車前草中幾種活性物質含量的測定

趙春 （長江大學化學與環境工程學院，湖北 荊州434023）

車前草 （Plantago asiatica L.）又名車輪菜，為車前科 （Plantaginaceae）多年生草本植物，含有黃酮類、胡蘿卜苷、桃葉珊瑚苷、車前苷、多酚、生物堿、三萜、甾醇類化合物等化合物［1～6］。車前草在我國分布廣泛，具有悠久的藥用歷史，以種子和全草入藥，中醫認為其具有抗菌、殺蟲、清熱利尿、祛痰、涼血、解毒的功效，主治水腫尿少、熱淋澀痛、暑濕瀉痢、痰熱咳嗽和痛腫瘡毒等［7～10］。本研究通過測定車前草中類黃酮、草酸、單寧和亞硝酸鹽的含量，旨在為車前草的綜合開發利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料、儀器與試劑

車前草采自長江大學東校區校園內，洗去泥土，風干，粉碎，過80目篩，密封保存備用。

試劑：蘆丁標準品、無水乙醇、硝酸鋁、氫氧化鈉、草酸、重鉻酸鉀、次甲基藍、碳酸鈉、硫酸、單寧、三氯化鐵、硫酸鋅、N－1－萘基乙二胺鹽酸鹽、對氨基苯磺酸、亞硝酸鈉、氨水等，均為市售分析純試劑。

主要儀器：722型分光光度計為上海精密科學儀器有限公司產品；植物粉碎機為上海精密科學儀器有限公司產品；EB－330H分析天平為上海精科電子天平廠產品；數顯恒溫水浴鍋、電熱恒溫鼓風干燥箱為常州國華電器有限公司產品。

1.2 活性物質含量的測定方法

類黃酮的測定采用超聲波乙醇浸提法［11］，草酸的測定采用次甲基藍－重鉻酸鉀法［12］，單寧的測定采用比色法［13］，亞硝酸鹽含量測定采用分光光度法［14］。每種處理重復4次。

1.3 加樣回收率試驗

準確稱取一定量樣品2份，一份不加入標樣，另一份加入等量標準品，按1.2所述方法測定類黃酮、草酸、單寧和亞硝酸鹽含量，計算回收率，重復4次。

2 結果與分析

2.1 車前草不同部位的類黃酮含量

以蘆丁標準溶液的濃度為橫坐標、光密度為縱坐標進行線性回歸，得到光密度 （y）與濃度 （x）的線性方程為y＝－0.0149＋0.0114 x，相關系數R＝0.9998。可見蘆丁標準溶液的濃度與光密度之間存在極顯著的線性關系。

車前草中類黃酮的含量測定結果見圖1。從圖1可知，根中類黃酮含量最高，葉中類黃酮含量次之，花中類黃酮含量最低，三者間含量差異顯著。

2.2 車前草不同部位的草酸含量

草酸標準溶液的光密度 （y）與濃度 （x）的線性方程為y＝0.0373＋0.0101x，相關系數R＝0.9998，車前草各部分草酸含量測定結果見圖2。可見，車前草葉的草酸含量最高，而花的草酸含量最低。

2.3 車前草不同部位的單寧含量

以單寧酸標準溶液的濃度為橫坐標、光密度為縱坐標進行線性回歸，得到光密度 （y）與單寧酸標準溶液濃度 （x）的線性方程為y＝0.0443＋0.005 x，相關系數R＝0.9922。可見，濃度與光密度之間存在極顯著的線性關系。

車前草各部位單寧的含量測定結果見圖3。測定結果說明，車前草葉、花中單寧含量較高，二者間無明顯差異，根中單寧含量最小。

圖1 車前草不同部位的類黃酮含量

圖2 車前草不同部位的草酸含量

2.4 車前草不同部位的亞硝酸鹽含量

以光密度為縱坐標，亞硝酸鈉標準溶液的濃度為橫坐標，光密度 （y）與亞硝酸鈉標準溶液的濃度 （x）的線性方程為y＝－0.0029＋0.7034x，相關系數R＝0.9997。

車前草根、葉、花中亞硝酸鹽含量見圖4。由圖4可知，車前草葉中亞硝酸鹽含量最高，根中亞硝酸鹽含量最低。

圖3 車前草不同部位的單寧含量

圖4 車前草不同部位的亞硝酸鹽含量

2.5 回收率

類黃酮、草酸、單寧和亞硝酸鹽回收率測定結果見表1。由表1可知，各活性物質測定回收率均達到94%以上，說明測定方法是可靠的。

表1 回收率測定結果

3 討論與小結

類黃酮、草酸、單寧和亞硝酸鹽都是植物次生代謝產物，植物中的類黃酮和單寧具有較強的生理活性，在醫藥和農業生產中有著廣泛用途。類黃酮具有降血壓、降血脂的作用，而單寧有利于心臟血管疾病的預防；草酸攝入過多會影響人體對鈣的吸收，引起低血鈣，造成骨質疏松癥；亞硝酸鹽具有很強的毒性，還會生成有強致癌性的亞硝胺。

在農業有害生物的防治中，一般認為黃酮類化合物對昆蟲具有防御作用，其防御機制或在于影響昆蟲的行為和代謝，使之發生忌避和拒食；或是破壞昆蟲正常的代謝過程，引起中毒甚至死亡。單寧一般被認為是有效的化學防御物質，對昆蟲的不利作用主要是干擾昆蟲對食物的利用，尤其是干擾腸道的消化。單寧分子能與蛋白質分子結合形成穩定的交叉鏈，能抑制酶的活性，使昆蟲不能利用鞣化的蛋白質，單寧還能與淀粉形成絡合物而影響昆蟲對淀粉的消化。植物中草酸和亞硝酸鹽含量也會影響昆蟲的取食行為。

本研究測定了車前草根、葉、花中類黃酮、草酸、單寧和亞硝酸鹽的含量，可為車前草的綜合開發利用提供參考。

［1］ 李明娟，朱琪，劉柳成，等.車前草超微粉黃酮的提取工藝研究 ［J］.中藥材，2013，36（8）：1335～1339.

［2］ 李明娟，劉磊，傅春燕，等.高效液相色譜法分析車前草中的黃酮化合物 ［J］.光譜實驗室，2013，30（3）：1437～1443.

［3］ 陳華國，張君增，周欣.響應面法優化車前草中總黃酮類化合物提取條件 ［J］.理化檢驗——化學分冊，2013，49（8）：902～905.

［4］ 吳戀，王春艷，呂維，等.藏藥大車前草中大車前苷的定性和定量分析 ［J］.成都中醫藥大學學報，2014，37（1）：48～50，59.

［5］ 顏秋萍，鄭杰，鄭揚，等.車前草中多酚的抗氧化活性 ［J］.光譜實驗室，2012，29（5）：2739～2742.

［6］ 鄭秀棉，楊莉，王崢濤.車前子的化學成分與藥理活性研究進展 ［J］.中藥材，2013，36（7）：1190～1196.

［7］ 陳紅云，申元英.車前草的不同提取物抗菌活性比較研究 ［J］.安徽農業科學，2012，40（14）：8155～8156.

［8］ 陳紅云，申元英.車前草幾種提取物的抗菌活性研究 ［J］.大理學院學報，2012，11（3）：21～23.

［9］ 梁飛，肖云麗，徐艷霞，等.車前草提取物對三種儲糧害蟲的觸殺活性研究 ［J］.湖北農業科學，2013，52（22）：5493～5495.

［10］ 楊亞軍，周秋貴，曾紅，等.車前草化學成分及新生物活性研究進展 ［J］.中成藥，2011，33（10）：1771～1776.

［11］ 杜娜娜，盛良全，蔣雪月.超聲波法提取苦丁茶總黃酮含量的工藝 ［J］.光譜實驗室，2011，28（3）：1447～1450.

［12］ 梁磊，譚賀，金朝霞，等.次甲基藍——重鉻酸鉀體系測定草酸濃度的研究 ［J］.分析測試學報，2006，25（1）：98～101.

［13］ 張國偉，易中周，矣輝，等.蒙自石榴皮中單寧的提取及其物性分析 ［J］.安徽農業科學，2008，36（18）：7529～7530.

［14］ 趙新淮，林燕，張海霞.蔬菜中亞硝酸鹽的光度測定 ［J］.理化檢驗——化學分冊，2006，42（2）：128～129.