檉柳內生鏈霉菌CLR304抗MRSA次級代謝產物304A的研究

劉少偉，李舟，胡辛欣，游雪甫，孫承航

·論著·

檉柳內生鏈霉菌CLR304抗MRSA次級代謝產物304A的研究

劉少偉，李舟，胡辛欣，游雪甫，孫承航

目的 從沙生植物檉柳來源的內生鏈霉菌 CLR304 發酵液中分離鑒定具有強抗耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）活性的次級代謝產物。

方法 基于 16S rRNA 基因序列，對菌株 CLR304 進行初步分類鑒定；采用液體發酵、溶劑萃取、正相硅膠層析、薄層層析以及高效液相制備分離純化 CLR304 的活性次級代謝產物 304A；根據紫外光譜、高分辨質譜和核磁共振波譜及文獻比對，鑒定化合物 304A 的平面結構；采用瓊脂稀釋法測定化合物的抗菌活性。

結果 菌株 CLR304 為鏈霉菌，從其發酵液中分離獲得抗MRSA 次級代謝產物 304A，證明為維吉尼霉素 M1。抑菌活性實驗顯示其對葡萄球菌、屎腸球菌的敏感株和耐藥株均具有較強活性（MIC = 1～4 μg/ml）。

結論 首次從檉柳中獲得產生維吉尼霉素 M1的內生鏈霉菌，表明沙生植物檉柳蘊含藥用放線菌資源。

檉柳；內生放線菌；次級代謝產物；維吉尼霉素

植物內生菌（endophytes）是指在其生活史的全部或部分階段生活于健康植物組織內部，不引發植物產生明顯病癥，與植物形成穩定共生關系的微生物菌群［1］。在長期的協同進化過程中，植物內生菌與宿主植物之間形成了一種動態平衡的內生關系，不僅參與植物次生代謝與成分的轉化和合成，而且能夠獨立產生豐富的次級代謝產物，成為眾多結構新穎天然產物的重要來源［2］。

檉柳屬（Tamarix）植物為落葉灌木或小喬木，具有顯著的耐高溫、耐輻射、耐干旱、耐貧瘠、耐鹽堿的特性，是荒漠、半荒漠生態系統的關鍵物種，主要分布在如新疆、甘肅、青海等我國西北干旱、半干旱地區以及華北濱海鹽堿地區，在荒漠植被中占有重要地位［3］。對檉柳屬植物的研究，目前主要集中在系統分類、形態特征、生理機制、植物化學、藥理作用、生物防治等方面，對檉柳內生微生物的研究較少，尤其是對放線菌，這一具有重要藥用價值的微生物的研究更加稀少［4-5］。為此，本課題組圍繞檉柳根際和內生環境，在我國新疆地區展開了一系列藥用放線菌資源勘探相關研究，并取得了一些研究結果［6-9］。另外根據報道［10］，采集了北京房山地區野生檉柳，從根部分離到一株具有廣譜抗菌活性的內生放線菌菌株 CLR304。本文報道該菌株的初步鑒定、該菌株產生的具有抗耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）次級代謝產物 304A 的分離純化和結構鑒定及抗菌活性等相關的研究結果。

1 材料與方法

1.1 材料和儀器

1.1.1 菌株 菌株 CLR304 為從北京房山檉柳根部分離得到的內生放線菌；抑菌活性測試所用檢定菌耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）、枯草芽孢桿菌、糞腸球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌由中國醫學科學院醫藥生物技術研究所保存。

1.1.2 培養基

斜面培養基（高氏一號瓊脂培養基）：可溶性淀粉 20 g、KNO31 g、K2HPO40.5 g、MgSO4·7H2O 0.5 g、NaCl 0.5 g、FeSO4·7H2O 0.01 g、瓊脂 20 g、蒸餾水 1000 ml，pH 7.4～7.6。

種子和發酵培養基（A2培養基）：葡萄糖0.5%、酵母膏 0.5%、蛋白胨 0.5%、牛肉膏 0.5%、玉米漿 0.4%、可溶性淀粉 2%、黃豆餅粉 1%、CoCl20.02%、CaCO30.4%，pH 7.2。

檢定菌培養基：Mueller Hinton（MH）液體培養基和 Mueller Hinton Agar（MHA）固體培養基為英國 Oxoid 公司產品。

1.1.3 主要試劑 PCR 常規操作所用試劑和 Taq酶均購自北京鼎國昌盛生物技術有限公司；High Fidelity PCR SuperMix、pEASY-T1 克隆試劑盒、EasyPure Quick Gel Extraction Kit、Trans-T1 感受態細胞均購自北京全氏金生物技術有限公司；乙酸乙酯、甲醇和丙酮等有機試劑均為分析純，由北京化工廠生產；色譜級甲醇購于美國 Honeywell Burdick & Jackson 公司；蒸餾水為屈臣氏集團有限公司產品。

1.1.4 分離填料 層析硅膠采用青島海洋化工廠生產的 100～200 目硅膠 G；薄層層析采用德國默克公司的 TLC Silica gel 60 F254玻璃薄層板；高效液相色譜柱為 Agilent ZORBAX SB-C18（250 mm× 9.4 mm，5.0 μm）。

1.1.5 主要儀器 Veriti 96 well fast thermal cycler PCR 擴增儀為美國 Applied Biosystems 公司產品；DYY-6C 型電泳儀為北京市六一儀器廠產品；OSB-2100 型旋轉蒸發儀為日本東京理化公司產品；RVC2-18 型離心濃縮儀為德國 Christ 公司產品；LC-20AT 型高效液相色譜儀為日本島津公司產品；ThermoScientific Q Exactive 高分辨質譜為美國Thermo 公司產品；Varian VNS-600 型核磁共振儀為瑞士瓦里安公司產品；MIT-P 細菌多點接種儀為日本 Sakuma 公司產品。

1.2 方法

1.2.1 菌株 CLR304 的分子分類 采用Chelex-100 法［11］提取菌株 CLR304基因組 DNA，并以此為模板進行 16S rRNA 基因 PCR 擴增，擴增引物為細菌通用引物：27f（5' AGAGTTTGATC CTGGCTCAG 3'）和 1492r（5' TACGGCTACCTT GTTACGACTT 3'），50 μl PCR 反應體系中含有Taq SuperMix 25 μl、27f 引物 1.5 μl、1492r 引物1.5 μl、模板 2 μl、無菌水 20 μl。反應條件：95 ℃預變性 5 min；94 ℃ 變性 1 min，55 ℃ 退火 1 min，72 ℃ 延伸 2 min，共 35 個循環；最后 72 ℃ 后延伸 10 min。PCR 擴增產物由上海生工生物工程技術服務有限公司完成測序。根據測序結果，將16S rRNA 基因序列登錄數據庫 EzBioCloud 中進行相似性比對搜索，將相似性較高的有效發表種的16S rRNA 基因序列作為參比序列，用 Clustal［12］進行多序列比對，系統進化矩陣根據 Kimura 2-paramete 模型估計，采用 MEGA5.0［13］軟件以鄰近法（Neighbor-Joining）［14］進行聚類分析并構建系統發育樹。系統發育樹的拓撲結構穩定性采用自展值（bootstrap value）分析的方法并重復取樣1000 次。

1.2.2 菌株 CLR304 的發酵 無菌操作下將新鮮生長于斜面的菌株 CLR304挖塊接種于 250 ml三角瓶中（含 50 ml A2培養基），在 28 ℃、180 r/min條件下培養 48 h，作為一級種子；將一級種子按照5% 的接種量，接種于 5000 ml 立瓶中（含 1000 ml A2培養基），28 ℃、180 r/min 搖床上旋轉振蕩培養 72 h，最終收獲發酵液約 20 L。

1.2.3 化合物 304A 的分離、純化 20 L 發酵液經 4500 r/min，20 min 離心后，上清液用等體積乙酸乙酯萃取，有機相經無水 Na2SO4脫水處理、旋轉蒸發干燥，獲棕褐色黏稠狀粗提物。粗提物用少量氯仿溶解后，濕法上樣于硅膠柱，以氯仿-甲醇99∶1、49∶1、24∶1、9∶1 和甲醇各 400 ml 進行梯度洗脫，收集洗脫流份（20 ml/管）并以 MRSA 為檢定菌，采用瓊脂平板法測定抗菌活性。結果表明，活性流份集中在氯仿-甲醇 49∶1 部分和 24∶1 部分。將活性較大的氯仿-甲醇 24∶1 洗脫液部分合并，減壓濃縮干燥獲得棕黃色活性粗品。將粗品用少量甲醇溶解后，點樣于 10 cm × 10 cm 硅膠層析板上，以展開劑甲醇-乙酸乙酯 1∶29 上行展開，將Rf值為 0.42 的活性條帶刮下，裝于小玻璃柱（15 cm × 1.5 cm），用適當體積的乙酸乙酯洗脫，經減壓濃縮干燥后得到淡黃色的半純品。半純品溶于少量甲醇，經 0.22 μm 濾膜過濾后進行 HPLC 制備，HPLC 條件為：70% 甲醇-水溶液為流動相，流速為 2 ml/min；檢測波長為 210、224 和 254 nm；按紫外吸收峰收集樣品后測定活性，收集保留時間為 28 min 左右的活性峰（命名為 304A），旋轉蒸發除去甲醇，冷凍干燥后，獲得約 6.0 mg 純品。

1.2.4 菌株 CLR304 酯提物的活性檢測 1 L 發酵液的乙酸乙酯提取物旋轉蒸發干燥后，用 1 ml甲醇溶解，制成濃縮 1000 倍的甲醇濃縮樣品備用。以耐甲氧西林金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、糞腸球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌為檢定菌，采用瓊脂擴散法對其進行活性檢測。吸取 30 μl 甲醇溶解的乙酸乙酯提取物滴加于直徑為 5 mm 的圓形無菌濾紙片上，待甲醇揮干后，貼于已制備好的檢定菌平板上，同時以滴加 30 μl甲醇的空白紙片為陰性對照。37 ℃ 恒溫培養箱培養 16～24 h 后，觀察并測量抑菌圈直徑。

1.2.5 化合物 304A 的結構鑒定 根據紫外光譜（UV）、電噴霧高分辨質譜（HR-ESI-MS）、氫譜（1H-NMR）、碳譜（13C-NMR）、無畸變極化轉移增強譜（DEPT）、1H-1H 化學位移相關譜（1H-1HCOSY）、1H-13C 異核單量子相關譜（13C-1H COSY）和1H-13C 異核多鍵相關譜（HMBC）的數據，進行譜圖解析并與相關文獻數據比對，確定化合物304A 的平面結構。

1.2.6 化合物 304A 的抑菌譜活性測定 參照CLSI 推薦方法［15］，采用瓊脂稀釋法和多點接種儀進行 MIC 測定?；衔?304A 經 DMSO 溶解后，用 MH肉湯二倍稀釋成各種所需濃度，分別加適量到平皿中；MH 瓊脂培養基融化后定量注入含304A 的平皿內混勻，使化合物的終濃度分別為0.25、0.5、1、2、4、8、16 μg/ml。檢定菌用 MH 肉湯隔夜增菌，試驗時制備成 0.5 麥氏濃度的菌懸液，1：10 稀釋后以多點接種儀吸取菌液 1～2 μl 接種于瓊脂平板表面，每點菌落數約為 104cfu。置37 ℃ 孵育 16～24 h 觀察結果，以抑制細菌生長的最低藥物濃度為 MIC 值。

2 結果

2.1 菌株 CLR304 的分子分類

菌株 CLR304 基于 16S rRNA 基因序列構建的 N-J 系統發育樹見圖1。菌株 CLR304 屬于鏈霉菌屬，與有效發表種的典型菌株 Streptomyces albogriseolus NRRL B-1305T（AJ494865）和Streptomyces viridodiastaticus NBRC 13106T（AB184317）同聚于一個進化分支并且與這兩株典型菌株相似性最高，均為 99.92%。

2.2 菌株 CLR304 的抑菌活性

菌株 CLR304 的發酵液酯提物的甲醇濃縮樣品的抑菌活性測定結果見圖2。菌株 CLR304 的發酵產物具有廣譜抑菌活性，對 MRSA、枯草芽孢桿菌及糞腸球菌活性最強（抑菌圈直徑 ＞ 17 mm），對銅綠假單胞菌和大腸埃希菌也具有較強的抑制作用（抑菌圈直徑 ＞ 12 mm），對肺炎克雷伯菌抑制活性略弱（抑菌圈直徑約為 9 mm）。

2.3 化合物 304A 的理化性質及結構鑒定

圖1 基于 16S rRNA 基因序列構建的 CLR304 及其相近菌株的 N-J 系統發育樹（節點上的數據表示自舉值，僅顯示高于 50% 的數值）Figure 1 Neighbour-Joining tree based on 16S rRNA gene sequences of strain CLR304 and related strains （The numbers at the nodes indicate the bootstrap values based on analyses of 1000 resampled data sets）

圖2 菌株 CLR304 的發酵液酯提物的甲醇濃縮樣品的抑菌活性（1：MRSA；2：枯草芽孢桿菌；3：糞腸球菌；4：銅綠假單胞菌；5：大腸埃希菌；6：肺炎克雷伯菌；A：發酵液酯提物的甲醇濃縮樣品；B：空白甲醇樣品為陰性對照）Figure 2 Antibacterial activity of concentrated sample of the ester extracts of fermentation broth produced by strain CLR304 （1：MRSA； 2： Bacillus subtilis； 3： Enterococcus faecalis； 4： Pseudomonas aeruginosa； 5： Escherichia coli； 6： Klebsiella pneumonia； A：Ester extracts of fermentation broth； B： Methanol as negative control）

化合物 304A 為淡黃色無定形粉末，易溶于DMSO、甲醇、乙醚、氯仿等有機溶劑，微溶于水。紫外光譜顯示其在 225 nm 有最大紫外吸收。HR-ESI-MS 數據表明化合物 304A ［M+H］+的測量值為 526.2550，理論值為 526.2548，分子量為525，分子式為 C28H35N3O7，不飽和度為 13。經1H-NMR、13C-NMR、DEPT、1H-1H COSY，13C-1H COSY 和 HMBC 解析及光譜數據的文獻比對，確定化合物 304A 結構如圖3 所示，為已知化合物維吉尼霉素 M1，結構解析具體過程如下。結合1H-NMR、13C-NMR、DEPT 和13C-1H COSY 的數據分析，確定化合物 304A 有 8 個季碳（δC：200.9，167.6，160.9，159.9，155.9，137.1，136.0，134.8）、11 個次甲基碳（δC：145.5，143.0，133.5，130.7，126.3，125.4，122.9，81.4，66.1，37.7，29.9），5 個亞甲基碳（δC：50.5，47.4，45.7，40.4，30.2）和4 個甲基碳（δC：19.6，18.9，12.7，12.2），共 28 個碳原子，其中 4 個為羰基碳信號（δC：200.9，167.6，160.9，159.9），11 個為烯碳信號（δC：155.9，145.5，143.0，137.1，136.0，134.8，133.5，130.7，126.3，125.4，122.9）。在1H-NMR 譜高場有 4 個甲基質子信號：33-CH3（1.60，s），32-CH3（1.11，d，J = 6.5），31-CH3（0.98，d，J = 7.5），30-CH3（0.97，d，J = 7.0），在1H-1H COSY 中 30-CH3和 31-CH3的兩個甲基質子分別與 29-CH（2.02，m）的次甲基質子相關，表明化合物中存在異丙基結構CH3（30）-CH（29）-CH3（31）；32-CH3的甲基質子信號與 4-CH（2.70，m）的次甲基質子信號相關，29-CH和 4-CH 兩個次甲基質子信號同時與 3-CH（4.95，dd，J = 10.0，1.5）的次甲基質子相關，表明存在如下結構片段：CH3（32）-CH（4）-CH（3）-CH（29）-。 HMBC 中 32-CH3的甲基質子信號分別與 C-3（δ 81.4）相關，30-CH3的甲基質子信號分別與C-3 和 C-31（δ 19.6）相關，31-CH3的甲基質子信號分別與 C-3 和 C-30（δ 18.9）相關，確證了上述結構片段的存在?；衔?304A 結構中第一對烯碳信號 C-5 和 C-6 的化學位移分別為 143.0和 125.4，其在13C-1H COSY 譜中對應的質子信號5-H（6.59，dd，J = 16.0，7.0）和 6-H（6.01，d，J = 16.5）在1H-1H COSY 中相關，J = 16.5 Hz 表明兩個烯氫質子信號處于反式，同時1H-1H COSY中 4-H 與 5-H 相關，HMBC 中 4-H 與 C-6相關，表明存在結構片段 -CH（4）-CH（5） = CH（6）-。第二對烯碳信號 C-10 和 C-11 的化學位移分別為 126.3 和 133.5，對應的質子信號 10-H（5.58，dt，J = 16.0，4.5）和 11-H（6.01，d，J = 16.5）在1H-1H COSY 中相關并處于反式。DEPT 顯示為亞甲基的 C-9 化學位移為 40.4，對應的 9-CH2兩個質子化學位移為 3.94（1H，m）和 4.22（1H，m），在1H-1H COSY 中 9-CH2的兩個質子與 10-CH烯氫質子相關，與低場中化學位移為 7.58 的8-XH 質子相關；在 HMBC 中，8-XH 質子與化學位移為 167.6 的 7-C=O 相關，表明存在結構片段 -CO（7）-XH（8）-CH2（9）-CH（10） = CH（11）-。第三對烯碳信號 C-12 和 C-13 的化學位移分別為 134.8和 130.7，HMBC 中 10-CH 質子信號與 C-12，11-CH 質子信號與 C-33（δ 12.7）、C-13，33-CH3質子信號與 C-11、C-13 遠程相關；1H-1H COSY 中13-H 與 14-H（4.81，m）相關，14-H 與 15-CH2亞甲基兩個質子信號（2.76，dd，J = 14.0，3.5）和（3.16，dd，J = 13.5，9.5）相關，因此具有如下結構片段：-CH（10） = CH（11）-C（12） = CH（13）-CH（14）-CH2（15）-，其中 14-H 較低場的化學位移表明其與雜原子（O 或 N）相連，33-CH3與季碳 C-12 相連。在1H-NMR 中，化學位移為 3.5～4.0 的區域，明顯可見 17-CH2的兩質子信號（3.72，d，J = 13.0）、（3.93，d，J = 13.0）相互偶合，形成 AB 自旋系統，HMBC 中可見 17-CH2質子信號與 C-16（δ 200.9）、C-18（δ 155.9）及 C-15（δ 47.4）相關，15-CH2的質子信號與 C-16 相關，推測存在結構片段 -CH2（15）-C（16）-CH2（17）-C（18）-，超低場的化學位移表明 C-16 為一個酮羰基碳。另一個低場的C-7 羰基碳，在 HMBC 中顯示與 5-H 和 6-H 相關，表明存在 -CH（5） = CH（6）-CO（7）-。根據以上結構解析，除雜原子外，基本確定了 C-3 到 C-18 的結構片段。

圖3 304A 的平面結構（A）及 HMBC（）和1H-1H COSY（）相關圖（B）Figure 3 Planar structure of 304A （A） and summary of HMBC （） and1H-1H COSY（） experiments of 304A in CDCl3（B）

化合物 304A 中存在由 -N（23）-CH2（24）-CH2（25）-CH（26）-CH（27）- 組成的二氫吡咯環結構，1H-1H COSY 中 24-CH2（4.35，m）的質子信號與25-CH2（2.71，m）（2.90，m）、26-CH（6.14，dd，J = 3.0，2.5）的質子信號依次相關，HMBC 中 24-H和 25-H 分別與化學位移為 137.1 的烯碳 C-27相關，構成片段 -CH2（24）-CH2（25）-CH（26） = C（27）-，24-H 的低場位移，證明 24-CH2與 C-27 通過一個氮相連，構成二氫吡咯環結構。至此，只剩在化學位移低場的 20-CH（7.88，s）尚未歸屬，其在13C-1H COSY 中對應的化學位移為 145.5，因此20 位為一個次甲基烯碳與雜原子相連。HMBC 中20-H 分別與 C-18、C-21（δ 136.0）相關，結合元素組成和不飽和度計算，證明化合物 304A 結構中還存在噁唑環。剩余兩個未解析的羰基碳：C-1（δ 160.9）和 C-22（δ 159.9）分別為酯羰基碳和酰胺羰基碳，其中 HMBC 中 3-CH 質子信號與 C-1，24-CH2亞甲基質子信號與 C-22 存在遠程相關。

綜合以上結構片段及光譜數據與文獻［16-17］的進一步比對，確定了結構中雜原子的位置，并確認化合物 304A 與維吉尼霉素 M1結構一致?；衔?304A 在 CDCl3溶劑中1H-NMR、13C-NMR、DEPT 數據如表1 所示。

2.4 化合物 304A 的抗菌活性測定結果

化合物 304A 抗細菌活性結果如表2 所示。304A 對革蘭陽性菌有較強抑制活性，如對耐甲氧西林表皮葡萄球菌（MRSE）、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）、萬古霉素中度耐藥金黃色葡萄球菌（VISA）、耐萬古霉素屎腸球菌（VRE），MIC 值均在 1～4 μg/ml 范圍內?；衔?304A 對測試的革蘭陰性菌抗菌活性 MIC ＞ 16 μg/ml，表現出弱抗菌活性或無抗菌活性。

3 討論

維吉尼霉素是 1955年由比利時盧邦大學的戴索馬教授從土壤篩選的一株弗吉尼亞鏈霉菌（Streptomyces virginiae）中分離得到［18］，維吉尼霉素具有專一抗革蘭陽性菌活性，但并不是單一組分，主要是由 M1和 S1兩種抗菌因子組成，其中M1因子為大環內酯，分子式為 C28H35N3O7，占總量的 70%～80%；S1因子為環狀多肽，分子式為C43H49N7O10，結構見圖4，占總量的 20%～30%［19］。由于維吉尼霉素毒性低，在動物體內積累極少，生物降解性好，以及在腸道菌群中不易產生抗性突變株等優勢，已成為一類功能卓越的獸用抗生素［20］，廣泛應用于畜禽配合飼料中。20 世紀90年代末，維吉尼霉素結構類似物奎奴普?。╭uinupristin）和達福普汀（dalfopristin）兩組分混合開發的注射用抗生素 synercid 已用于治療耐萬古霉素的屎腸球菌引起的重癥感染［21］。2010年開發的口服復合物NXL-103，活性是 synercid 的 4 倍以上，現已進入了 II 期臨床［22］。

表1 化合物 304A 在 CDCl3中的 NMR 數據Table 1 The NMR data of compound 304A in CDCl3

表2 化合物 304A 的抗菌譜Table 2 Antibacterial spectra of compound 304A

綜上所述，維吉尼霉素本身就是重要的藥物或藥物前體，其主要成分維吉尼霉素 M1由于產生菌不同而有不同名稱，如產生菌為 Streptomyces mitakaensis 而命名為 mikamycin A，產生菌為Streptomyces pristinaespiralis 而命名為 pristinamycin IIA［23］等，這些產生菌多為分離自土壤的鏈霉菌。本研究首次從北京房山野生檉柳來源的內生鏈霉菌中分離到維吉尼霉素 M1，這一研究結果表明作為沙生植物關鍵和優勢物種的檉柳是微生物藥物的重要資源，同時也間接提示，我國種類多樣的沙生植物內生放線菌作為微生物藥物的重要來源值得挖掘和開發。

圖4 維吉尼霉素 S1的化學結構Figure 4 Chemical structure of virginiamycin S1

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Methods Strain CLR304 was identified on the basis of 16S rRNA sequence analysis. The fermentation broth of strain CLR304 was extracted with EtOAc， and the EtOAc extract was isolated and purified by silica gel column chromatography， thin layer chromatography （TLC） and high performance liquid chromatography （HPLC）. The chemical structure of compound 304A was elucidated by combinational analysis of data from UV， HR-ESI-MS， NMR spectra and comparison with those of published data. The antibacterial activity of compound 304A was tested by agar dilution method.

Results Producing strain CLR304 was identified as Streptomyces spp. A bioactive compound named as 304A was isolated from the fermentation broth of strain CLR304 and identified as virginiamycin M1. Compound 304A showed significant antibacterial activity against drug-resistant/sensitive staphylococcus and enterococcus faecium with the MIC values of 1-4 μg/ml.

Conclusion Virginiamycin M1is found from the fermentation broth of endophytic actinomycetes from Tamarix for the first time. The study reveals that psammophytes Tamarix represent new potentially valuable resources for pharmaceutical actinomycetes.

Study on 304A produced by an endophytic streptomyces CLR304 from Tamarix with anti-MRSA bioactivity

LIU Shao-wei， LI Zhou， HU Xin-xin， YOU Xue-fu， SUN Cheng-hang

Objective To discover and identify bioactive component against MRSA from the fermentation broth produced by an endophyticstreptomyces CLR304 from Tamarix.

TAMARIX CHINENSIS；Endophytic Streptomyces；Secondary metabolites；Virginiamycin

SUN Cheng-hang， Email： chenghangsun@hotmail.com

10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2015.06.010

國家自然科學基金（81172963、81373308）

100050 北京，中國醫學科學院北京協和醫學院醫藥生物技術研究所

孫承航，Email：chenghangsun@hotmail.com

2015-09-06

www.cmbp.net.cn 中國醫藥生物技術， 2015， 10（6）：514-521

Author Affiliation： Institute of Medicinal Biotechnology， Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College，Beijing 100050， China

www.cmbp.net.cn Chin Med Biotechnol， 2015， 10（6）：514-521