VIDAS熒光免疫分析儀檢測血清肌鈣蛋白Ⅰ的分析性能評價

陳 佩， 王奇軍， 羅建平

(寧波市鄞州人民醫(yī)院檢驗科，浙江寧波315040)

2007年針對急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)的文件［1］指出:如果心肌肌鈣蛋白(cardiac troponin，cTn)檢測值高于參考區(qū)間第99百分位值［要求檢測方法不精密度(CV)在第99百分位值處≤10%］，并有相應的臨床癥狀或心電圖的改變，可考慮診斷為AMI。隨著臨床應用需求和科學技術的發(fā)展，cTn檢測方法不斷更新［2］。我們參照美國臨床實驗室標準化協(xié)會(the Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI)評價方案對 VIDAS熒光免疫分析儀(簡稱VIDAS)檢測cTnI的性能進行了分析驗證。

一、材料與方法

1.對象 (1)疑似AMI組:收集寧波市鄞州人民醫(yī)院以胸痛入院的疑似或確診AMI患者新鮮樣本46例，要求無溶血、黃疸、脂濁;(2)表面健康人組:收集寧波市鄞州人民醫(yī)院常規(guī)健康體檢者20名，男12名，女8名，年齡18～78歲，實驗室及心電圖檢查均正常，無急性炎癥，半年內(nèi)均無輸血和大手術史，排除心腦血管疾病。

2.儀器與試劑 VIDAS及原裝配套試劑、校準品、質控品。DXI800化學發(fā)光免疫分析儀(簡稱DXI800)及原裝配套試劑、校準品，BIO-RAD心肌標志物質控品。

3.精密度評估 參考CLSI EP5-A2文件［3］，自配低、高2個濃度混合血清(cTnI濃度為0.56和16.08 ng/mL)，－20℃凍存。每天測定2批，2批間隔＞2 h，每批重復測定2次，連續(xù)測定20 d，計算批內(nèi)、批間檢測值的均值()、標準差(s)及變異系數(shù)(CV)。

4.線性范圍 參考CLSI EP6-A文件［4］，選取cTnI高值(27.83 ng/mL)和低值(0.01 ng/mL)血清各1 份，按5∶0、4∶1、3∶2、2∶3、1∶4、0∶5 的比例混合，制備成6個濃度梯度的樣品，每個樣品隨機重復測定2次，計算，將與理論值做直線回歸。

5.干擾實驗 參考CLSI EP7-A2文件［5］，在低(0.08 ng/mL)、高(0.80 ng/mL)2 個濃度樣本中分別添加血紅蛋白(hemoglobin，Hb)、總膽紅素(total bilirubin，TBil)、甘油三酯(triglyceride，TG)配成一定濃度，每個濃度測定3次，計算，以偏差＜±10%為評判標準。

6.方法學比較 參考CLSI EP9-A2文件［6］，用DXI800(X)和VIDAS(Y)同時檢測40份新鮮樣本，對檢測結果進行線性回歸分析，評價兩者相關性。

7.參考區(qū)間驗證 參照 CLSI C28-A2文件［7］，用20個表面健康體檢者標本，對參考區(qū)間進行驗證。如2個以下檢測值在參考區(qū)間外，則該參考區(qū)間可以接受。

8.統(tǒng)計學方法 采用 Microsoft Excel 2007、SPSS 18.0軟件進行統(tǒng)計分析。回歸分析采用線性回歸，相關分析采用Pearson相關。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

二、結果

1.質量控制 VIDAS和DXI800均處于良好的受控狀態(tài)。

2.精密度評估 VIDAS測定2個濃度混合血清的批內(nèi)、批間CV均低于廠商說明書所提供的CV。見表1。

3.線性范圍分析 不同稀釋比例cTnI測定結果及理論結果見表2。當cTnI濃度為0.01～27.83 ng/mL時線性良好，偏倚較小;直線方程為Y=0.997X－0.330，R2=0.999，P＜0.001。見圖1。

表1 cTnI方法批內(nèi)、批間檢測不精密度

表2 cTnI線性測定結果 (ng/mL)

圖1 VIDAS測定血清cTnI的線性范圍

4.干擾實驗 當TG＜14 mmol/L、TBil＜684 μmol/L、Hb＜10 g/L時對高、低2個濃度血清樣本cTnI檢測結果的干擾均＜±10%，相應濃度的干擾物對上述兩個樣本的cTnI檢測能力無明顯影響。

5.方法學比較 兩種檢測系統(tǒng)40份樣本檢測結果比對的回歸方程為Y=0.451X+0.158，R2=0.959。兩種檢測系統(tǒng)的相關性良好(P＜0.001)。見圖2。

圖2 VIDAS熒光免疫分析儀和DXI800檢測血清cTnI結果比對

6.參考區(qū)間驗證 20例表面健康者血清cTnI檢測結果均在廠商給定的參考區(qū)間內(nèi)，故采用0.01～0.11 ng/mL作為本實驗室的參考區(qū)間。

三、討論

VIDAS熒光免疫分析儀是由免疫夾心法和酶聯(lián)熒光法組成的檢測系統(tǒng)，由一個試劑條和一個固相包被針組成，全封閉式、自動化檢測，無攜帶交叉污染。

性能評價實驗顯示VIDAS測定2個濃度樣本的批內(nèi)、批間精密度均低于廠商說明書提供的CV。cTnI濃度在0.01～27.83 ng/mL范圍內(nèi)線性良好，偏倚較小。Hb＜10 g/L、TBil＜684 μmol/L、TG＜14 mmol/L對低、高2個濃度樣本的檢測結果均無干擾。與DXI800的檢測結果進行比對，回歸方程為Y=0.451X+0.158，R2=0.959，兩種檢測系統(tǒng)相關性良好(P＜0.001);但檢測結果差異較大。分析其原因，可能是因為兩種檢測系統(tǒng)是建立在不同的技術平臺上，由于不同抗體免疫反應性的差異和標準化的因素，使得同一樣本的檢測值差異較大。因此，本實驗室對cTnI項目在檢驗報告單上注明了檢測儀器，并建立了各自的參考區(qū)間。20名表面健康者血清cTnI檢測結果均在廠商提供的參考區(qū)間內(nèi)。

綜上所述，VIDAS檢測血清cTnI精密度、線性、抗干擾性、相關性均符合臨床檢驗要求，標本用量少，操作簡便，反應快速，熒光活性穩(wěn)定性好，儀器設備小巧，尤其適于急診快速檢測。

［1］Thygesen K，Alpert JS，White HD，etal.Universal definition of myocardial infarction［J］.Circulation，2007，116(22):2634-2653.

［2］宋凌燕，吳炯，郭瑋.高敏感心肌肌鈣蛋白檢測方法的臨床應用［J］.檢驗醫(yī)學，2010，25(8):664-668.

［3］Clinical and Laboratory Standards Institute.Evaluation of precision performance of quantitative measurement methods;approved guideline-second edition［S］.EP5-A2，CLSI，2004.

［4］Clinical and Laboratory Standards Institute.Evaluation of the linearity of quantitative measurement procedures:a statistical approach;approved guideline［S］.EP6-A，CLSI，2003.

［5］Clinical and Laboratory Standards Institute.Interference testing in clinical chemistry;approved guideline-second edition［S］.EP7-A2，CLSI，2005.

［6］Clinical and Laboratory Standards Institute.Method comparison and bias estimation using patient samples;approved guideline-second edition［S］.EP9-A2，CLSI，2010.

［7］Clinical and Laboratory Standards Institute.How to define and determine reference intervals in the clinical laboratory;approved guideline second edition［S］.C28-A2，CLSI，2010.