劑用1 000 μg/mL 50%烯酰嗎啉可濕性粉劑和 4 000 μg/mL Serenade灌根，以灌去離子水處理作為空白對照。每個處理3次重復(fù)，每個重復(fù)18株苗。24 h后用制備好的辣椒疫霉菌孢子懸浮液灌根，每株苗灌2 mL菌懸液。10 d后統(tǒng)計各處理病情指數(shù)并計算防效。病情分級[9]及防效計算方法如下：

0級，沒有明顯癥狀；1級，葉子稍微變黃，莖部有少許褐色病變；2級，植株30%～50%發(fā)病；3級，植株50%～70%發(fā)病；4級，植株70%～90%發(fā)病；5級，植株死亡。

病情指數(shù)=∑（各級植株數(shù)×級別）/（調(diào)查總株數(shù)×最高級別）×100%防治效果=（對照病情指數(shù)-處理病情指數(shù)）/對照病情指數(shù)×100%

1.2.2 枯草芽孢桿菌水分散粒劑對辣椒的促生作用 按照1.2.1處理種子，播種于穴盤中，隨后進行灌根處理。藥液濃度為2 000 μg/mL，空白對照灌去離子水，每隔7 d灌根1次，共灌根2次，20 d后統(tǒng)計辣椒的株高、根長和鮮重。

2 結(jié)果與分析

盆栽試驗結(jié)果表明，枯草芽孢桿菌水分散粒劑灌根對辣椒疫病具有良好的防治效果（表1，圖1），在4 000 μg/mL條件下灌根對辣椒疫病的防效達到86.67%，2 000 μg/mL時防效也達到50%以上，防效高于同類枯草芽孢桿菌Serenade，低于化學(xué)殺菌劑烯酰嗎啉。

枯草芽孢桿菌水分散粒劑對辣椒也具有明顯的促生作用（表2），2 000 μg/mL灌根處理，株高、根長和鮮重分別提高53.16%、54.75%和61.48%。與對照藥劑枯草芽孢桿菌制劑Serenade的促生效果相當(dāng)。

3 小結(jié)與討論

由于辣椒疫病危害嚴(yán)重，生產(chǎn)上防治藥劑較少，并且一些殺菌劑如甲霜靈等已經(jīng)出現(xiàn)了嚴(yán)重的抗藥性[12]，因此尋找新的替代藥劑和防治方法尤為重要。前期研究表明，枯草芽孢桿菌水分散粒劑對半知菌引起的西瓜枯萎病和黃瓜立枯病具有良好的防治效果。本研究表明，1012 CFU/g 枯草芽孢桿菌水分散粒劑對卵菌綱的辣椒疫病同樣具有良好的防治效果與促生作用。其高劑量4 000 μg/mL具有理想的防治效果，并且有明顯的促生作用，好于國外的同類枯草芽孢桿菌產(chǎn)品Serenade。其田間防治效果與增產(chǎn)作用、化學(xué)殺菌劑交替使用和輪換使用以降低殺菌劑抗性壓力和增效作用等方面還需要進一步的研究，為該產(chǎn)品的田間推廣和應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

參考文獻：

[1] HAUSBECK M，LAMOUR K. Phytophthora capsici on vegetable crops： research progress and management challenges[J].Plant Disease，2004，88（12）：1292-1303.

[2] RAJKUMAR DR M，LEE W H，LEE K J. Screening of bacterial antagonists for biological control of Phytophthora blight of pepper[J].Journal of Basic Microbiology，2005，45（1）：55-63.

[3] OZGONEN H，ERKILIC A. Growth enhancement and Phytophthora blight （Phytophthora capsici Leonian） control by arbuscular mycorrhizal fungal inoculation in pepper[J]. Crop Protection，2007，26（11）：1682-1688.

[4] MAO W，LEWIS J A，LUMSDEN R，et al. Biocontrol of selected soilborne diseases of tomato and pepper plants[J].Crop Protection，1998，17（6）：535-542.

[5] PAVLOU G C，VAKALOUNAKIS D J. Biological control of root and stem rot of greenhouse cucumber， caused by Fusarium oxysporum f. sp. radicis-cucumerinum， by lettuce soil amendment[J].Crop Protection，2005，24（2）：135-140.

[6] TJAMOS E C，TSITSIGIANNIS T I，TJAMOS S E，et al. Selection and screening of endorhizosphere bacteria from solarised soils as biocontrol agents against Verticillium dahliae of solanaceous hosts[J].European Journal of Plant Pathology，2004， 110（1）：35-44.

[7] BHAI R S，KUMAR A. Effect of rhizobacteria on Phytophthora meadii， Fusarium oxysporum f.sp. vanillae and Colletotrichum vanillae infecting vanilla[J].Journal of Biological Control，2008， 22（1）：33-41.

[8] LEE K J，SERALATHAN K K，SUB H S，et al. Biological control of Phytophthora blight in red pepper （Capsicum annuum L.）using Bacillus subtilis[J].World Journal of Microbiolog Biotechnology，2008，24（7）：1139-1145.

[9] YANG M M，XU L P，XUE Q Y，et al. Screening potential bacterial biocontrol agents towards Phytophthora capsici in pepper[J].European Journal of Plant Pathology，2012，134（4）：811-820.

[10] 黃大野，曹春霞，龍 同，等.枯草芽孢桿菌水分散粒劑防治西瓜枯萎病研究[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，52（22）：5488-5489.

[11] 黃大野，姚經(jīng)武，朱志剛，等.枯草芽孢桿菌水分散粒劑防治黃瓜立枯病效果及對黃瓜的促生作用[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014， 53（18）：4327-4328，4335.

[12] 趙衛(wèi)松，韓秀英，王文橋，等.辣椒疫霉對殺菌劑抗藥性研究進展[J].農(nóng)藥，2010，49（2）：86-89.